沉淀反應(yīng)與凝集反應(yīng)(已修改)
2025-05-26 20:20 本頁面
【正文】 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 沉淀反應(yīng) （ precipitation reaction) 毛旭虎 ? 醫(yī)學(xué)檢驗系臨床微生物學(xué)及免疫學(xué)教研室 ? 二 OO二年三月 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 可溶性 抗原 +相應(yīng)抗體 肉眼可見的沉淀 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 1897年 Kraus 就發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)液（毒素）與相應(yīng) 抗血清混合出現(xiàn)沉淀 1905年 Bechhold 把抗體放在明膠中，將抗原加于 其中，發(fā)現(xiàn)沉淀反應(yīng)可在凝膠中進(jìn)行 1946年 Oudin 報告了試管免疫擴散技術(shù) 1965年 Mancini 提出單向免疫擴散技術(shù)，使定性 免疫試驗向定量化發(fā)展 免疫濁度法的出現(xiàn)，使沉淀反應(yīng)達(dá)到快速、 微量、自動化的新階段。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 根據(jù)沉淀反應(yīng)的介質(zhì)和檢測方法的不同 ,沉淀反應(yīng)可分為 : 液相內(nèi)的沉淀反應(yīng) 凝膠內(nèi)的沉淀反應(yīng) 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 第一節(jié) 液體內(nèi)沉淀試驗 根據(jù)沉淀現(xiàn)象的不同，液體內(nèi)沉淀又可分為三類： 絮狀沉淀 環(huán)狀沉淀 免疫濁度沉淀 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 一、絮狀沉淀試驗 絮狀沉淀試驗是一項經(jīng)典實驗技術(shù) 。 曾用于測定梅毒抗體的 Kahn試驗是絮狀沉淀的代表試驗 ， 現(xiàn)今已被更簡便而敏感的USR或 RPR方法替代 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 (一 ) 原理 抗原溶液與相應(yīng)抗體溶液混合 ， 在電解質(zhì)存在的條件下 ， 抗原與抗體結(jié)合出現(xiàn)可見的絮狀沉淀 。 絮狀沉淀易受抗原與抗體比例的影響 ， 由此可作為最適比測定的基本方法 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 (二 ) 操作步驟 1. 抗原稀釋法 (1) 將可溶性抗原作一系列倍比稀釋 。 (2) 各管加入一定濃度的適量抗血清 。 (3) 振搖使抗原 、 抗體充分混勻 ， 置 37℃ 孵育 。 (4) 產(chǎn)生沉淀量隨抗原量而不同 ， 以出現(xiàn)沉淀物最多的管為最適比例管 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 2. 抗體稀釋法 本法采用抗原量恒定與不同倍比稀釋度的抗體反應(yīng) ， 出現(xiàn)沉淀物最多的管為抗體最適比例管 。 3. 方陣滴定法 抗原和抗體同時稀釋 ， 亦稱棋盤 (checkerboard)滴定法 ， 是前二法的結(jié)合 ， 可一次完成抗原和抗體的滴定并找出抗原 、 抗體的最適比 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 (三 ) 方法評價 絮狀沉淀試驗方法簡單，設(shè)備要求低，敏感度較低，受抗原抗體比例影響非常明顯，目前多用以測定抗原抗體反應(yīng)的最適比。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 二、環(huán)狀沉淀試驗 環(huán)狀沉淀 (ring precipitation)試驗是由 Ascoli于 1902年建立的一種經(jīng)典的血清學(xué)定性試驗 。 用非常簡便的技術(shù)了解待測血清內(nèi)是否存在某種抗原或抗體 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 (一 ) 原理 把抗原溶液小心地加于已含抗體溶液的細(xì)試管液面上。當(dāng)對應(yīng)的抗原與抗體相遇，在界面處形成清晰的乳 白色沉淀環(huán)。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 (二 ) 操作步驟 1. 用毛細(xì)滴管吸取抗血清加于沉淀管 (內(nèi)徑 約 ~2mm)底部，避免產(chǎn)生氣泡。 2. 將抗原溶液沿管壁緩緩疊加于抗血清液面上，形成清晰的交界面。 3. 置沉淀管于室溫下使其反應(yīng)， 1~5min內(nèi) 在兩界面間呈現(xiàn)乳白色沉淀環(huán)為陽性。30min仍無沉淀環(huán)出現(xiàn)則為陰性。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗 (三 ) 方法評價 該試驗是經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)之一，簡便、快速、實用。故用于鑒定血跡和診斷炭疽 (Ascoli試驗 )。只能定性，不能定量、敏感性較低 (3~20mg/L)，對含有多個抗原抗體對的反應(yīng)系統(tǒng)缺
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