dna分子標(biāo)記的種類(已修改)
2025-05-26 12:50 本頁(yè)面
【正文】 DNA分子標(biāo)記的種類以及進(jìn)展 分子標(biāo)記的定義 ? 廣義的分子標(biāo)記 (molecular marker)是指可遺傳的并可檢測(cè)的 DNA序列或蛋白質(zhì)。 ? 狹義的分子標(biāo)記概念只是指 DNA標(biāo)記，而這個(gè)界定現(xiàn)在被廣泛采納。 理想分子標(biāo)記的界定 (1)具有高的多態(tài)性 (2)共顯性遺傳，即利用分子標(biāo)記可鑒別二倍體中雜臺(tái)和純臺(tái)基因型 (3)能明確辨別等位基因； (4)遍布整個(gè)基因組； (5)除特殊位點(diǎn)的標(biāo)記外，要求分子標(biāo)記均勻分布于整個(gè)基因組； (6)選擇中性 (即無(wú)基因多效性 )； (7)檢測(cè)手段簡(jiǎn)單、快速 (如實(shí)驗(yàn)程序易自動(dòng)化 )； (8)開(kāi)發(fā)成本和使用成本盡量低廉； (9)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)空間重復(fù)性好 (便于數(shù)據(jù)交換 )。 但是，目前發(fā)現(xiàn)的任何一種分子標(biāo)記均不能滿 足以上所有要求 DNA分子標(biāo)記分類 一、第一代分子標(biāo)記技術(shù) 以 southern雜交為核心的分子標(biāo)記技術(shù)： RELP標(biāo)記等 二、第二代分子標(biāo)記技術(shù) 基于 PCR的 DNA分子標(biāo)記： RAPD標(biāo)記、 ISSR標(biāo)記、 SSR標(biāo)記、 STS標(biāo)記等 基于 PCR與限制性酶切技術(shù)結(jié)合的 DNA標(biāo)記： AFLP標(biāo)記、CAPS標(biāo)記等 三、第三代分子標(biāo)記技術(shù) 基于單核苷酸多態(tài)性的 DNA分子標(biāo)記 :SNP標(biāo)記 四、其他幾種新型分子標(biāo)記 一、第一代分子標(biāo)記技術(shù) 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性 (restriction fragment length polymorphism，縮寫 RFLP)是發(fā)展最早的分子標(biāo)記技術(shù)。 RFLP技術(shù)的原理是檢測(cè) DNA 在限制性內(nèi)切酶酶切后形成的特定 DNA片段的大小。因此凡是可以引起酶切位點(diǎn)變異的突變?nèi)琰c(diǎn)突變 (新產(chǎn)生和去除酶切位點(diǎn) )和一段 DNA的重新組織 (如插人和缺失造成酶切位點(diǎn)問(wèn)的長(zhǎng)度發(fā)生變化 )等均可導(dǎo)致RFLP的產(chǎn)生。 流程圖 酶切 →→ 電泳→→ 標(biāo)記探針雜交 →→分析 一般選擇單拷貝探針 如果 RFLP探針是來(lái)自拷貝數(shù)可變串聯(lián)重復(fù) (Varible number of tandem repeats，縮 VNTR)．則產(chǎn)生另一類因相同或相近序列的拷貝數(shù)變化所起的多態(tài)性。凡是引起復(fù)單位的大小和序列不同、基因組中重復(fù)的數(shù)目和分布不同等均可導(dǎo)致這種多態(tài)性的產(chǎn)生。在 RFLP技術(shù)中成為分子標(biāo)記的重復(fù)序列包括 ： (1)小衛(wèi)星(minisatellite)序列：重復(fù)單位 (motif)約有堿基 l0～ 60個(gè)(也有 16～ 100個(gè)堿基一說(shuō) )，在基因組中多次出現(xiàn)。 (2)微衛(wèi)星 (microsatelite) 或簡(jiǎn)單重復(fù)序列 (simple sepuencerepeats，縮寫 SSR)：重復(fù)單位含有 1～ 5堿基 (也有 2～ 8個(gè)堿基一說(shuō) ) 二、第二代分子標(biāo)記技術(shù) 基于 PCR的 DNA分子標(biāo)記 ① 隨機(jī)引物 PCR標(biāo)記： RAPD標(biāo)記、 ISSR標(biāo)、APPCR、 DAF等 ② 特異引物 PCR標(biāo)記 :SSR標(biāo)記、 STS標(biāo)記、SCAR、 SPAR、 SSCAP、 ddF等 基于 PCR與限制性酶切技術(shù)結(jié)合的 DNA標(biāo)記 ① 限制性酶切片段的選擇性擴(kuò)增來(lái)顯示片段的多態(tài)性： AFLP標(biāo)記等 ② 對(duì) PCR擴(kuò)增片段的限制性酶切來(lái)揭示擴(kuò)增區(qū)段的多態(tài)性： CAPS標(biāo)記等 DNA(RAPD) 該技術(shù)用一個(gè) (有時(shí)用兩個(gè) )隨機(jī)引物 (一般 8～ 10個(gè)堿基 )非定點(diǎn)地?cái)U(kuò)增 DNA片段，然后用凝膠電泳分開(kāi)擴(kuò)增片段。不需要DNA探針，用一個(gè)引物可擴(kuò)增多個(gè)片段，技術(shù)簡(jiǎn)單，只需少量的 DNA樣本，成本較低， RAPD標(biāo)記一般是顯性遺傳（極少數(shù)是共顯性），但是 RAPD分析中重復(fù)性不高，由于共遷移的存在，在不同個(gè)體中出現(xiàn)相同分子量的滯后，并不能保證這些個(gè)體擁有同一條 (同源）的片段 實(shí)驗(yàn)步驟 PCR→ 電泳 → 分析 應(yīng)用 RAPD可用于對(duì)整個(gè)基因組 DNA進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè) ，也可用于構(gòu)建基因組指紋圖譜 。 品種鑒定 、 系譜
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