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食品安全現(xiàn)代生物檢測技術(shù)(已修改)

2024-09-05 15:08 本頁面
 

【正文】 第六章 食品安全現(xiàn)代生物檢測技術(shù) 第一節(jié) 免疫學(xué)檢測技術(shù) 第二節(jié) PCR檢測技術(shù) 第三節(jié) 轉(zhuǎn)基因食品的檢測技術(shù) ? 第一節(jié) 免疫學(xué)檢測技術(shù) ? 一、概述 ? 抗原與抗體的結(jié)合反應(yīng)是一切免疫測定技術(shù)的最基本原理。在此基礎(chǔ)上結(jié)合一些生化或理化方法作為信號顯示或放大系統(tǒng)即可建立免疫測定法,如放射免疫測定法、酶免疫測定法、熒光免疫測定法等。一個成功的免疫測定法必須具備 3個要素:性能優(yōu)良的抗體、靈敏和專一性的標記物和高效的分離手段。按照是否使用標記物分為標記免疫測定法和非標記免疫測定法,后者又稱為經(jīng)典免疫測定法;按反應(yīng)介質(zhì)分為均相或非均相 (免疫復(fù)合物需分離后檢測 )免疫測定法;按反應(yīng)狀態(tài)分為平衡態(tài)或非平衡態(tài)免疫測定法。按照標記物種類,標記免疫測定法又分為放射性標記測定法和非放射性標記測定法。 ? 目前最常用的免疫學(xué)檢測技術(shù)如下: ? ( 1)放射免疫測定技術(shù) ? ( 2)酶免疫測定技術(shù) ? ( 3)熒光免疫測定技術(shù) ? ( 4)發(fā)光免疫測定技術(shù) ? ( 5)膠體金免疫測定技術(shù) ? 二、酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA) ? (一) ELISA的基本原理 ? ELISA(EnzymeLinked immunosorbent assay)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。這一方法的基本原理如下。 ? ( 1)使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,井保持其免疫活性; ? ( 2)使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性.又保留酶的活性。 ? (二) ELISA的類型 ? ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。用于臨床檢驗的 ELISA主要有以下幾種類型。 ? 1 雙抗體夾心法測抗原 ? 2 雙抗原夾心法測抗體 ? 3 間接法測抗體 ? 4 競爭法測抗體 ? 5 競爭法測抗原 ? (三) ELISA的材料與試劑 ? 完整的 ELISA試劑盒包含以下各組分:已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);酶標記的抗原或抗體(結(jié)合物);酶的底物;陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);結(jié)合物及標本的稀釋液;洗滌液;酶反應(yīng)終止液。 ? 1 免疫吸附劑 ? 2 結(jié)合物 ? 3 酶的底物 ? 4 洗滌液 ? 5 酶反應(yīng)終止液 ? 6 陽性對照品和陰性對照品 ? 7 參考標準品 ? 三、磺胺二甲嘧啶的間接競爭 ELISA檢測 ? (一)人工完全抗原的合成 ? (二)合成抗原的鑒定 ? (三)抗體的制備與純化 ? (四)標準競爭抑制曲線的制作 ? (五)畜產(chǎn)品中 SM2殘留的 ELISA檢測 ? (六)方法評價 ?1 特異性 ?2 靈敏度 ?3 準確度 ?4 精確度 ? 第二節(jié) PCR檢測技術(shù) ? 一、概述 ? PCR又稱聚合酶鏈式反應(yīng) (Polymerase chain reaction),是1985年由美國的 Kary Mullis首創(chuàng)并由美國 Cetus公司開發(fā)的一項體外擴增 DNA的方法。應(yīng)用該方法可使極微量的特定 DNA片段在幾小時內(nèi)迅速擴增至百萬倍,因而一經(jīng)問世便在短短的數(shù)年內(nèi)就得到了迅速發(fā)晨和實際應(yīng)用,并在原有基礎(chǔ)上結(jié)合各種生化分子生物學(xué)技術(shù)衍生出了許多改良技術(shù)。這些技術(shù)顯示出了巨大的潛力,發(fā)揮著越來越大的
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