20xx年醫(yī)學專題—免疫細胞分泌研究進展-文庫吧
2024-11-19 04:19 本頁面
【正文】 的釋放不能直接檢測［16］。本方法常與膜電容方法聯(lián)合應用來研究分泌事件, 以相互補充。 1amp。46。3 細胞分泌的光學測量 用普通光學顯微鏡只能檢測巨大囊泡的分泌過程,而新的熒光染料的開發(fā)和顯微成像技術(shù)的發(fā)展使實時監(jiān)測小囊泡的分泌成為可能［4］。FM143和FM464等是有效的研究分泌活動的選擇性膜表面熒光標記物,它們在水相中沒有熒光, 當它們插入脂質(zhì)膜后則顯示較強的熒光, 囊泡膜胞吐后會使細胞表面熒光增加, 而胞吞回收的囊泡因吞進細胞周圍的染料而被熒光標記,這樣便能夠?qū)崟r觀察細胞的胞吐及胞吞過程。本方法的缺點是背景熒光較大, fM染料目前尚不能用于腦片等組織切片的分泌研究。另一種方法是通過基因轉(zhuǎn)染方法將熒光基因如綠色熒光蛋白(GFP)基因轉(zhuǎn)入靶細胞中并選擇性地在囊泡中表達,然后用激光掃描共聚焦熒光顯微鏡等檢測囊泡的運動過程［5］。例如, 將GFP基因與囊泡特異的前胰島素基因整合后轉(zhuǎn)入胰島INS1 β細胞中進行表達,然后用熒光成像技術(shù)實時研究活分泌囊泡的轉(zhuǎn)移、 錨定和胞吐過程。此外還有免疫熒光標記法: 多巴胺β羥化酶(DBH)在嗜鉻細胞分泌囊泡中是一種主要的膜蛋白,由于它在胞吐中會出現(xiàn)在細胞膜的表面, 隨著它與胞外液中熒光標記的DBH抗體的結(jié)合, 就能觀察到胞吐位點在細胞膜上的分布以及囊泡膜的回收過程。1amp。46。4胞內(nèi)信號分子光解方法 細胞分泌活動受很多因素的調(diào)控, 采用信使物質(zhì)瞬時釋放的方法［6］,可以定量研究各因素對分泌的影響。神經(jīng)遞質(zhì)的分泌與細胞鈣離子濃度緊密偶聯(lián)(與鈣離子濃度的3～4次方成正相關)。Ca2＋螯合物DMnitrophen和Nitrophenyl eGTA可用于快速而均勻地提升細胞內(nèi)鈣離子濃度, 將這些物質(zhì)與Ca2 染料通過膜片鉗電極或孵育的方法導入細胞內(nèi), 然后經(jīng)高能量的紫外光激發(fā),便能產(chǎn)生一個迅速的、階躍性的鈣升高,并且整個細胞鈣濃度都會均一地升高。這克服了單純電刺激引起的離子通道附近產(chǎn)生不同的鈣微區(qū)的缺點。DMnitrophen在光解前對Ca2 有很高的親和力,對靜息的細胞鈣緩沖幾乎沒有影響, 是研究細胞鈣緩沖和鈣穩(wěn)態(tài)系統(tǒng)的非常理想的材料。通過控制激發(fā)紫外光的強度, 可以用來進行細胞內(nèi)鈣離子濃度滴定,也可用于鈣結(jié)合力測定以及其他許多鈣依賴的細胞功能活動。但是它易受Mg2 結(jié)合的影響。而Nitrophenyl EGTA對Ca2 有更高的選擇性,但它在光解前對Ca2 親和力較低, 且不易被光解產(chǎn)生大的Ca2 階躍。除了Ca2 外, 許多第二信使如cAMP等都可用該方法對其細胞內(nèi)濃度進行精確控制。 2 免疫細胞分泌的細胞和分子機制 2amp。46。1 免疫細胞的離子通道和細胞功能 免疫細胞不屬于可興奮性細胞(如神經(jīng)細胞、 肌肉細胞等)之列, 但也具有某些與神經(jīng)細胞相類似的電生理特性。離子通道的活動與離子跨膜流動、膜電位的變化以及隨后的淋巴細胞激活密切相關。在大多數(shù)淋巴細胞上存在有不同的離子通道, 這些離子通道類似于神經(jīng)細胞以及肌肉細胞的離子通道,但又有其自身的特點。Na通道僅存在于少數(shù)T細胞、 T細胞株和自然殺傷細胞。電壓依賴性K通道存在于大多數(shù)T淋巴細胞、 T淋巴細胞株和巨噬細胞［7］,類似于神經(jīng)細胞上的延遲整流K通道特性。 根據(jù)其電壓激活和滅活的動力學特性以及藥理學特征可分為3種亞型, 它們隨細胞的發(fā)育狀態(tài)和功能分類不同而有所變化,可能與細胞有絲分裂有關。絲裂酶原刺激后24 h可使K電流增大。 K通道阻斷劑則能劑量依賴性地抑制有絲分裂和抗原引發(fā)的淋巴細胞的激活,可能是“K通道開放細胞膜去極化Ca2 通道開放”通路被抑制后細胞外Ca2 內(nèi)流減少所致［8］。Ca2 激活的K通道K(Ca)則由絲裂酶原引起的細胞Ca2 濃度升高激活,進而引發(fā)K外流和細胞膜的超極化。電壓依賴性Ca通道僅在B淋巴細胞上存在, 而在T淋巴細胞以及T淋巴細胞株均未見報道。但T淋巴細胞上存在一種非電壓依賴性的Ca2 通道, 由T細胞抗原所激活, 然后通過第二信使IP3, 引發(fā)細胞內(nèi)Ca2 庫釋放,增強Ca2 離子跨膜內(nèi)流或Ca2 依賴性滅活。 [!
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