【正文】 克侖特羅”。 此外,我國出口的畜禽產(chǎn)品還多次出現(xiàn)安眠酮類、雌性激素、抗生素等藥物殘留超標而被取消出口的事件。,第二十七頁，共一百二十一頁。,1995年、1996年,歐盟獸醫(yī)委員會派員對我國進行了考察和評估,認為我國的獸醫(yī)衛(wèi)生狀況達不到歐盟的要求,于是做出了從1996年8月1日起,禁止從我國進口禽肉的決定。 1997年、1998年歐盟又派員來華考察,結果仍達不到其要求。目前,我國肉、蛋、奶的出口形勢仍相當嚴峻。 我國已開始重視動物性食品中的獸藥殘留問題,制訂了各種(ɡ232。 zhǒnɡ)獸藥殘留的法律和法規(guī),修訂了《動物性食品中獸藥殘留最高限量標準》,并開始建立了全國范圍的獸藥殘留監(jiān)控體系。,第二十八頁，共一百二十一頁。,第二十九頁，共一百二十一頁。,第六章 獸藥殘留檢測(jiǎn c232。)技術,第二節(jié) 樣品(y224。ngpǐn)前處理,第三十頁，共一百二十一頁。,樣品前處理是指樣品的制備和對樣品中的待測組分進行(j236。nx237。ng)提取、凈化、濃縮的過程。 樣品前處理的目的是消除基質干擾、保護儀器、提高檢測方法的靈敏度、選擇性、準確度、精密度。 不同樣品前處理方法的選擇，需要根據(jù)樣品中危害殘留物質的特點。 殘留分析中的樣品主要是各種食用組織(肌肉、脂肪、肝、腎、皮、血液、蛋、奶及其加工食品)。 活體檢測中一般采集血漿、尿液和糞便。 屠宰場主要采集某種藥物的靶組織及其他高濃度的樣本,如肝、腎、膽汁、注射部位的組織等。,第三十一頁，共一百二十一頁。,一、生物(shēngw249。)樣品的類型,獸藥殘留分析中,最常用的生物樣品是組織樣品,其次是奶、血液和尿液樣品。 (1)動物組織 肌肉(除去可見的脂肪)中水分約占75%,蛋白質(肌漿蛋白、肌原蛋白、膠原蛋白和彈性蛋白)占19.0%、脂肪(中性脂肪、脂肪酸和磷脂)占2.5%、糖類1.2%,以及一些(yīxiē)無機鹽、維生素和酶類。 肌漿蛋白(肌紅蛋白、糖解酶)可溶于水,肌原蛋白(肌球蛋白、肌動蛋白)溶于濃鹽水,膠原蛋白和彈性蛋白(結締組織)在上述溶劑中均不溶。,第三十二頁，共一百二十一頁。,不同種類動物的食物構成和肌肉的成分,如家禽和牛的肌紅蛋白和脂肪含量存在差異,這些變化會影響分析方法的回收率或干擾(gānrǎo)檢測,因此一種動物組織的殘留分析方法對其他動物組織樣品不一定適用。 例如,用水提取雞肉和牛肉組織中呋喃唑酮,回收率在75%以上。同樣的方法提取豬肌肉樣品,回收率僅為10%,改用25%乙腈提取時回收率明顯提高,推測呋喃唑酮與豬肉中某種蛋白質結合較強。 肝或腎組織為代謝或排泄器官,殘留物濃度高,消除緩慢,因此常被作為殘留檢測的靶組織。,第三十三頁，共一百二十一頁。,(2)尿樣,尿液的主要成分是水、尿素及鹽類。它是一種良好的細菌培養(yǎng)基,因而需立即冷藏或防腐處理。 冷藏條件一般可置4℃ 冰箱內。 若欲在室溫下保存,應在收集尿樣后,立即加入防腐劑。常用的防腐劑有甲苯、氯仿或改變尿液的酸堿性,以抑制(y236。zh236。)細菌的繁殖。 加入的防腐劑是否干擾測定或與被測組分發(fā)生化學反應,應由實驗驗證,以便選取合適的防腐措施。,第三十四頁，共一百二十一頁。,在所有體液樣品(y224。ngpǐn)中,尿樣最容易獲得,并且樣品量多,內含藥物(母體藥物及代謝物)濃度高。正常尿液中僅含微量蛋白質,不需去蛋白處理。 尿中藥物大多呈結合狀態(tài),主要以葡萄苷酸和硫酸酯結合物存在,因此無論直接測定或萃取分離之前,都必須將結合態(tài)的藥物水解,使藥物游離出來。 尿樣pH變化范圍大,分析前需調節(jié)到一致的pH值。,第三十五頁，共一百二十一頁。,(3)血樣,血液采集好之后,由于激活了一系列凝血因子,血中的纖維蛋白原形成纖維蛋白,血液逐漸凝固,上層析出澄清的黃色(hu225。ngs232。)液體稱為血清(serum)。 分離血清時,可將凝結后的血液置離心機中離心,將上層血清轉入另外容器中保存,得到的血清,一般可占全血量的40%左右。,第三十六頁，共一百二十一頁。,若采血后立即將血液轉入有抗凝劑(常用肝素)的容器中,并輕輕搖勻,則血液不再凝結,放置(f224。ngzh236。)后血細胞會緩緩沉降,1~2h沉降完全,上層的黃色液體稱為血漿(plasma)。 離心使上層血漿與下層血細胞充分分離,將血漿轉移至另一容器內供分析。 血液通過抗凝獲得的血漿量,一般比血清稍多,接近全血量的50%。,第三十七頁，共一百二十一頁。,第三十八頁，共一百二十一頁。,若抗凝血不離心,保持血漿和血細胞混合在一起,則稱為全血(whole blood)。 全血樣品可冷凍貯存或直接供分析。 全血樣品放置或自貯存處取出解凍之后,可明顯分為上、下兩層,上層為血漿,下層為血細胞,但輕微搖動(y225。o d242。ng)即可混勻。 血漿和血清的化學成分與組織液相近,測定血漿或血清中藥物濃度,比全血更能反映作用部位藥濃的變化,測定方法一般也可互相通用。因為從抗凝血制備血漿的速度較快,并且分離出的血漿量比血清多,所以應用血漿比較方便。若血漿中含有抗凝劑對測定有影響,則應使用血清樣品。,第三十九頁，共一百二十一頁。,通常藥物在血漿中均與血漿蛋白(白蛋白、球蛋白、糖蛋白、脂蛋白)發(fā)生一定(yīd236。ng)程度的結合,一些藥物甚至蛋白結合率可達90%以上。因此在萃取之前,必須將結合態(tài)的藥物游離出來。,第四十頁，共一百二十一頁。,(4)奶樣,牛奶(ni nǎi)的含水量約87%,蛋白質(以酪蛋白為主)為3.3%,脂肪(甘油三酯)為3.7%,糖類(乳糖)為4.7%,以及一些無機鹽、維生素和酶類(過氧化物酶、脂肪酶等)。 奶是一種復雜的非均相體系。 乳脂球的主要成分為乳脂,表面包以由酪蛋白、類脂、酶、無機鹽和水分構成膜,使乳球能穩(wěn)定地懸浮在奶中并保護內部的乳脂免遭脂肪酶的水解,當劇烈振蕩時球膜被破壞,脂肪球即相互黏合析出。 奶中還含有大量由酪蛋白或脂蛋白構成的膠束體系,當酸化或加熱時,膠束結構解體,蛋白質沉淀析出。,第四十一頁，共一百二十一頁。,非解離性的或極性較低的藥物易由血漿向奶中擴散,導致奶中殘留。 與血漿樣品類似,奶中的藥物可與蛋白質結合。 因此在萃取之前,必須將結合態(tài)的藥物游離(y243。ul237。)出來。,第四十二頁，共一百二十一頁。,(5)蛋,禽蛋包括蛋黃和蛋清。 蛋黃的含水量約50%、蛋白質16.5%、脂肪33%、糖類0.2%,以及一些無機鹽、維生素和酶類(淀粉酶、脂肪酶、磷酸酶、肽酶和過氧化氫酶) 蛋清含水量達88%,蛋白質10.5%和極少量的碳水化合物和脂肪。 與蛋清相比較,蛋黃基本上為疏水性環(huán)境,低極性藥物(y224。ow249。)的殘留較多。,第四十三頁，共一百二十一頁。,如果需要分別測定蛋黃和蛋清中的殘留,最好將剛產(chǎn)出后的蛋分離蛋黃和蛋清,避免藥物(y224。ow249。)由蛋黃向蛋清擴散。 與尿液類似,蛋成分的pH變化范圍大,分析前需調節(jié)pH值。,第四十四頁，共一百二十一頁。,二、樣品制備(zh236。b232。i)和貯存,樣品的制備方法，依據(jù)(yīj249。)法規(guī)要求的不同和食品本身特性的差異而不同。 有的要以全樣計,有的以脂肪計。一般來說是取可食部分制備樣品(除非有其他要求)。 如對于肉類有的國家法枧規(guī)定要以脂肪計算食品安全危害物的量,有的要求以全樣來計算。,第四十五頁，共一百二十一頁。,為保證取樣的準確性、減少污染和便于保存,對組織樣品宜分取一個完整解剖部分,如一個肝葉或一側完整的腎,小動物應摘取完整的臟器,并立即密封。樣品被絞碎或勻漿(yn jiānɡ)后進行縮分。 生物樣品采樣后除立即分析外,都需要在適當條件下保存,目的是避免被測組分發(fā)生分解或產(chǎn)生其他化學變化。,第四十六頁，共一百二十一頁。,貯存(zh249。cn),冷凍保存是最常用的方法,一般冷凍溫度為20℃,此時生物樣品如血漿、尿液和組織樣品均被凍凝,可以終止樣品中酶的活性,又可以貯存樣品。 在某些情況下若收集(shōuj237。)的樣品來不及冷凍處理,可先將其置冰屑中,然后再行冷凍貯存,臨用前再融化并放至室溫后供測定。,第四十七頁，共一百二十一頁。,對于一些易代謝的藥物,如磺胺類、聚醚類、同化激素,它們的肝和腎臟樣品不宜長期存放,理想的冷凍溫度應為40℃~80℃ 。 為防止含酶樣品中被測組分進一步代謝,采樣后必須立即終止酶的活性。常采用的方法有:液氮中快速(ku224。i s249。)冷凍、微波照射、勻漿及沉淀、加入酶活性阻斷劑(通常加入氟化鈉)等。 某些生物樣品中的藥物易被空氣氧化,如兒茶酚類中的阿樸嗎啡,具有鄰苯二酚結構,易被空氣氧化產(chǎn)生醌類雜質,若收集的血漿樣品不加抗氧劑直接在15℃ 冷藏,僅能穩(wěn)定4周。但加入抗壞血酸后,則可穩(wěn)定10周。,第四十八頁，共一百二十一頁。,冷凍時,若使用玻璃容器(r243。ngq236。)貯存樣品,需注意防止溫度驟降使容器破裂,造成樣品損失或污染。而塑料容器常含有高沸點的增塑劑,可能釋放到樣品中造成污染,而且還會吸留某些藥物,引起分析誤差。 某些藥物特別是堿性藥物還會被玻璃容器表面吸附,影響樣品中藥物的定量回收,因此,必要時應將玻璃容器進行硅烷化處理。,第四十九頁，共一百二十一頁。,三、樣品(y224。ngpǐn)均勻化,對于血漿、奶、尿液樣品,可置渦旋混合器上混勻,以免造成測定誤差。 對于肌肉、組織、糞便等半固體樣品都存在均勻化這一問題。 其中肌肉和組織樣品可置勻漿機中均質,糞便樣品可加入少量甲醇或其他液體攪勻。 同時(t243。ngsh237。)還應注意取樣的代表性問題。,第五十頁，共一百二十一頁。,四、去蛋白(d224。nb225。i)處理,生物樣品如肝臟、腎臟、血漿等含有大量的蛋白質,它們能結合藥物,因此對于某些藥物的測定,必須先將與蛋白結合的藥物游離之后(zhīh242。u)再作進一步處理。 為什么要除去蛋白？？ 因為生物樣品含有大量的蛋白質,蛋白質在測定過程中會形成泡沫、渾濁或出現(xiàn)沉淀而干擾測定。蛋白質還會污染儀器或惡化測定條件,如直接進樣用液相色譜分析含蛋白質的體液樣品時,蛋白質會沉積在色譜柱上,這不僅影響柱效,而且大大縮短色譜柱的使用壽命。 目前已有很多去蛋白方法可供使用,但使用各種方法之前應了解該方法是否會導致生物樣品中的藥物發(fā)生分解或影響藥物的提取等。,注意方法(fāngfǎ)選擇,第五十一頁，共一百二十一頁。,通常去蛋白過程是將蛋白質變性處理后,把與蛋白結合的藥物解離出來,離心分離以除去蛋白。 通常除蛋白的方法是在含蛋白樣品中加入適當(sh236。d224。ng)的沉淀劑或變性劑,使蛋白質脫水而沉淀(如有機溶劑、中性鹽),有的是由于蛋白質形成不溶性鹽而析出(如一些酸類:三氯醋酸、高氯酸、磷酸、苦味酸),離心后取上清液用于分析。,第五十二頁，共一百二十一頁。,有機溶劑沉淀(ch233。ndi22