20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—第十六篇細(xì)胞因子及細(xì)胞粘附因子的測(cè)定-文庫(kù)吧
2024-11-13 20:31 本頁(yè)面
【正文】 影響；放射性污染,(1) 放射性核素?fù)饺敕?第十頁(yè)，共三十八頁(yè)。,常見(jiàn)(ch225。nɡ ji224。n)細(xì)胞因子3HTdR摻入檢測(cè)法所需細(xì)胞及參考試驗(yàn)條件,第十一頁(yè)，共三十八頁(yè)。,特點(diǎn)：不使用放射性核素， 以細(xì)胞(x236。bāo)代謝變化為增殖指征 指示細(xì)胞的增殖情況與線粒體代謝活性相關(guān),測(cè)定(c232。d236。ng)步驟類(lèi)似,相同點(diǎn),不同點(diǎn),與同位素?fù)饺敕ㄏ啾?xiānɡ bǐ),摻入物：MTT而非3HTdR； 反應(yīng)條件：選用的細(xì)胞及其濃度、 培養(yǎng)時(shí)間不同,(2) MTT 比色法,第十二頁(yè)，共三十八頁(yè)。,細(xì)胞增殖或抑制(y236。zh236。)活性檢測(cè)的MTT比色法常用靶細(xì)胞,第十三頁(yè)，共三十八頁(yè)。,對(duì)指示細(xì)胞具有破壞作用的細(xì)胞因子，若與細(xì)胞共育將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此，待測(cè)細(xì)胞因子作一系列稀釋后加至指示細(xì)胞培養(yǎng)體系，以檢測(cè)(jiǎn c232。)培養(yǎng)細(xì)胞的死細(xì)胞數(shù)作為判斷指標(biāo)，死細(xì)胞數(shù)量與細(xì)胞因子的活性呈正比。試驗(yàn)時(shí)，與細(xì)胞增殖或抑制方法一樣，以已知活性的細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照。死、活細(xì)胞情況可用同位素51Cr釋放法判斷，或應(yīng)用臺(tái)盼蘭染色死細(xì)胞后直接計(jì)數(shù)。也可通過(guò)結(jié)晶紫、萘酚藍(lán)黑、MTT、NBB等著染活細(xì)胞，再用脫色液脫出染料后酶標(biāo)儀比色測(cè)定吸光值。死細(xì)胞數(shù)、51Cr釋放量越高或比色測(cè)定的吸光值越低，表明待測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞毒活性則越高。應(yīng)用系列稀釋的細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品，制作其活性與劑量關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以此作為待測(cè)品活性的定量測(cè)定的基礎(chǔ)。,本法常用(ch225。nɡ y242。nɡ)于TNF等的測(cè)定,二、細(xì)胞毒活性測(cè)定法,基本原理,第十四頁(yè)，共三十八頁(yè)。,Wish、Hep2/c 人干擾素 L929 小鼠干擾素 Ratec 大鼠干擾素 A549 MDBK 多種族(zhǒngz)的IFNα和IFNγ,本法(běn fǎ)常用于IFN等的測(cè)定，IFN可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抑制病毒RNA和DNA合成的酶，保護(hù)細(xì)胞不受病毒感染，產(chǎn)生細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）。,VSV、EMCV及Sindbis virus等,細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)、 抑制病毒(b236。ngd)蝕斑形成或抑制病毒(b236。ngd)的產(chǎn)量,三、抗病毒活性測(cè)定法,常用于檢測(cè)抗病毒活性的細(xì)胞株,常用于攻擊細(xì)胞的病毒,檢測(cè)抗病毒活性的方法,第十五頁(yè)，共三十八頁(yè)。,TNFα和TNFβ與同一受體結(jié)合，故兩者生物學(xué)活性相似 用TNFα與TNFβ特異性中和抗體作阻斷試驗(yàn)，以區(qū)別兩類(lèi)TNF TNF活性測(cè)定靶細(xì)胞：小鼠成纖維細(xì)胞株L92LM、WEHI164.13 注意： 若選用L929細(xì)胞，其不宜(b249。y237。)生長(zhǎng)過(guò)密。 細(xì)胞被某種因素激活后，代謝增強(qiáng)，線粒體脫氫酶活性也增強(qiáng)， 著色也會(huì)加深。 MTT染色時(shí)，必須考慮待檢樣品中有無(wú)激活靶細(xì)胞的因素。,細(xì)胞毒活性測(cè)定法常用(ch225。nɡ y242。nɡ)于TNF等的測(cè)定,第十六頁(yè)，共三十八頁(yè)。,細(xì)胞病變程度分為5個(gè)等級(jí)，即： “0”，表示無(wú)明顯CPE； “1+”，CPE≤25％； “2+”，CPE為25～50％； “3+”，CPE為50～75％； “4+”，CPE為
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