輸血科操作規(guī)程-文庫吧
2024-11-04 12:41 本頁面
【正文】 ul）于試管底部，再以滴管分別加入受檢者 5％紅細(xì)胞鹽水懸液 1 滴，混和。 另取潔凈小試管(內(nèi)徑 10mm60mm)3 支，分別標(biāo)明 A、B 和 O 細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清 l 滴于試管底部，再分別以滴管加入 A、B和O型5％試劑紅細(xì)胞懸 液 l 滴，混和。 立即以 1000r／min 離心 3 min。 將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。 觀察結(jié)果時既要看有無凝集，更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于 A、B 亞型、類 B 或 cisAB 的發(fā)現(xiàn)。 凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)4+ 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3+ 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2+ 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細(xì)胞。1+ 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。177。 鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。MF 混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。注：+為凝集；為不凝集。注意事項： 分型血清必須為批批檢試劑，且在有效期內(nèi)使用；質(zhì)量性能符合要求。試劑開封后必須貼上開封日期、開封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開封后有效期為一周。 試劑紅細(xì)胞以 3 個健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原?；蚴褂煤细竦纳唐吩\斷紅細(xì)胞。試劑紅細(xì)胞有效期：自制的為 15 天，商品的為試劑有效期。試劑開封后必須貼上開封日期、開封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開封后有效期為一周。 生理鹽水啟用后，有效期為二周。 所有試劑在開封或使用時，必須檢查是否有變質(zhì)；凡可疑者，必須更換新的試劑進(jìn)行檢測工作。 試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。 按理 IgM 抗A 和抗B 與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以 4℃為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫(20—24℃)內(nèi)進(jìn)行試驗，37℃可使反應(yīng)減弱。 離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。 觀察時應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對、記錄，避免筆誤。 對于可能存在不完全抗原的時候，應(yīng)在各反應(yīng)方加入凝聚胺試劑，以檢驗不完全抗原的存在。512 對于可疑結(jié)果，必須更換所用的試劑，重新檢測。 5%紅細(xì)胞懸液的配制：用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞 3 次。根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制懸液濃度（%）壓積紅細(xì)胞（滴）鹽水（滴）1 2ml(40)5 1 (16)Rh（D）血型鑒定實驗原理紅細(xì)胞與抗 D 抗體發(fā)生凝集反應(yīng)表明該細(xì)胞有 D 抗原，反之，無凝集現(xiàn)象表明試驗的紅細(xì)胞缺少正常強(qiáng)度的 D 抗原。標(biāo)本收集和制備無菌操作收集血液標(biāo)本,收集后盡可能立即進(jìn)行實驗。如果不能立即實驗,應(yīng)將樣品貯存于 28℃。收集在 ACD、CPD、CPD－2A 液中的血液標(biāo)本,不超過 21天仍可進(jìn)行實驗，但是加 EDTA、肝素和凝集的血液標(biāo)本，實驗應(yīng)在 2 天內(nèi)進(jìn)行。儀器、試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、培養(yǎng)基、以及其他所需物品：RhD(IgM)血型定型試劑（單克隆抗體）：上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，產(chǎn)品注冊號：國藥準(zhǔn)字 S20060018,包裝、規(guī)格：每盒內(nèi)裝有 1 支試劑，10ml/支，儲存要求：存放 2—8℃，有效期內(nèi)使用。操作步驟 玻片法： 干凈玻片上加 1 滴抗 D。 再加入1滴4%5%的被檢紅細(xì)胞懸液。該紅細(xì)胞懸液可以是鹽水懸液，也可以是懸浮于自身血漿或血清中的紅細(xì)胞。 在圓形的玻片區(qū)域中混勻，前后緩慢搖晃玻片。2 分鐘左右肉眼判讀結(jié)果。不要將試劑的干燥與凝集相混淆。 如果是陰性，需要試管法重做一遍實驗。 鹽水試管法 加一滴抗 D 試劑于預(yù)先標(biāo)記好的試管中 再加 1 滴約 3%—5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液于試管中?；靹颉?離心，速度和時間可選擇以下二種之一： 轉(zhuǎn)速 1000rpm，時間1 分鐘或 3400rpm，時間 15 秒。 檢查是否溶血（溶血可能是陽性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染），然后輕輕搖晃，使細(xì)胞再懸浮起來。 觀察凝集狀況，并立即記錄結(jié)果。必要時可借助顯微鏡。 若是陰性結(jié)果，需在 37℃孵育 15 分鐘30 分鐘，然后再離心觀察結(jié)果。結(jié)果若呈陰性需進(jìn)一步確認(rèn)是否是弱 D。參考值范圍陽性反應(yīng)：出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，為 RhD 陽性。陰性反應(yīng)：紅細(xì)胞不出現(xiàn)凝集，為 RhD 陰性。方法的局限性本實驗不能凝集CategoryDVI細(xì)胞，對于陰性和弱陽性結(jié)果，按有關(guān)安全輸血規(guī)范進(jìn)行確認(rèn)實驗，必要時送血型參比實驗室進(jìn)行確認(rèn)。注意事項 試劑含有 %W/V 疊氮鈉，如果攝入會中毒。 試劑如出現(xiàn)混濁則不能使用，若開瓶使用時間較長后，最好用已知 RhD 陰性、RhD 陽性紅細(xì)胞檢查結(jié)果是否符合，以防制品污染、變質(zhì)失效，而造成錯誤。及時貼上開封時間標(biāo)簽，在效期內(nèi)使用。 由于人紅細(xì)胞的 D 抗原往往表現(xiàn)較弱，故必要時進(jìn)行顯微鏡鏡檢，以免錯判結(jié)果，特別是陰性結(jié)果時。 Rh 血型鑒定應(yīng)嚴(yán)格控制溫度與時間，因 Rh 抗原、抗體及反應(yīng)凝塊比較脆弱，觀察反應(yīng)結(jié)果時，應(yīng)輕輕側(cè)動試管，不可用力振搖。 對于結(jié)果可疑的，必須洗滌紅細(xì)胞后重新檢驗。抗體篩選和鑒定試驗原理紅細(xì)胞血型抗體分子的物理特性與血清學(xué)的反應(yīng)性之間有著直接的關(guān)系?？煞譃?Ig
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