【正文】 buvir (GS7977) Phase 3 Clinical NDA NS5B ★☆☆☆ ★★★★ Mericitabine (RG7128) Phase 2 Clinical NS5B ★★☆☆ ★★★☆ VX135 Phase 2 Clinical NS5B ★★★☆ ★★★☆ ABT333 Phase 3 Clinical NS5B PalmI/C ★★★☆ ★★★☆ BI207127 Phase 3 Clinical ThumbI/A ★★★☆ ★★★☆ BMS791325 Phase 2 Clinical ThumbI/A ★★★☆ ★★★☆ Lomibuvir(VX222) Phase 2 Clinical NS5B ThumbII/B ★★★☆ ★★★☆ ABT072 Phase 2 Clinical PalmI/C ★★★☆ ★★★☆ Setrobuvir (RG7790) Phase 2 Clinical PalmI/C ★★★☆ ★★★☆ GS9669 Phase 2 Clinical NS5B ThumbII/B ★★★☆ ★★★☆ TMC647055 Phase 2 Clinical NS5B ThumbI/A ★★★☆ ★★★☆ 10 、 HCV RNA 復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B和 NS5A。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點等） 評價 風(fēng)險 潛力 RNA 復(fù)制 ★★★☆ IDX375 No Development Reported NS5B ★★★☆ ★★★☆ Nesbuvir Discontinued NS5B MK0608 No Development Reported NS5B PSI6130 Discontinued NS5B PSI938 Phase 2 Clinical NS5B ★★★☆ ★★★☆ deleobuvir Phase 3 Clinical NS5B ★★★☆ ★★★☆ 11 Tegobuvir Phase 2 Clinical NS5B ★★★☆ ★★★☆ 12 、 HCV RNA 復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B和 NS5A。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點等） 評價 風(fēng)險 潛力 RNA 復(fù)制 ★★★☆ JTK109 Discontinued NS5B Discovery NS5B ★★★★ ★★★☆ VX759 No Development Reported NS5B Clemizole Phase 1 Clinical NS4B ★★★★ ★★★☆ DEBIO025 Phase 3 Clinical Cyclophilin 抑制劑 與其它藥物聯(lián)用， GT1 ★★☆☆ ★★★☆ miravirsen 13 、 病毒組裝和釋放 。 途徑 /新穎性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點等） 評價 風(fēng)險 潛力 釋放 ★★★☆ celgosivir Phase 2 Glucosidase inhibitors ★★★☆ ★★★☆ 、 其它方式 。 途徑 /新穎 性 藥物 進(jìn)展 備注（靶點等） 評價 風(fēng)險 潛力 利巴韋林和 IFN 連用 最早上市 療程長 副作用較大 ☆☆☆☆ ★★★☆ 疫苗 ★★★☆ GI5005 Phase 1b Therapeutic vaccine (Based on NS3Core fusion protein) ★★★☆ ★★★☆ 抗體 ★★★☆ Civacir Phase 3 AntiHCV enriched immune globulin product ★★★☆ ★★★☆ Bavituximab Phase 2 aminophospholipids on infected cells ★★★☆ ★★★☆ 多樣調(diào)節(jié) ★★★☆ Zadaxin Phase 3 A 28 amino acid peptide with immunomodulating properties ★★★☆ ★★★☆ EMZ702 Phase 2 Interferon enhancer ★★★☆ ★★★☆ 14 四、 總結(jié)和展望： 目前已有幾十種 DAAs 和 HTAs 藥物進(jìn)入臨床或已經(jīng)上市，為 HCV 的徹底治愈帶來曙光，并宣告了全口服、 多組 分 、 無干擾素 、 廣譜 、 低副作用 、 高病毒學(xué)治愈率時代即將到來。雖如此，考慮到效價比 、 服藥方便性 、 耐藥突變等因素，還是很多優(yōu)化改進(jìn)之處。 首先針對耐藥突變問題，考慮雞尾酒式療法，以兩種或三種不同作用靶點或機制的藥物進(jìn)行治療；并且，針對耐藥突變問題，臨床試驗顯示組合中需要含有至少一個高突變門檻的藥物成分。 其次，丙肝廣泛的基因類型（ 6 種基因型 100 多亞型）也是一大挑戰(zhàn)，尤其對非核苷類抑制劑以及第一代核苷類 NS3NS4A 蛋白酶抑制劑以及 NS5A 抑制劑。 綜合上述總結(jié)， 我們認(rèn)為 HCV 藥物最具潛力治療方式是將核苷聚合酶 抑制劑（ NS5B 抑制劑） 、 NS5A 抑制劑 、 蛋白酶抑制劑結(jié)合的療法。但考慮到成本優(yōu)勢，小分子的 TLR7 激動劑也有其價值。 建議選取下列化合物做起點，進(jìn)行 HCV 創(chuàng)新藥物項目開發(fā)： 核苷類 HCV 核苷聚合酶 NS5B抑制劑，此類抑制劑活性好 、耐藥性好， 并 且比較 廣譜： Sofosbuvir (GS7977) Mericitabine (RG7128) 聯(lián)苯類蛋白酶 NS5A 抑制劑，此類抑制劑活性極高，并且和其它藥物連用效果較好，然而不耐病毒突變： Daclatasvir (BMS 790052) TLR7 激動劑： 15 此類化合物也是治療 HBV 潛在藥物 。 16 第二章 基于 NS5A 抑制劑的創(chuàng)新藥物設(shè)計 一、 前言： 世界范圍內(nèi)約 億人感染 HCV，并且目前針對 HCV 最理想的治療手段是每周注射 INFα 并結(jié)合 每天兩次口服利巴韋林（ RBV）。此治療方案對 GT1 型HCV 感染者效果不明顯，并且存在明 顯副作用。針對直接抗菌藥物的開發(fā)主要集中在 NS3B/NS4A 蛋白內(nèi)抑制劑和 NS5B RNA 依賴的 RNA 聚合酶抑制劑，但是還需要其他作用機理的藥物以面對多基因 型 （ 6 種） ， 多亞型（ 100 多種）的HCV 病毒 。 NS5A在 HCV復(fù)制和組裝中起到重要作用 ， 還與宿主免疫反應(yīng)有關(guān)， 是一個比較新穎的靶點 ，此類藥物大多處在臨床階段，這給我們很多 追趕 機會 研發(fā)出中國自主的丙肝治療藥物 。并且此靶點對小分子調(diào)節(jié)劑及其敏感， BMS790052及其一系列類似物的 IC50值（ genotype 1b/bovine viral diarrhea virus replicon）達(dá)到皮摩爾級別 。而 GT1型 HCV感染者屬于難治 性基因型， 中國的丙肝患者 多數(shù)屬于此類，占 HCV患者的 %，其中 GT1a為 %，而 GT1b為 %。 BMS0790052等抑制劑的活性雖然達(dá)到較理想水平，然而還存在易被病毒突變逃逸、潛在細(xì)胞毒性、藥代特性等方面問題有待改進(jìn)。 二、 NS5A 靶點： NS5A 在 HCV 生命周期 中的復(fù)制 和組裝 階段發(fā)揮作用，如下圖一所示。此非結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)也參與若干細(xì)胞過程，比如干擾素抵抗以及凋亡調(diào)節(jié)。 NS5A 是一個含有 447 個殘基的磷蛋白，有三 個蛋白域 2。目前還沒發(fā)現(xiàn) NS5A 的 酶功能，研究顯示 NS5A 可能通過與其它的 HCV 蛋白或宿主細(xì)胞因子相互作用來發(fā)揮功能。 17 圖一 NS5A 在 HCV 生命周期中的位置 NS5A 的區(qū)域一（ 1213 殘基）包含一個鋅離子結(jié)合區(qū)和一個兩親的氮端螺旋，此螺旋能夠 促進(jìn)膜連接（ membrane association）。區(qū) 域二（ 250342 殘基）起著調(diào)節(jié)的功能，比如和蛋白激酶 PKR、 PI3K 以及 NS5B 相作用，并且，此區(qū)域也包含 IFN 敏感性決定區(qū)。最近研究又發(fā)現(xiàn)區(qū)域三（ 356447 殘基）在病毒組裝而不是 RNA 復(fù)制中起到關(guān)鍵作用。 并且，此組裝作用就是通過區(qū)域里的磷酸化作用調(diào)節(jié)的。 NS5A 區(qū)域一中的 36198 殘基晶體結(jié)構(gòu)顯示其二聚為一個 U 型結(jié)構(gòu)，并且內(nèi)表面排列一系列堿性氨基酸，此氨基酸被認(rèn)為是與病毒 RNA 結(jié)合部位。而抗NS5A 抑制劑的突變位點也在 NS5A 的氨基端附近，位于蛋白和膜之間，表明抑制劑可能就結(jié)合在二聚體結(jié)合 面。 18 圖二、 NS5A 區(qū)域一單體結(jié)構(gòu)。 區(qū)域一的分子表面， A、 C 兩圖顯示 區(qū)域一的表面電勢 ， 以不同顏色表示，紅色為酸性，白色為中性， 藍(lán)色為 堿性。 B、 D 兩圖顯示區(qū)域一的保守度，一不同顏色表示，品紅色表示 95%，淡粉紅色表示75%95%，白色表示 75%。 19 圖三、 NS5A 區(qū)域一的二聚體 結(jié)構(gòu) 。 A） 三個方向的帶狀圖。 B） 二聚體表面電勢分布。由 A 和 B圖分析可見，此二聚體在靠近氮端形成了一個相對平面的、堿性表面，并在兩個 IB 區(qū)形成了大的溝。 C） NS5A 結(jié)構(gòu)相對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的位置。 三、 NS5A 抑制劑研究進(jìn)展： 大約有 60 篇專利報告了 NS5A 抑制劑作為 HCV 治療藥物。 NS5A 抑制劑的代表性化合物是 BMS790052， 已經(jīng)進(jìn)入 3 期臨床， 結(jié)構(gòu)如下圖，其初步構(gòu)效關(guān)系已被報道 3。 Daclatasvir (BMS790052) 圖四、 NS5A 抑制劑結(jié)構(gòu)。 目前 研發(fā)較深入的 NS5A 抑制劑 總結(jié) 見表一，大部分化合物的結(jié)構(gòu)沒有披露，但根據(jù)其專利信息，可以發(fā)現(xiàn)都是 BMS790052 的結(jié)構(gòu)類似物。 20 表一、代表性 NS5A 抑制劑 Comp Company In vitro EC50 (pM) Phase 1b 1a BMS790052(daclatasvir) Bristol–Myers Squibb 9 50 3 GS5885 Gilead 4 34 2 ABT267（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US20xx172368A1 Abbott 5 14 2 GSK2336805， WO20xx091446A1 GlaxoSmithKline 8 44 2 ACH2928（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） Achillion 2–3 46 1 ACH3102（結(jié)構(gòu)未知，以專利中 代表性化合物代替） US20xx302538A1 Achillion 4 10 1 PPI461（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替）WO20xx096777A1 Presidio 10 210 1 21 續(xù)表一、代表性 NS5A 抑制劑 Comp Company In vitro EC50 (pM) Phase 1b 1a PPI668（結(jié)構(gòu)未知，以專 利中代表性化合物代替） US20xx115855A1 Presidio 10 100 1 IDX719（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US20xx150827A1 Idenix 3 8 1 EDP239（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US20xx217261A1 Enanta/Novartis 4 34 PC MK8742（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US20xx083483A1 Merck 3 4 PC 還有另外一些結(jié)構(gòu)類型，僅挑選其中高活性代表化合物，見下表： 22 表二、其它代表性 NS5A 抑制劑 Comp Company In vitro EC50 (pM) 注 1b 1a Example 1002 BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONA 15 230 Example 44 JANSSEN Ramp。D IRELAND 5 NT 四、 BMS790052(daclatasvir)研究 ： 、 BMS790052 部分活性數(shù)據(jù)： 表三、代表性 NS5A 抑制劑 BMS790052 活性數(shù)據(jù) 項目 數(shù)值 項目 數(shù)值 HCV replicon (pM) EC50 177。 HCV replicon (pM) EC90 20177。