乙肝五項修改版-文庫吧
2025-09-20 14:14 本頁面
【正文】 LISA法在臨床實驗室已得到普遍應用，特別是用于各種肝炎 標志物的檢測，但 ELISA法需時較長 ,其主要原因是由于液相中的抗原〔抗 體〕需經擴散才能與固相上的抗原或抗體反響。但作為基層醫(yī)療單位、急 診病人和手術前的應急的單個標本檢測，包括現在的血站的流動采血點獻 血員的快速篩檢是根本無法用 ELISA法來實現的。 20世紀 70年代初， FANKL 等建立了免疫膠體金技術，開始作為一種免疫標記技術而被使用，隨后逐 漸廣泛應用于免疫檢測技術。各種金標檢測條，檢測卡已被廣泛使用。相 對而言， ELISA法檢測準確性要高于金標法， 金標法檢測限為 1ng/ml,ELISA 法靈敏度為 ，國產 ELISA法試劑最高靈敏度可達 。故在 實際應用中，根據實際情況兩種方法聯合起來，特別是 在大批量檢測時可 用金標法作為初篩，這樣可大量節(jié)約時間，更快速、準確為病人效勞。 第七頁，共二十三頁。 〔 1〕將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。 〔 2〕加受檢標本：使之與固相抗體接觸反響一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。 〔 3〕加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。 〔 4〕加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反響的程度進行該抗原的定性或定量。 根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。 第八頁，共二十三頁。 雙位點一步法即在雙抗體夾心法根底上使用針對抗原分子上兩個不同表位的單克隆抗體，分別作為固相抗體和酶標抗體。測定時將待檢標本和酶標抗體同時參加進行反響，兩種抗體互不干擾，經一次溫育和洗滌后，即可參加底物進行顯色測定。 鉤狀效應：雙位點一步法中，如果待檢測標本中抗原濃度過高，過量抗原那么會分別與固相抗體和酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，類似于沉淀反響中抗原過剩的后帶現象，所得結果將低于實際的含量，這種現象稱之為鉤狀效應。 第九頁，共二十三頁。 固相抗體 底物 競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，酶標抗原和待測抗原對固相特異性抗體具有相同的結合力，因此兩者競爭結合固相特異性抗體。反響體系中，固相抗體和酶標抗原是固定限量，且前者的結合位點少于酶標和非酶標抗原的分子數量和。免疫反響后，結合于固相的酶標抗原量與標本中待檢抗原含量成反比。待檢抗原量越多，相應的結合特異性抗體越多，而酶標抗
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