【正文】 。 在 20℃ 左右時 ， 約 10天即出現(xiàn)藻群 。 用消過毒的白金絲取些藻群 ， 進(jìn)行瓊膠固體培養(yǎng)基的不通氣培養(yǎng) 。 此過程反復(fù)多次 ， 直至得到完全分離的純藻種群為止 。 此法稀釋要使用較多容器分組培養(yǎng)，比較麻煩，但較易成功。 3． 微吸管法：將水樣在載玻片上滴成綠豆粒大小的一些水滴 ，這樣可使每個水滴中有很少生物而便于分離；在解剖鏡下用微吸管（ 口徑小至 ～ ， 圓口 ， 可自行拉制 ） 。 將要分離的藻體吸出 ， 用蒸餾水或平衡礦物質(zhì)溶液沖洗數(shù)次 ， 然后主導(dǎo)成有培養(yǎng)基的小培養(yǎng)皿中培養(yǎng) ， 待生長旺盛后 ， 再擴(kuò)大培養(yǎng) 。 此法較適用于能運(yùn)動的藻類 。 4． 趨向反應(yīng)法：利用藻類的特殊趨向性 （ 如向光 、 向地等 ）不同而分離藻體 。 此過程反復(fù)幾次就可得到一定純度的藻體 。 分離效果較好 ， 只是不能應(yīng)用于不運(yùn)動的藻體 。 5． 平板分離法：在培養(yǎng)液中加入戰(zhàn)培養(yǎng)液 ％ 的瓊膠 ， 加溶解后 ， 注入培養(yǎng)皿中 ， 加蓋后用 15磅壓力 121℃ 滅菌 20分鐘 ， 即制成膠質(zhì)培養(yǎng)基 （ 也可用硅酸膠和明膠制備 ） 。 在瓊膠培養(yǎng)基放在40℃ 以下的水浴鍋內(nèi) ， 開改用吸管注入混合藻液 ， 搖勻 ， 使之分散在培養(yǎng)基平面上 。 之后 ， 可放在恒溫箱內(nèi) ， 用熒光燈照射 ， 使藻群生長 。 再經(jīng)鏡檢 ， 反復(fù)此法不斷提純 ， 即可分離出較純的藻種 。 6．固氮藍(lán)藻分離培養(yǎng)法：將一小片藻絲群接種到培養(yǎng)基上，幾天后再用滅菌白金絲挑取生出的新藻絲接種到平板培養(yǎng)基上。這樣經(jīng)幾次分離接種就得到較純的藻種。 五 、 藻種的選擇 、 接種和保存 1． 藻種的選擇： 雖然藻類種類較多 ， 但其中僅少數(shù)經(jīng)過人工培養(yǎng) 。 應(yīng)該研究在室外培養(yǎng)其他藻種的可能性和他們生產(chǎn)的潛力 ， 所選擇的生物種應(yīng)具有下列特征： ⑴ 生長迅速； ⑵ 對極端的溫度和輻射條件的耐性范圍大； ⑶ 蛋白質(zhì) ， 脂類和糖類含量高 ， 或有選擇地積累一種特殊的代謝產(chǎn)物 （ 如甘油 ） ； ⑷ 無毒性 ， 且易于收獲 。 根據(jù)系統(tǒng)的要求和特殊的方法 ， 還可有其他要求 。 2． 接種： 再分離到單純藻群后，就可接種到培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，進(jìn)而移養(yǎng)擴(kuò)大培養(yǎng)。接種方法有液體接種和干藻接種。前者是將藻液直接加入培養(yǎng)液中進(jìn)行攪拌，加入的藻種分量視水溫而定，水溫較低（ 10℃ 以內(nèi)）時，多加；約占培養(yǎng)液總量的 30～ 40％左右，水溫適宜時（ 25～ 30℃ 左右），可加 5～ 8％左右。后者是用干藻的藻體接種，接種量為 ～ ％。 3． 藻種的保存： 一旦藻種分離得到 ， 就要保存好以便在一定的時間內(nèi)供接種用 。 為此 ， 要將藻種消毒 ， 避免其他來源的污染 。 給以適當(dāng)?shù)墓庹蘸蜏囟?。 在液體培養(yǎng)中 ， 為了快速增殖 ， 可用5400lx。 再得到良好生長后 （ 1～ 2周 ） ， 培養(yǎng)液移到更低的光照條件 （ 540～ 1100lx） ， 以求緩慢生長及儲藏 。 藻類在瓊脂培養(yǎng)基上接種后的藻種 ， 先給予 2700lx光照 6～ 7天 ， 直到得到良好生長 ， 然后移到 540～ 800lx光強(qiáng)的地方 。 大多數(shù)藻類保存在室溫下 （ 15～ 20℃ ） 即可 ， 少數(shù)造中存活需較高溫度 。 藻種接代一致的頻率視物種及貯存條件而不同，單胞藻及絲狀不運(yùn)動的物種可以每六個月到十二個月移種一次，有鞭毛的物種移種次數(shù)要更頻繁些。某些藻種曾成功地做到了在液氮下長期保存。 六、管理及采收方法 藻類培養(yǎng)的管理包括培養(yǎng)基養(yǎng)料的補(bǔ)給 、 光照及溫度調(diào)節(jié) 、 CO2的補(bǔ)給 、 攪拌 、 防污等 。 在培養(yǎng)過程中 ， 補(bǔ)給的養(yǎng)料 ， 要選擇肥效速 ， 并有持久性 ， 來源較廣 ， 價格低廉的種類 。 一般都以有機(jī)肥料為補(bǔ)肥 。 光照 、 溫度的調(diào)節(jié)視種類及季節(jié)而定 。 室內(nèi)照光一般都采用白熾電燈和熒光管 。 溫度調(diào)節(jié)一般采用室內(nèi)用白熾燈照射培養(yǎng)物或用溫室、 安裝電熱管等升溫 ， 室外冬季升溫較困難 ， 主要采用玻璃棚；用冷水管道降溫 ， 或經(jīng)通風(fēng)遮陽降溫 。 CO2的補(bǔ)給一般通過空氣壓縮機(jī)或橡皮管將含 5％ CO2的空氣通過培養(yǎng)物中 。 攪拌使藻類培養(yǎng)不可少的一道工序 。 攪拌可使培養(yǎng)物均勻分布 ，水溫均勻 ， 利于藻類生長 。 攪拌的方法一般為人力攪拌 、 風(fēng)力攪拌 、空氣攪拌和磁力攪拌 。 此外還有循環(huán)流動法 。 防污在藻類培養(yǎng)中很重要，對雜藻及細(xì)菌的防治主要采用石灰、漂白粉、硫酸銅等試劑。用 1～ 。當(dāng)有浮游動物污染時，可施用化學(xué)試劑、殺蟲劑等殺滅，如硫酸銅 1～2ppm可殺滅輪蟲、纖毛蟲；漂白粉 4ppm對各種蟲類均有效；食鹽 9‰ ，可殺滅輪蟲；碘液 5‰ ，再稀釋到十萬分之一，可殺滅纖毛蟲。 培養(yǎng)物的采收的時間要適當(dāng) ， 主要根據(jù)其密度大小決定 。 采收的方法有： 1． 物理濃縮： ⑴ 離心法：國外使用最普遍 。 它利用離心力來把藻體與水液分離 ， 是藻體下沉達(dá)到濃縮目的 。 主要工具是離心機(jī) 。 ⑵ 重力沉降法：利用重力使培養(yǎng)物下沉而得到濃縮物 。 使用的工具是沉淀器 。 ⑶ 遮光法和降溫法：對趨光性強(qiáng)的藻類 ， 如衣藻等進(jìn)行遮蔽光線 ， 使培養(yǎng)物下沉而得到濃縮物 。 低溫使藻類也有下沉現(xiàn)象 2． 化學(xué)濃縮法： 用沉淀劑如明礬 、 石灰等 ， 使培養(yǎng)物下沉 ， 而得到濃縮物 。明礬 ～ ‰ ， 將之研碎 ， 加入培養(yǎng)物中攪拌 ， 半小時培養(yǎng)物大部分下沉 ， 在 6～ 12小時后 ， 全部下沉 。 石灰一般是將其 1斤溶在 100～ 200斤水中 ， 制得飽和石灰水 ， 其用量是 6％ 。 但該兩法沉淀的藻濃縮物的灰分較多 。 此外，較大體積的種類，如絲狀體、非浮游性的藻類等可用過濾法采收。采收后的藻濃縮物即可經(jīng)干燥加工成飼料或其他原料。 七 、 分析技術(shù) 1． 細(xì)胞計數(shù) — 顯微鏡法 培養(yǎng)物中的個體數(shù)測定 ， 是按照個體計數(shù)方法 ， 測定和估計培養(yǎng)物單位容積中的個體數(shù) 。 計數(shù)方法同浮游植物定量的方法 （ 見前章 ） 。 此外 ， 也可以采用血球計數(shù)法 。 2． 分光光度計法： 培養(yǎng)物的藻類密度也可用分光光度計測定 。 當(dāng)藻類密度較低時 ， 光徑中的細(xì)胞數(shù)與測量到的光密度有一簡單的幾何關(guān)系 。 在藻類密度不大時 ， 光密度大 ， 細(xì)胞數(shù)目就多 ， 即可用測得的光密度值表示細(xì)胞數(shù)目 。 3． 干重測定 測定干重的增加量是生產(chǎn)估測方法中的一個最直接的方法 ， 其步驟如下： ⑴ 取樣 — 從藻體培養(yǎng)液中取出有代表性的一小部分體積的藻液 。 取樣時在以下三點上要特別注意： a． 將培養(yǎng)物攪拌均勻 b． 快速吸取樣品以免沉積 c． 足夠多的樣品 ⑵ 分離 — 取出樣品后 ， 用過濾膜過濾或用離心法把藻體與介質(zhì)分開 。 細(xì)胞必須洗過以除去鹽分和其它污物 ， 通常是用稀釋的培養(yǎng)液或緩沖液 。 海洋藻類不能用蒸餾水洗 ， 以免質(zhì)壁分離和細(xì)胞脹破 。 ⑶ 干燥 — 選擇對特定有機(jī)體最適的烘干溫度 。 a． 避免過熱 b． 有好的重復(fù)性 c． 對同一樣品增烘 1小時后 ， 稱得統(tǒng)一重量 。 ⑷ 測定結(jié)果的表示法所得干重測定值要以單位培養(yǎng)液體積的干重表示。室外的培養(yǎng)池則用單位照光面積的干重來表示。 表 51 一些已大量培養(yǎng)利用藻類的生態(tài)適應(yīng)性 浮游動物集約化培養(yǎng)簡介 浮游動物主要包括原生動物 、 輪蟲 、 鰓足類 、 橈足類 、 糠蝦和浮游幼蟲等 。 是魚類的天然餌料 ， 尤其是水產(chǎn)重要經(jīng)濟(jì)動物的重要餌料 。 浮游動物的培養(yǎng)與藻類培養(yǎng)一樣 ， 具有重要的意義 。 下面簡述現(xiàn)在水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)上常用的浮游動物集約化培養(yǎng)的方法 。 一 、 浮游動物培養(yǎng)所需要的一般條件 對培養(yǎng)浮游動物影響較大的因素有飼養(yǎng)用水的水質(zhì) 、 水溫 、 鹽度 、 pH、含氧量 、 光照條件 、 餌料的種類和數(shù)量 、 容器的大小等 ， 現(xiàn)分述如下： ㈠ 培養(yǎng)用水：培養(yǎng)用水可用海水 、 湖泊或池沼里的水 ， 或者保存 2～ 3周的住家井水或自來水 。 在用自來水時 ， 每升水中要加入 5～ 8毫克的硫代硫酸鈉以除去水中的氯 。 飼養(yǎng)時 ， 為防止由于細(xì)菌繁殖而造成的水質(zhì)惡變 ， 最好是添加青霉素或鏈霉素之類的抗生素 。 但抗生素的效果只在 36小時之內(nèi) 。 因此 ， 如果在 10～ 12℃ 以下培養(yǎng) ， 并且注意水的交換 ， 可不添加抗生素 。 ㈡ 水溫和鹽度：在一定范圍內(nèi) ， 溫度越高其攝食速度 、 生長速度也越高。 飼養(yǎng)水溫應(yīng)與該種動物棲息場所的水溫相適應(yīng) 。 為了提高生長速度或繁殖速度 ， 應(yīng)考慮棲息現(xiàn)場的水溫變動幅度 ， 應(yīng)接近其上限 。 對飼養(yǎng)用水的鹽度問題研究較少 ， 怎樣影響浮游動物尚無充分了解 。 ㈢ pH和含氧量：培養(yǎng)用水的 pH值一般都保持 ～ 。含氧量都希望達(dá)到接近飽和的條件。如橈足類克氏紡錘鏢水蚤 Acartia clausi在高密度（ 380個／ L） 下飼養(yǎng)時，如果含氧量低于 mg/L， 就將全部死亡 。 ㈣ 光照：飼養(yǎng)浮游動物的光照條將俄中各樣 ， 其效果無明顯差異 ， 但必須避免直射日光 。 ㈤ 餌料：現(xiàn)在常用的餌料有五大類： ① 培養(yǎng)的硅藻類和植物性鞭毛蟲類 。 ② 培養(yǎng)的輪蟲類 、 枝角類和橈足類等 。 ③ 鹵蟲無節(jié)幼體 。 ④ 酵母 、 小麥粉 、 大豆粉 、 醬油粕 、 海藻粉末以及相應(yīng)配方的配合餌料等人工餌料 。 ⑤ 用網(wǎng)采集的天然浮游動物 。 ㈥ 飼養(yǎng)容器：一般以水槽、指管或土池培養(yǎng)浮游動物主要采用靜水方式培養(yǎng)。 二 、 淡水枝角類及蒙古裸腹蚤的培養(yǎng)方法 1. 淡水枝角類 : 枝角類的培養(yǎng)易于掌握 ， 但大量培養(yǎng)時需注意如下幾點： ⑴ 班塔法 （ Banta） ： 培養(yǎng)液為肥泥 1kg、 馬糞 （ 一周之久 ） 170 g、 過濾池水 10 L。 將上述培養(yǎng)液放在 15～ 18℃ 處 ， 過 3～ 4d， 用細(xì)篩絹過濾；然后用過濾池水適當(dāng)沖稀 （ 1:2～ 4） ， 便可使用 。 培養(yǎng)液要常更換 ， 以確保餌料充分供給 。 這種培養(yǎng)液培養(yǎng)的枝角類常紅色 ， 并產(chǎn)卵較多 ， 是一種良好的培養(yǎng)液 。 ⑵ 用綠藻培養(yǎng)枝角類法：單細(xì)胞綠藻 、 小球藻和柵藻等是枝角類的天然餌料 ， 可直接用于培養(yǎng)枝角類 ， 以免投餌的麻煩 。 這種單細(xì)胞培養(yǎng)液配制如下： 每立方米水中放硝酸銨 ～ 35g； 過磷酸鹽 ～ 為確保藻類的不斷繁殖 ， 需經(jīng)常追加這兩種無機(jī)鹽類 。 ⑶ 土池培養(yǎng)法：土池 1 m深 ， 注入 50cm深的水 ， 加入混合堆肥液汁 ，促使單細(xì)胞藻類和細(xì)菌大量繁殖 ， 然后移入 溞 、 裸腹 溞 等 ， 在溫度 20～25℃ 時 ， 3～ 4 d后即可大量繁殖 。 一般在良好環(huán)境下 ， 可產(chǎn) 800 g/m3。 培養(yǎng)期間要注意觀察水溫、水質(zhì)、浮游植物等，更應(yīng)觀察水蚤是否懷卵、卵形及卵數(shù)，有無冬卵，體色及消化道情況等。溞的顏色應(yīng)為淡黃色，略帶紅色或淡綠色；腸道應(yīng)為綠色或深褐色；卵應(yīng)為圓形、暗色，數(shù)量在 10～ 20個以上。如果水藻體色很淡，腸呈藍(lán)綠或黑色，卵數(shù)少，橢圓且淺綠，并出現(xiàn)大批雄溞或動亂的，同時種群中幼體數(shù)小于成體數(shù)；這都是培養(yǎng)情況惡化的象征，應(yīng)抓緊采取措施或重新培養(yǎng)。 2. 蒙古裸腹溞 : 是從內(nèi)陸鹽水中采得，現(xiàn)已成功馴化于海水中正常生長繁殖。其大量培養(yǎng)方法與淡水枝角類的相似，但用水是海水，鹽度 3032左右，溫度 25℃ 左右，適當(dāng)光照。用小球藻或微綠球藻加酵母投喂。小球藻要適當(dāng)擴(kuò)種培養(yǎng)，以便滿足大量培養(yǎng)蒙古裸腹溞的需要?？捎盟喑嘏囵B(yǎng)大量培養(yǎng)小球藻，培養(yǎng)用水要消毒，施肥等，要給以一定的光照。最大培養(yǎng)密度可達(dá) 7000~1000 /L, 生產(chǎn)量可達(dá)70g/m3?d。 三 、 輪蟲的培養(yǎng)方法 目前，用于水產(chǎn)動物育苗生產(chǎn)上室內(nèi)工廠化培養(yǎng)的輪蟲主要是褶皺臂尾輪蟲輪蟲，可以用培養(yǎng)的小球藻、扁藻、衣藻等為餌料培養(yǎng)。特別是臂尾輪蟲培養(yǎng)簡單，水溫保持20～ 25℃ ，適宜 pH值為 7～ 8，投喂小球藻時，投喂量為105～ 106個細(xì)胞／毫升。也可投喂酵母培養(yǎng)輪蟲。將 800 mL 馬糞和 1000 mL水很合在一起，煮沸約 1 h， 待冷卻后過濾，并以二倍冷沸水沖稀，也可用之培養(yǎng)輪蟲。 (一 ) 輪蟲種的分離與保種 目前使用的種輪蟲最初都是從天然水體中分離出來的 ， 這些輪蟲品系一般都經(jīng)過長期研究和實際使用證明具有優(yōu)良的品質(zhì) ， 因而生產(chǎn)所用的種輪蟲一般不需自己分離 ， 可從有關(guān) 科研 、 教學(xué)單位獲得 。 輪蟲種的分離并不困難 、 需要時可以自己進(jìn)行分離 。 在溫暖的季節(jié) (水溫 15℃ 以上 )， 海邊的小水體 、 小水塘特別是鹽度較低的水體如鹽堿灘上暫時性的小水洼中 常有輪蟲生活 ， 用浮游生物網(wǎng)撈取浮游生物樣 ， 在解剖鏡下用吸管可比較容易地將輪蟲吸出 。 輪蟲一般采用保存冬卵的方式進(jìn)行保種。在秋冬季冬卵往往大量出現(xiàn)于輪蟲培養(yǎng)池，從池底的沉淀物中可收集到大量的輪蟲卵。由于將輪蟲卵與池底污泥分離開來比較困難，可直接將含有輪蟲卵的底泥放入冰柜保存。需要時，將這種底泥從冰柜中取出，加入鹽度為 15— 25的海水，待輪蟲冬卵孵化后，用篩絹濾出輪蟲，再轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)水體中培養(yǎng)。 （ 二 ） 輪蟲的集約化培養(yǎng)