【正文】 培養(yǎng)皿中 ， 加蓋后用 15磅壓力 121℃ 滅菌 20分鐘 ， 即制成膠質(zhì)培養(yǎng)基 （ 也可用硅酸膠和明膠制備 ） 。 6．固氮藍(lán)藻分離培養(yǎng)法：將一小片藻絲群接種到培養(yǎng)基上，幾天后再用滅菌白金絲挑取生出的新藻絲接種到平板培養(yǎng)基上。 根據(jù)系統(tǒng)的要求和特殊的方法 ， 還可有其他要求 。后者是用干藻的藻體接種，接種量為 ～ ％。 在液體培養(yǎng)中 ， 為了快速增殖 ， 可用5400lx。 藻種接代一致的頻率視物種及貯存條件而不同，單胞藻及絲狀不運(yùn)動(dòng)的物種可以每六個(gè)月到十二個(gè)月移種一次，有鞭毛的物種移種次數(shù)要更頻繁些。 一般都以有機(jī)肥料為補(bǔ)肥 。 CO2的補(bǔ)給一般通過(guò)空氣壓縮機(jī)或橡皮管將含 5％ CO2的空氣通過(guò)培養(yǎng)物中 。 此外還有循環(huán)流動(dòng)法 。 培養(yǎng)物的采收的時(shí)間要適當(dāng) ， 主要根據(jù)其密度大小決定 。 ⑵ 重力沉降法：利用重力使培養(yǎng)物下沉而得到濃縮物 。明礬 ～ ‰ ， 將之研碎 ， 加入培養(yǎng)物中攪拌 ， 半小時(shí)培養(yǎng)物大部分下沉 ， 在 6～ 12小時(shí)后 ， 全部下沉 。采收后的藻濃縮物即可經(jīng)干燥加工成飼料或其他原料。 2． 分光光度計(jì)法： 培養(yǎng)物的藻類密度也可用分光光度計(jì)測(cè)定 。 取樣時(shí)在以下三點(diǎn)上要特別注意： a． 將培養(yǎng)物攪拌均勻 b． 快速吸取樣品以免沉積 c． 足夠多的樣品 ⑵ 分離 — 取出樣品后 ， 用過(guò)濾膜過(guò)濾或用離心法把藻體與介質(zhì)分開(kāi) 。 a． 避免過(guò)熱 b． 有好的重復(fù)性 c． 對(duì)同一樣品增烘 1小時(shí)后 ， 稱得統(tǒng)一重量 。 是魚(yú)類的天然餌料 ， 尤其是水產(chǎn)重要經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的重要餌料 。 在用自來(lái)水時(shí) ， 每升水中要加入 5～ 8毫克的硫代硫酸鈉以除去水中的氯 。 ㈡ 水溫和鹽度：在一定范圍內(nèi) ， 溫度越高其攝食速度 、 生長(zhǎng)速度也越高。 ㈢ pH和含氧量：培養(yǎng)用水的 pH值一般都保持 ～ 。 ㈤ 餌料：現(xiàn)在常用的餌料有五大類： ① 培養(yǎng)的硅藻類和植物性鞭毛蟲(chóng)類 。 ⑤ 用網(wǎng)采集的天然浮游動(dòng)物 。 培養(yǎng)液要常更換 ， 以確保餌料充分供給 。 ⑶ 土池培養(yǎng)法：土池 1 m深 ， 注入 50cm深的水 ， 加入混合堆肥液汁 ，促使單細(xì)胞藻類和細(xì)菌大量繁殖 ， 然后移入 溞 、 裸腹 溞 等 ， 在溫度 20～25℃ 時(shí) ， 3～ 4 d后即可大量繁殖 。如果水藻體色很淡，腸呈藍(lán)綠或黑色，卵數(shù)少，橢圓且淺綠，并出現(xiàn)大批雄溞或動(dòng)亂的，同時(shí)種群中幼體數(shù)小于成體數(shù)；這都是培養(yǎng)情況惡化的象征，應(yīng)抓緊采取措施或重新培養(yǎng)。小球藻要適當(dāng)擴(kuò)種培養(yǎng)，以便滿足大量培養(yǎng)蒙古裸腹溞的需要。特別是臂尾輪蟲(chóng)培養(yǎng)簡(jiǎn)單，水溫保持20～ 25℃ ，適宜 pH值為 7～ 8，投喂小球藻時(shí)，投喂量為105～ 106個(gè)細(xì)胞／毫升。 輪蟲(chóng)種的分離并不困難 、 需要時(shí)可以自己進(jìn)行分離 。由于將輪蟲(chóng)卵與池底污泥分離開(kāi)來(lái)比較困難，可直接將含有輪蟲(chóng)卵的底泥放入冰柜保存。 其生產(chǎn)流程與微藻的培養(yǎng)相似 ， 也可按規(guī)模的大小分為種級(jí)培養(yǎng) 、 擴(kuò)大培養(yǎng)和大量培養(yǎng)等 。 育苗廠進(jìn)行輪蟲(chóng)的大量培養(yǎng)一般采用砂濾水，種級(jí)培養(yǎng)可采用消毒水，以減少原生動(dòng)物的污染。 微藻是培養(yǎng)輪蟲(chóng)的首選餌料 ， 常用微藻主要包括小球藻 、 新月菱形藻 、 三角褐指藻、 微綠球藻 、 球等鞭金藻 、 纖細(xì)角毛藻 、 扁藻等 。 用微藻喂養(yǎng)輪蟲(chóng)時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)： ① 應(yīng)選用處于指數(shù)生長(zhǎng)期的微藻 ， 老化的藻種不利于輪蟲(chóng)的生長(zhǎng)甚至致毒； ② 直接向高密度微藻中接沖輪蟲(chóng)時(shí)要保證輪蟲(chóng)種內(nèi)沒(méi)有原生動(dòng) 物 ． 因?yàn)樵谖⒃屦D料豐富的條件下 ， 原生動(dòng)物繁殖迅速 ， 不僅浪費(fèi)餌料 ， 而且抑制輪蟲(chóng)的生長(zhǎng)； ② 對(duì)輪蟲(chóng)培養(yǎng)水體給予一定的光照 ， 微藻的生長(zhǎng)可利用培養(yǎng)液中的代謝廢物 ， 改善水質(zhì) 。鮮酵母通常放在冰柜保存。 4. 充氣 除在小型玻璃瓶?jī)?nèi)進(jìn)行輪蟲(chóng)種級(jí)培養(yǎng)外 ， 輪蟲(chóng)的培養(yǎng)一般需要充氣 ，特別是用面包酵母培養(yǎng)輪蟲(chóng)時(shí) — 定量的充氣是必不可少的 。 由于輪蟲(chóng)的耐污能力很強(qiáng) ， 很多培養(yǎng)輪蟲(chóng)自接種至收獲不換水， 這在用微藻作餌料時(shí)并不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的問(wèn)題 。 可用網(wǎng)箱濾出要換的培養(yǎng)用水 ， 然后補(bǔ)充預(yù)先調(diào)溫的過(guò)濾海水 。 換水和清底都只能部分地改善水質(zhì) ， 如果發(fā)現(xiàn)大量的原生動(dòng)物繁殖起來(lái) ， 需要對(duì)輪蟲(chóng)的培養(yǎng)水體進(jìn)行徹底的改變 ， 此時(shí)要對(duì)輪蟲(chóng)倒池 。 如果輪蟲(chóng)死殼多 ， 身體上附著污物 ， 沉底 ， 不活潑 ， 不帶卵或帶冬卵 ， 雄體山現(xiàn)等都是生長(zhǎng)不良的表現(xiàn) 。 在各種營(yíng)養(yǎng)成分中 ， 以 ω3系列不飽和脂肪酸持別是二十碳五烯酸 （ EPA） 和二十二碳六烯酸 (DHA)的缺乏造成的危害最為嚴(yán)重。 綜合考慮季節(jié) 、 培養(yǎng)的難易程度等因素 ， 以小球藻和微綠球藻較好 。 (3)將要強(qiáng)化培養(yǎng)的輪蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到強(qiáng)化容器進(jìn)行強(qiáng)化培養(yǎng)。 以強(qiáng)化輪蟲(chóng) EPA／ DHA為目的的強(qiáng)化劑種類很多 ， 一般是從魚(yú)油 、 烏賊油等海洋動(dòng)物中提取的 。 布入充氣管 ， 采用大氣泡充氣 ， 不要使用氣石 。 四 、 原生動(dòng)物的培養(yǎng)： 原生動(dòng)物的培養(yǎng)方法較多 ， 如有用植物液溶解在水中供細(xì)菌繁殖生長(zhǎng)過(guò)程中利用 ， 這時(shí)溶液混濁 ， 纖毛蟲(chóng)就可繁殖起來(lái) 。 鹵蟲(chóng)分布甚廣 ， 在海邊的鹽場(chǎng) ， 內(nèi)陸咸水湖泊均有生活 。 鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體是水產(chǎn)動(dòng)物培育初期的優(yōu)良餌料。投喂無(wú)節(jié)幼體時(shí)，應(yīng)先用自來(lái)水或海水洗凈后再使用，目的在去除去鹵蟲(chóng)孵化過(guò)程中產(chǎn)生的大量甘油和孵化水中很有的細(xì)菌、有害物質(zhì)等，避免污染育苗他。鹵蟲(chóng)成蟲(chóng)的加工在國(guó)外已有嘗試，如泰國(guó)將鹵蟲(chóng)制成蝦醬，供人們食用。孵化后 1～ 2d以內(nèi)就可把鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體用于魚(yú)苗的餌料。外層是卵外殼，呈土黃至咖啡等不同深度的顏色，這一層具有物理和機(jī)械的保護(hù)功能；中間一層稱為外皮層，有篩分作用，可阻止大于二氧化碳 (CO2)分子的分子通過(guò)；最內(nèi)一層是胚表皮，為一透明而有彈性的膜。干燥的鹵蟲(chóng)卵受溫度的影響不大，置于 273℃ 一 60℃ 并本影響其孵化率，短時(shí)間放置在 60℃ 一 90 ℃ 對(duì)孵化率也無(wú)影響。 一膠采用 150181。 在出現(xiàn)較大的降雨時(shí) ， 雨水能將這些鹵蟲(chóng)卵從岸上沖到臨近的高鹽水體中 ， 因此雨后是捕撈鹵蟲(chóng)卵的良好時(shí)機(jī) 。 (2)用飽和鹵水沖淋篩分：此步操作旨在除去比蟲(chóng)卵大和比蟲(chóng)卵小的雜質(zhì) 。m孔徑篩絹中沖洗除鹽 ， 時(shí)間不得超過(guò) 5— 10 min。 控制時(shí)間是為了防止蟲(chóng)卵過(guò)多吸收水份而啟動(dòng)孵化生理活動(dòng) ， 以免下一步的干燥處理破壞蟲(chóng)卵 。 (6)包裝：此步驟是將干燥好的蟲(chóng)卵裝入一定大小的聽(tīng)、袋等容器，以便出售和貯存。 (3)雙氧水處理：用 2％ 的 H202每升加 l0一 20 g蟲(chóng)卵充氣浸泡 30min后 ， 用清水洗凈 。最后一次吸水后立即烘干或直接孵化。 (3)飽和鹵水貯存：貯存的同時(shí)有終止蟲(chóng)卵滯育的作用 。 （ 四 ） 鹵蟲(chóng)卵的孵化 1. 孵化條件 鹵蟲(chóng)卵的孵化一般在孵化桶 、 罐 、 槽中充氣進(jìn)行 。 要得到好的孵化效果 ， 這些因子需要保持在合適的水平 。 孵化過(guò)程最好保持恒溫 ， 以保持孵化的同步進(jìn)行 。如埠口鹽場(chǎng)、竅歌鹽場(chǎng)和柯柯鹽湖的鹵蟲(chóng)卵最適孵化鹽度分別為 20和 35。 (4)充氣和溶解氧：在孵化缸的底部放置足夠的氣石 ， 孵化過(guò)程中需連續(xù)充氣 ， 使水體翻滾 ， 避免在缸底形成死角。 密度過(guò)大為維持 DO， 要增大充氣 ， 充氣過(guò)大會(huì)使幼蟲(chóng)受傷 ， 產(chǎn)生的泡沫能使蟲(chóng)卵粘附 ， 對(duì)孵化不利 。孵化時(shí)常采用人工光照，用日光燈或白熾燈從孵化缸的上方照明。為了殺滅蟲(chóng)卵表面粘附的細(xì)菌，孵化前要對(duì)蟲(chóng)卵消毒，一般用 2％一 3％的福爾馬林浸泡 10一 15min， 或用200 106的有效氯浸泡 20 min。 無(wú)節(jié)幼體收集起來(lái)后 ， 還需要將混入的空殼和末孵化的蟲(chóng)卵分離開(kāi)來(lái) ， 否則空殼被魚(yú)苗吞食能引起大批此亡 。②將從孵化器內(nèi)收集起來(lái)的無(wú)節(jié)幼體、卵殼和未孵化卵的混合物移到該水族箱內(nèi)，充氣 5min。虹吸時(shí)每次只能吸出少量的水，片刻后無(wú)節(jié)幼體又集中過(guò)來(lái)再吸一次，不斷重復(fù)這一過(guò)程直到分離結(jié)束。 末孵化卵因比重大而沉降到盆底 ， 無(wú)節(jié)幼蟲(chóng)因淡水麻醉出現(xiàn)暫時(shí)休克也下沉 ，并靠近底部 ， 空卵殼比重最輕浮在水面 。 （ 五 ） 鹵蟲(chóng)卵的去殼處理 由于鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體與末孵化的卵、卵殼難以分離，投喂時(shí)就不可避免地將大量卵殼和未孵化的卵一起吧到育苗池中，這些卵殼和未孵化的卵一方面會(huì)因腐爛或帶有細(xì)菌而引起水 體污染或?qū)е虏『?，另一方面某些養(yǎng)殖動(dòng)物會(huì)因吞食卵殼和末孵化的卵而引起腸梗塞．甚至死亡。 (2)配制去殼溶液和去殼；鹵蟲(chóng)卵殼的主要成分是脂蛋白和正鐵血紅素 ， 去殼的原理就是利用次氯酸鈉或次氯酸鈣溶液氧化去除這些物質(zhì) 。 配制去殼溶液需用 NaOH(用 NaClO時(shí)使用 ， 用量為每克干卵 )， 或 Na2CO3： [用 Ca(ClO)2時(shí)使用 ， 用量為每克干卵 g， 也可用 CaO， 每克干卵 g]來(lái)調(diào)節(jié) pH值在 10以下 。去殼時(shí)間 — 般為 5— 15 min， 時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)影響孵化率。m的篩絹收集上述已除去殼的鹵蟲(chóng)卵 ， 用清水及海水沖洗 ， 直到聞不小有氯氣味為止 。 具體作法是先用 120 181。 更長(zhǎng)時(shí)期的保存要求含水量在 10％ 以下 ， 可用飽和氯化鎂溶液進(jìn)行脫水 。②去殼卵在孵化時(shí)消耗的能雖較少，每個(gè)幼蟲(chóng)的體重顯著提高。 1. 孵化質(zhì)量 包括以下四個(gè)指標(biāo)： (1)孵化率 (孵化百分率或百分比 )：指每一百粒蟲(chóng)卵所能孵化出的無(wú)節(jié)幼體的只數(shù) 。 蟲(chóng)卵的最高孵化效率可達(dá) 30萬(wàn)只／ g。 蟲(chóng)卵的最高孵化量可達(dá) 600 mg干重／ g干蟲(chóng)卵 。根據(jù)孵化速度可以計(jì)算出何時(shí)進(jìn)行初孵幼體的收集，以便得到含有高能量的無(wú)節(jié)幼體。 3. 無(wú)節(jié)幼蟲(chóng)的脂肪酸含量及組成成分的分析 不同的脂肪酸 (特別是 ω3系列高度不飽和脂肪酸 )的組成和含量對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的餌料效果有重大影響 ， 因?yàn)轲B(yǎng)殖動(dòng)物的某些必須不飽和脂肪酸只有從食物中才能獲得 。 5. 鹵蟲(chóng)卵的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) （七）中國(guó)的鹵蟲(chóng)卵 我國(guó)沿海的鹽田和內(nèi)陸鹽湖幅員遼闊、鹵蟲(chóng)資源豐富，但我國(guó)鹵蟲(chóng)卵的應(yīng)用開(kāi)發(fā)工作起步較晚，我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)需用的鹵蟲(chóng)卵大多依賴進(jìn)口，每年耗資上千萬(wàn)美元。然而，近年的研究表明，事實(shí)并不盡如此，除中國(guó)鹵蟲(chóng)卵的原料來(lái)源背景復(fù)雜、原料的雜質(zhì)含量較高、不同產(chǎn)地的鹵蟲(chóng)卵的生物學(xué)特性有所差異外，中國(guó)由蟲(chóng)卵的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值并不比進(jìn)口鹵蟲(chóng)卵差，某些地理品系的鹵蟲(chóng)卵的主要營(yíng)養(yǎng)成分指標(biāo)還優(yōu)于進(jìn)口鹵也卵，經(jīng)適當(dāng)加工后孵化質(zhì)量亦不成問(wèn)題。 (2)分離收集初孵的鹵蟲(chóng)無(wú)節(jié)幼體 ， 按 300 ind.／ mL轉(zhuǎn)移到強(qiáng)化缸中 。 中間需再加一次強(qiáng)化劑 。 在此期間體長(zhǎng)增加了 20倍 ， 體重增加了 500倍 。 (1)養(yǎng)殖用水：通常用海水 ， 鹽度 35— 50， pH值 ， 如 pH值小于 8， 用 1g／ L的NaHCO： 調(diào)節(jié) 。 無(wú)節(jié)幼體的投放密度在 l000 ind./L以上 。 并根據(jù)腸胃飽滿情況保證餌料供應(yīng) 。 (7)充氣：鹵蟲(chóng)的耐低氧能力很強(qiáng) ， 不需要很大的充氣 ， 保證 DO在 2— 3mg／ L以上即可 ， 最好不用氣石 ， 因氣石產(chǎn)生的大量氣泡對(duì)鹵蟲(chóng)不利 。 集約化養(yǎng)殖一般在小水泥池和各種槽、缸中進(jìn)行。 開(kāi)放池養(yǎng)殖不能嚴(yán)格控制故害生物的傳播 ， 因而都是在高鹽水域中進(jìn)行放養(yǎng) ， 常見(jiàn)的是鹽田養(yǎng)殖 。 池塘的大小在 300~10000 m2不等 。 此外還應(yīng)考慮生產(chǎn)上的要求 ， 是為了得到鹵蟲(chóng)卵還是鮮活鹵蟲(chóng) ， 因不同品系鹵蟲(chóng)的卵生和卵胎生比例不同 。 常用的肥料是雞糞 ， 用量是 50~100 g / m2。待微藻生長(zhǎng)達(dá)到鼎盛時(shí)期 (透明度在 20cm以下 )要及時(shí)接種鹵蟲(chóng)幼蟲(chóng)。剛接種后很難在池中看到蟲(chóng)體，這是因?yàn)樗鼈兪チ俗丶t色并沉到水底的緣故。 (3) 換水：開(kāi)放池養(yǎng)殖不換水一般也不致引起缺氧 ， 但換水可以補(bǔ)充餌料 ， 除去池內(nèi)的有害物質(zhì) 。溶解氧只要維持在 2 mg/L就可以了， DO太低可采用加注新水的辦法來(lái)補(bǔ)充。成蟲(chóng) — 般采用紗窗制成的工具進(jìn)行拖捕，這樣年幼的蟲(chóng)體可留在池中繼續(xù)生長(zhǎng)。 第二章 水產(chǎn)餌料生物的敞池增殖 單胞藻的敞池增殖 傳統(tǒng)的單胞藻培養(yǎng)是筑建餌料室，遵循保種－接種－擴(kuò)種－生產(chǎn)性培養(yǎng)的程序，其優(yōu)點(diǎn)是能保證純種生產(chǎn)，避免原生動(dòng)物等有害生物的干擾，對(duì)貝類育苗是必須的，但對(duì)河蟹等甲殼動(dòng)物幼體來(lái)說(shuō)，采用敞池比較粗放地培養(yǎng)單胞藻更為經(jīng)濟(jì)實(shí)用。 但是在這類水體沉積物中又往往貯存著相當(dāng)多的輪蟲(chóng) 、 枝角類等濾食性浮游動(dòng)物的休眠卵 ， 而成為藻類增殖的隱患 。 （ 二 ） 清塘 用生石灰 （ 淡水 ） 和漂白粉 （ 海水 ） 按常規(guī)方法清塘即可 。 據(jù)雷衍之等 （ 1983） 測(cè)定 ， 排水池較帶水池清塘后銨鹽含量增加更快 。 （ 四 ） 施肥 據(jù)雷衍之等測(cè)定 ， 淡水養(yǎng)魚(yú)池清塘后在不施肥的情況下 。 具體用量和比例應(yīng)視培養(yǎng)對(duì)象而定 。但它們的孢子或休眠卵尚可通過(guò)水流、空氣、工具等傳播污染藻類培育池。輪蟲(chóng)對(duì)氯比較敏感。③原生動(dòng)物 上述藥物對(duì)原生動(dòng)物作用不大。通常用齒耙等簡(jiǎn)單工具即可將之除凈。因此，多數(shù)種類都是魚(yú)類、甲殼動(dòng)物和貝類容易消化、利用的餌料。②足