【正文】 ②足施有機(jī)肥。通常用齒耙等簡單工具即可將之除凈。輪蟲對氯比較敏感。 具體用量和比例應(yīng)視培養(yǎng)對象而定 。 據(jù)雷衍之等 （ 1983） 測定 ， 排水池較帶水池清塘后銨鹽含量增加更快 。 但是在這類水體沉積物中又往往貯存著相當(dāng)多的輪蟲 、 枝角類等濾食性浮游動物的休眠卵 ， 而成為藻類增殖的隱患 。成蟲 — 般采用紗窗制成的工具進(jìn)行拖捕，這樣年幼的蟲體可留在池中繼續(xù)生長。 (3) 換水：開放池養(yǎng)殖不換水一般也不致引起缺氧 ， 但換水可以補(bǔ)充餌料 ， 除去池內(nèi)的有害物質(zhì) 。待微藻生長達(dá)到鼎盛時(shí)期 (透明度在 20cm以下 )要及時(shí)接種鹵蟲幼蟲。 此外還應(yīng)考慮生產(chǎn)上的要求 ， 是為了得到鹵蟲卵還是鮮活鹵蟲 ， 因不同品系鹵蟲的卵生和卵胎生比例不同 。 開放池養(yǎng)殖不能嚴(yán)格控制故害生物的傳播 ， 因而都是在高鹽水域中進(jìn)行放養(yǎng) ， 常見的是鹽田養(yǎng)殖 。 (7)充氣：鹵蟲的耐低氧能力很強(qiáng) ， 不需要很大的充氣 ， 保證 DO在 2— 3mg／ L以上即可 ， 最好不用氣石 ， 因氣石產(chǎn)生的大量氣泡對鹵蟲不利 。 無節(jié)幼體的投放密度在 l000 ind./L以上 。 在此期間體長增加了 20倍 ， 體重增加了 500倍 。 (2)分離收集初孵的鹵蟲無節(jié)幼體 ， 按 300 ind.／ mL轉(zhuǎn)移到強(qiáng)化缸中 。 5. 鹵蟲卵的國家標(biāo)準(zhǔn) （七）中國的鹵蟲卵 我國沿海的鹽田和內(nèi)陸鹽湖幅員遼闊、鹵蟲資源豐富，但我國鹵蟲卵的應(yīng)用開發(fā)工作起步較晚，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)需用的鹵蟲卵大多依賴進(jìn)口，每年耗資上千萬美元。根據(jù)孵化速度可以計(jì)算出何時(shí)進(jìn)行初孵幼體的收集，以便得到含有高能量的無節(jié)幼體。 蟲卵的最高孵化效率可達(dá) 30萬只／ g。②去殼卵在孵化時(shí)消耗的能雖較少，每個(gè)幼蟲的體重顯著提高。 具體作法是先用 120 181。去殼時(shí)間 — 般為 5— 15 min， 時(shí)間過長會影響孵化率。 (2)配制去殼溶液和去殼；鹵蟲卵殼的主要成分是脂蛋白和正鐵血紅素 ， 去殼的原理就是利用次氯酸鈉或次氯酸鈣溶液氧化去除這些物質(zhì) 。 末孵化卵因比重大而沉降到盆底 ， 無節(jié)幼蟲因淡水麻醉出現(xiàn)暫時(shí)休克也下沉 ，并靠近底部 ， 空卵殼比重最輕浮在水面 。②將從孵化器內(nèi)收集起來的無節(jié)幼體、卵殼和未孵化卵的混合物移到該水族箱內(nèi)，充氣 5min。為了殺滅蟲卵表面粘附的細(xì)菌，孵化前要對蟲卵消毒，一般用 2％一 3％的福爾馬林浸泡 10一 15min， 或用200 106的有效氯浸泡 20 min。 密度過大為維持 DO， 要增大充氣 ， 充氣過大會使幼蟲受傷 ， 產(chǎn)生的泡沫能使蟲卵粘附 ， 對孵化不利 。如埠口鹽場、竅歌鹽場和柯柯鹽湖的鹵蟲卵最適孵化鹽度分別為 20和 35。 要得到好的孵化效果 ， 這些因子需要保持在合適的水平 。 (3)飽和鹵水貯存：貯存的同時(shí)有終止蟲卵滯育的作用 。 (3)雙氧水處理：用 2％ 的 H202每升加 l0一 20 g蟲卵充氣浸泡 30min后 ， 用清水洗凈 。 控制時(shí)間是為了防止蟲卵過多吸收水份而啟動孵化生理活動 ， 以免下一步的干燥處理破壞蟲卵 。 (2)用飽和鹵水沖淋篩分：此步操作旨在除去比蟲卵大和比蟲卵小的雜質(zhì) 。 一膠采用 150181。外層是卵外殼，呈土黃至咖啡等不同深度的顏色，這一層具有物理和機(jī)械的保護(hù)功能；中間一層稱為外皮層，有篩分作用，可阻止大于二氧化碳 (CO2)分子的分子通過；最內(nèi)一層是胚表皮，為一透明而有彈性的膜。鹵蟲成蟲的加工在國外已有嘗試，如泰國將鹵蟲制成蝦醬，供人們食用。 鹵蟲無節(jié)幼體是水產(chǎn)動物培育初期的優(yōu)良餌料。 四 、 原生動物的培養(yǎng)： 原生動物的培養(yǎng)方法較多 ， 如有用植物液溶解在水中供細(xì)菌繁殖生長過程中利用 ， 這時(shí)溶液混濁 ， 纖毛蟲就可繁殖起來 。 以強(qiáng)化輪蟲 EPA／ DHA為目的的強(qiáng)化劑種類很多 ， 一般是從魚油 、 烏賊油等海洋動物中提取的 。 綜合考慮季節(jié) 、 培養(yǎng)的難易程度等因素 ， 以小球藻和微綠球藻較好 。 如果輪蟲死殼多 ， 身體上附著污物 ， 沉底 ， 不活潑 ， 不帶卵或帶冬卵 ， 雄體山現(xiàn)等都是生長不良的表現(xiàn) 。 可用網(wǎng)箱濾出要換的培養(yǎng)用水 ， 然后補(bǔ)充預(yù)先調(diào)溫的過濾海水 。 4. 充氣 除在小型玻璃瓶內(nèi)進(jìn)行輪蟲種級培養(yǎng)外 ， 輪蟲的培養(yǎng)一般需要充氣 ，特別是用面包酵母培養(yǎng)輪蟲時(shí) — 定量的充氣是必不可少的 。 用微藻喂養(yǎng)輪蟲時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)： ① 應(yīng)選用處于指數(shù)生長期的微藻 ， 老化的藻種不利于輪蟲的生長甚至致毒； ② 直接向高密度微藻中接沖輪蟲時(shí)要保證輪蟲種內(nèi)沒有原生動 物 ． 因?yàn)樵谖⒃屦D料豐富的條件下 ， 原生動物繁殖迅速 ， 不僅浪費(fèi)餌料 ， 而且抑制輪蟲的生長； ② 對輪蟲培養(yǎng)水體給予一定的光照 ， 微藻的生長可利用培養(yǎng)液中的代謝廢物 ， 改善水質(zhì) 。 育苗廠進(jìn)行輪蟲的大量培養(yǎng)一般采用砂濾水，種級培養(yǎng)可采用消毒水，以減少原生動物的污染。由于將輪蟲卵與池底污泥分離開來比較困難，可直接將含有輪蟲卵的底泥放入冰柜保存。特別是臂尾輪蟲培養(yǎng)簡單，水溫保持20～ 25℃ ，適宜 pH值為 7～ 8，投喂小球藻時(shí)，投喂量為105～ 106個(gè)細(xì)胞／毫升。如果水藻體色很淡，腸呈藍(lán)綠或黑色，卵數(shù)少，橢圓且淺綠，并出現(xiàn)大批雄溞或動亂的，同時(shí)種群中幼體數(shù)小于成體數(shù)；這都是培養(yǎng)情況惡化的象征，應(yīng)抓緊采取措施或重新培養(yǎng)。 培養(yǎng)液要常更換 ， 以確保餌料充分供給 。 ㈤ 餌料：現(xiàn)在常用的餌料有五大類： ① 培養(yǎng)的硅藻類和植物性鞭毛蟲類 。 ㈡ 水溫和鹽度：在一定范圍內(nèi) ， 溫度越高其攝食速度 、 生長速度也越高。 是魚類的天然餌料 ， 尤其是水產(chǎn)重要經(jīng)濟(jì)動物的重要餌料 。 取樣時(shí)在以下三點(diǎn)上要特別注意： a． 將培養(yǎng)物攪拌均勻 b． 快速吸取樣品以免沉積 c． 足夠多的樣品 ⑵ 分離 — 取出樣品后 ， 用過濾膜過濾或用離心法把藻體與介質(zhì)分開 。采收后的藻濃縮物即可經(jīng)干燥加工成飼料或其他原料。 ⑵ 重力沉降法：利用重力使培養(yǎng)物下沉而得到濃縮物 。 此外還有循環(huán)流動法 。 一般都以有機(jī)肥料為補(bǔ)肥 。 在液體培養(yǎng)中 ， 為了快速增殖 ， 可用5400lx。 根據(jù)系統(tǒng)的要求和特殊的方法 ， 還可有其他要求 。 5． 平板分離法：在培養(yǎng)液中加入戰(zhàn)培養(yǎng)液 ％ 的瓊膠 ， 加溶解后 ， 注入培養(yǎng)皿中 ， 加蓋后用 15磅壓力 121℃ 滅菌 20分鐘 ， 即制成膠質(zhì)培養(yǎng)基 （ 也可用硅酸膠和明膠制備 ） 。 此過程反復(fù)多次 ， 直至得到完全分離的純藻種群為止 。 2． 稀釋法：該法源于中野治房 （ 1933） 的方法 。 純培養(yǎng)比較困難 ， 一般的分離培養(yǎng)往往只能做到單種培養(yǎng) 。 4H2O） 23mg 硫酸銅 （ CuSO4 水生 6號培養(yǎng)液中 ， 藻類呈草綠色 ， 色素不夠正常 ， 但生長繁殖迅速 。 然而 ， 這些微量元素的組分對藻類生長是否必須卻不能總能顯示 。 c． 氮源：硝酸鹽 、 氨和尿素常用作配方中的氮源 ， 根據(jù)造中的性能和pH的最適點(diǎn)而定 。優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡單 ， 無需動力 ， 水泵及大量的 CO2及通氣設(shè)備 。 這種培養(yǎng)方式 ， 成本高 ， 好控制 ，產(chǎn)量亦穩(wěn)定 。 今后 ， 隨著養(yǎng)殖事業(yè)的發(fā)展 ， 對一些新品種的養(yǎng)殖以及解決某些品種幼魚的餌料 ， 必然涉及到藻類的培養(yǎng) 。第五篇 水產(chǎn)餌料生物的培養(yǎng) （增殖） 第一章 水產(chǎn)餌料生物的室內(nèi)培養(yǎng) 藻類培養(yǎng)方法簡介 藻類 ， 特別是單細(xì)胞藻類的營養(yǎng)豐富 ， 含有動物和人生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì) 。 因此 ， 有必要了解藻類培養(yǎng)的基礎(chǔ)知識 。 2． 開放式培養(yǎng)：將藻類培養(yǎng)于敞開的容器 （ 如水泥池 、 管道 、 木盆等 ）中 。 ⑶半開放循環(huán)培養(yǎng)：半開放培養(yǎng)是指培養(yǎng)容器或池、槽等場所雖仍敞開，但有些部分密閉，或用塑料布覆蓋。 藻類的生長主要依賴氮的可利用性 。 為增加微量元素的穩(wěn)定性 ， 常用檸檬酸鹽和 EDTA作為螯合劑 。 土壤浸出液是用田園土壤按水與圖 2:1的比例 ， 攪勻浸泡后的上層清液 ， 用前煮一小時(shí)后鏡檢 ， 發(fā)現(xiàn)污染生物 ， 應(yīng)再加溫消毒后使用 。 5H2O） 10mg 氯化錳 （ MnCl2 決定培養(yǎng)哪一種藻類 ， 主要根據(jù)培養(yǎng)的目的要求 ， 及某一種類的生物學(xué)特征。 用已消毒試管 5只 ， 在第一管盛蒸餾水 10mL， 第 2～ 5管都裝 5mL， 用高壓蒸汽消毒 ， 待冷卻后 ， 第 1管用滴管滴入混合藻液 1～ 2滴 ， 充分振蕩 ， 使均勻稀釋 。 此法稀釋要使用較多容器分組培養(yǎng)，比較麻煩，但較易成功。 在瓊膠培養(yǎng)基放在40℃ 以下的水浴鍋內(nèi) ， 開改用吸管注入混合藻液 ， 搖勻 ， 使之分散在培養(yǎng)基平面上 。 2． 接種： 再分離到單純藻群后，就可接種到培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，進(jìn)而移養(yǎng)擴(kuò)大培養(yǎng)。 再得到良好生長后 （ 1～ 2周 ） ， 培養(yǎng)液移到更低的光照條件 （ 540～ 1100lx） ， 以求緩慢生長及儲藏 。 光照 、 溫度的調(diào)節(jié)視種類及季節(jié)而定 。 防污在藻類培養(yǎng)中很重要，對雜藻及細(xì)菌的防治主要采用石灰、漂白粉、硫酸銅等試劑。 使用的工具是沉淀器 。 七 、 分析技術(shù) 1． 細(xì)胞計(jì)數(shù) — 顯微鏡法 培養(yǎng)物中的個(gè)體數(shù)測定 ， 是按照個(gè)體計(jì)數(shù)方法 ， 測定和估計(jì)培養(yǎng)物單位容積中的個(gè)體數(shù) 。 細(xì)胞必須洗過以除去鹽分和其它污物 ， 通常是用稀釋的培養(yǎng)液或緩沖液 。 浮游動物的培養(yǎng)與藻類培養(yǎng)一樣 ， 具有重要的意義 。 飼養(yǎng)水溫應(yīng)與該種動物棲息場所的水溫相適應(yīng) 。 ② 培養(yǎng)的輪蟲類 、 枝角類和橈足類等 。 這種培養(yǎng)液培養(yǎng)的枝角類常紅色 ， 并產(chǎn)卵較多 ， 是一種良好的培養(yǎng)液 。 2. 蒙古裸腹溞 : 是從內(nèi)陸鹽水中采得，現(xiàn)已成功馴化于海水中正常生長繁殖。也可投喂酵母培養(yǎng)輪蟲。需要時(shí)，將這種底泥從冰柜中取出，加入鹽度為 15— 25的海水，待輪蟲冬卵孵化后，用篩絹濾出輪蟲，再轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)水體中培養(yǎng)。 （ 1） 鹽度 褶皺臂尾輪蟲的適應(yīng)鹽度范圍很廣 ， 在鹽度為 1— 250的水中均能生活 ， 比較喜好鹽度較低的海水 ， 最適鹽度范圍因品系不同而不同 。 雖然微藻是輪蟲最理想的餌料，但由于輪蟲的大量培養(yǎng)需要的餌料很多，通過培養(yǎng)微藻來繁殖輪蟲往往不能滿足生產(chǎn)的需要，必須尋找低成本的替代餌料。 充氣的作用一是補(bǔ)充氧氣 ，二是防止餌料下沉 。 一般每日換水一次 ， 換水量為 50％ 。 輪蟲密度的檢查可用肉眼估計(jì)，但用鏡檢精確計(jì)數(shù)較為科學(xué)。 (1)強(qiáng)化培養(yǎng)一般在玻璃鋼桶內(nèi)進(jìn)行 ， 也可在小型的水泥池內(nèi)進(jìn)行 。 這類強(qiáng)化劑含有多種不飽和脂肪酸和維生素 ， 是經(jīng)乳化制成的乳濁液 ， 使用時(shí)比較容易與水混合 。 具體方法為： 雜草 50克 、 自來水 1000mL， 煮沸 2 h， 放置 1晝夜后過濾 ， 以濾液為培養(yǎng)液 ， 用顯微鏡從野外污水中吸選纖毛蟲， 接種于培養(yǎng)液 ， 在 20℃ 下培養(yǎng)一周 ， 能繁生大量纖毛蟲。它在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用日趨廣泛，地位也日趨重要。由于鹵蟲蛋白質(zhì)含量豐富，是魚類和甲殼類的良好餌料，且飼養(yǎng)容易，天然資源量很大，有望取代魚粉成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)最重要的蛋白質(zhì)源。 卵殼內(nèi)為胚胎，一般處于滯育期。m孔徑的篩絹縫制而成的小網(wǎng)在鹽田 、 鹽湖的岸邊撈取 。 先用 1mm和 ， 再用150181。 (5)干燥：用淡水分離后的蟲卵應(yīng)盡快將含水量降到 10％ 以下 ，只有在此含水量以下 ， 蟲卵的生理活動才能停止 。 此法加工的蟲卵適于直接孵化 。 這是 — 種簡單實(shí)用的儲存鹵蟲卵的方法 ， 在沒有鹵水的地區(qū)可用粗鹽代替 。 (1)溫度：孵化水溫要維持在 25℃ 一 30℃ ， 最好 28℃ 。有些品牌的鹵蟲卵推薦使用鹽度為 15的海水。 一般采用的蟲卵密度為 1— 3g／ L。 在前述的孵化條件下，孵化24— 36 h。③ 用黑布罩住水族箱，在水族箱的一角開一小孔，并在距該孔 10cm處放一只 100W燈泡，靜置可見無節(jié)幼體趨光不斷向此處集中。 ② 用虹吸法將無節(jié)幼體吸入網(wǎng)袋內(nèi) ， 濾去淡水 。 常用的去殼溶液是次氯酸鹽 [NaClO或 Ca(ClO)2]、 pH值穩(wěn)定劑和海水按一定比例配制而成的 。 (3)清洗和停止去殼液的氧化作用：當(dāng)在解剖鏡下看不見咖啡色的卵殼時(shí) ， 即表示去殼完畢 ， 此時(shí)去殼溶液的溫度不再上升 。m篩絹收集去殼卵 ， 然后濾去水分 ， 用飽和鹵水浸泡 ，飽和鹵水用量為每克干卵 10 mL， 浸泡 2 h后更換鹵水或加鹽一次 。 （六）鹵蟲卵的質(zhì)量評價(jià) 鹵蟲卵的質(zhì)量可以從兩個(gè)方面來評價(jià) 。 這個(gè)數(shù)值能表示出蟲卵的孵出情況和雜質(zhì)含量 。 2. 鹵蟲卵的生物學(xué)測定 不同品系的鹵蟲卵及其所孵出的無節(jié)幼體的大小不同， 卵殼的厚度也不相同 。 80年代起開始在沿海地區(qū)進(jìn)行鹵蟲卵的加工工作，并有產(chǎn)品出口。 (3)按 300mg／ L 強(qiáng)化水體的量稱取強(qiáng)化劑 ， 加少量水混勻后轉(zhuǎn)移到強(qiáng)化缸中 。 ② 鹵蟲發(fā)育過程中 ， 幼體與成體的環(huán)境要求沒有區(qū)別 ， 因而不必改變養(yǎng)殖的環(huán)境及設(shè)施 。 (4)投餌：所用餌