基因工程的基本操作程序-文庫吧
2024-12-28 17:54 本頁面
【正文】 術(shù)擴增 目的基因 定義： PCR是 多聚酶鏈式反應 的縮寫，是一項在 生物體外 復制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)，通過這一技術(shù)，可以在短時間內(nèi)大量擴增目的基因。 原理： 它是利用 DNA雙鏈復制的原理，將基因的核苷酸序列不斷地加以復制，使其數(shù)量呈 指數(shù)方式增長 (約 2n，其中 n為擴增循環(huán)的次數(shù)） 。 基本前提： 要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成 引物 。 過程： （ 1）加熱至 90℃ ~95℃ ，使雙鏈 DNA模板兩條鏈 之 間的氫鍵打開，變成單鏈 DNA，作為互補鏈聚 合反應的模板。 (DNA變性） （ 2）將溫度降至 55℃ ~60℃ ，使兩種 引物 分別與 模板 DNA的一端互補序列 互補配對 。 （退火） （ 3）將溫度升至 70℃ ~75℃ ，在 耐高溫的 DNA聚合 酶催化 作用下，使 DNA鏈延伸。 （延伸） 利用 PCR技術(shù)擴增目的基因 PCR擴增儀 人工合成 目的基因 基因較小，核苷酸序列已知，可以利用 DNA合成儀人工合成 . 二、 基因 表達載體 的構(gòu)建 基因表達載體 的模式圖 抗生素 抗性 基因 將生物的所有 DNA直接導入受體細胞不是更簡便嗎？ 表達載體的構(gòu)建使目的基因在受體細胞中 穩(wěn)定存在，并且以遺傳給下一代 ，同時是目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。 基因表達載體組分 目的基因 啟動子： 是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 DNA片段，位于基因的首段，它是 RNA聚合酶 識別的結(jié)合部位 ，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄 mRNA。 終止子： 也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的 DNA片段，位于基因的末端，使 轉(zhuǎn)錄在這里終止。 標記基因： 是為了鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。 ① 載體 與 表達載體 的區(qū)別：二者都有標記基
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