基因表達(dá)和基因重組-文庫吧
2024-12-28 17:44 本頁面
【正文】 inant DNA) 。 生物技術(shù)工程 : 基因工程、蛋白質(zhì)工程、酶工程、細(xì)胞工程等 目的 ① 分離獲得某一感興趣的基因或 DNA ② 獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物（蛋白質(zhì)） 基因工程 (geic engineering) —— 實(shí)現(xiàn)基因克隆所用的方法及相關(guān)的工作稱基因工程，又稱 重組 DNA工藝學(xué) 。 （二）工具酶 ? 限制性核酸內(nèi)切酶 ? DNA聚合酶 Ⅰ ? 逆轉(zhuǎn)錄酶 ? T4DNA連接酶 ? 堿性磷酸酶 ? 末端轉(zhuǎn)移酶 ? Taq DNA聚合酶 重組 DNA技術(shù)中常用的工具酶 工 具 酶 功 能 限制性核酸內(nèi)切酶 識(shí)別特異序列，切割 DNA DNA連接酶 催化 DNA中相鄰的 5180。磷酸基和 3180。羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，使 DNA切口封合或使兩個(gè) DNA分子或片段連接 DNA聚合酶 Ⅰ ① 合成雙鏈 cDNA分子或片段連接 ② 缺口平移制作高比活探針 ③ DNA序列分析 ④ 填補(bǔ) 3180。末端 Klenow片段 又名 DNA聚合酶 I大片段，具有完整 DNA聚合酶 I的 5??3?聚合、 3??5?外切活性，而無 5??3?外切活性。常用于cDNA第二鏈合成，雙鏈 DNA 3?末端標(biāo)記等 反轉(zhuǎn)錄酶 ① 合成 cDNA ② 替代 DNA聚合酶 I進(jìn)行填補(bǔ)，標(biāo)記或 DNA序列分析 多聚核苷酸激酶 催化多聚核苷酸 5180。羥基末端磷酸化，或標(biāo)記探針 末端轉(zhuǎn)移酶 在 3180。羥基末端進(jìn)行同質(zhì)多聚物加尾 堿性磷酸酶 切除末端磷酸基 限制性核酸內(nèi)切酶 定義 限制性核酸內(nèi)切酶 (restriction endonuclease, RE)是 識(shí)別 DNA的特異序列 , 并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈 DNA的一類內(nèi)切酶 。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ 作用 與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng) ， 限制外源 DNA， 保護(hù)自身 DNA。 分類 Ⅰ 、 Ⅱ 、 Ⅲ （基因工程技術(shù)中常用 Ⅱ 型） 第一個(gè)字母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬名 ， 用大寫； 第二、第三個(gè)字母是該細(xì)菌的種名，用小寫； 第四個(gè)字母代表株； 用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序。 命名 Hin dⅢ 屬 系 株 序 Haemophilus influenzae d株 流感嗜血桿菌 d株的第三種酶 Ⅱ 類酶識(shí)別序列特點(diǎn) —— 回文結(jié)構(gòu) (palindrome) 切口 ： 平端切口 、 粘端切口 GGATCC CCTAGG Bam HⅠ GTC CAG G CCTAG GATCC G + GGATCC CCTAGG HindⅡ GTCGAC CAGCTG GAC CTG + 平端切口 粘端切口 同功異源酶 來源不同的限制酶 ， 但能識(shí)別和切割同一位點(diǎn) ， 這些酶稱 同功異源酶 。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + BstⅠ 有些限制性內(nèi)切酶雖然識(shí)別序列不完全相同 ， 但切割 DNA后 ， 產(chǎn)生相同的粘性末端 ，稱為 同尾酶 。 這兩個(gè)相同的粘性末端稱為 配伍未端 (patible end)。 Bam HⅠ Bg lⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGA G CCTAG GATCC G + + A TCTAG GATCT A 同尾酶 （三）目的基因 目的基因 需要克隆的 DNA片段。 編碼某種蛋白質(zhì) 研究某基因結(jié)構(gòu)和功
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