現(xiàn)代五分類血細(xì)胞分析儀的原理及使用-文庫吧
2025-07-31 22:53 本頁面
【正文】 Bayer公司的的 DVIA120型和 2120型血細(xì)胞分析儀、 Sysmex公司的 SF3000型、邁瑞的 BC5500血細(xì)胞分析儀均采用了該原理進(jìn)行工作。 ? 利用激光散射和過氧化物酶染色技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分類。利用光散射的原理計數(shù)血細(xì)胞 ,因細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)不同 ,在不同角度上散射光有差別 ,有助于對白細(xì)胞的區(qū)分。 ? 白細(xì)胞化學(xué)染色 ? 在稀釋液中加入過氧化酶 (MPO)的底物及顯色劑 ,根據(jù)白細(xì)胞對 MPO的反應(yīng)分類。中性細(xì)胞 MPO為強陽性 ,嗜酸性細(xì)胞陽性更強 ,單核細(xì)胞為弱陽性 ,淋巴細(xì)胞陰性 ,嗜堿性細(xì)胞亦為陰性 ,故綜合光散射和細(xì)胞化學(xué)染色的特點 , 可得到二維或三維圖像 不同顏色的散點圖。由于嗜堿性細(xì)胞不含此酶 ,不能被檢測 ,因此一些儀器專門設(shè)置了嗜堿性細(xì)胞檢測系統(tǒng) ,它的測量通道采用時間差的方法 ,與 RBC、PLT的測量系統(tǒng)共用一個通道。 （ 3）電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測法 ? 這種方法是分別采用四個檢測系統(tǒng)來檢測不同類型的細(xì)胞 ? ①淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng) :在細(xì)胞懸浮液中加入溶血劑使紅細(xì)胞溶解 ,而使白細(xì)胞保持完整細(xì)胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài) ,當(dāng)這些細(xì)胞通過檢測系統(tǒng)時 ,對白細(xì)胞進(jìn)行電阻抗法 (測量細(xì)胞體積 )和射頻電導(dǎo)法 (檢測細(xì)胞核和顆粒密度 )的聯(lián)合檢測 ,結(jié)果將細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)和中性粒細(xì)胞三個群體。 ? ② 嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞兩種檢測系統(tǒng) :在細(xì)胞懸浮液中加入特殊的溶血劑 ,除嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞外 ,其他細(xì)胞均被溶解或萎縮再對保持完整的嗜酸性細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。 ? ③幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng) :在細(xì)胞懸浮液中加入硫化氨基酸 ,由于占位不同 ,結(jié)合在幼稚細(xì)胞的氨基酸比成熟細(xì)胞多 ,且對溶血劑有抵抗作用 ,當(dāng)加入溶血劑時 ,成熟細(xì)胞被溶解 ,只保留著可能存在的幼稚細(xì)胞用來計數(shù)。Sysmex公司的 SE9000血細(xì)胞分析儀就是采用這種方法進(jìn)行五分類的。 電阻抗與射頻法能透入細(xì)胞內(nèi) ， 測量核的大小及顆粒的多少 。 RF:射頻電流 細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息 DC:直流電 細(xì)胞大小的信息 （ 4） 多角度激光偏振光散射檢測法 ? 儀器使用鞘流液將標(biāo)本血稀釋 ,稀釋后白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài) ,只有嗜堿性細(xì)胞由于其吸濕的特性而使細(xì)胞結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白在高滲透壓的作用下 ,從細(xì)胞中分離出來。而鞘流的水分則進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi) ,使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整 ,它與鞘流的折光系數(shù)相同 ,不影響白細(xì)胞的檢測。儀器同時從四個角度來檢測通過激光束的細(xì)胞所產(chǎn)生的散射光 ,因為細(xì)胞大小、折射指數(shù)、核形、核漿比率以及顆粒性質(zhì)等 ,均可影響在不同角度測得的散射光量。 0176。 ：前角光散射 （ 1176。 ～ 3176。 ） ， 可粗略測定細(xì)胞大小 。 10176。 ：狹角光散射 （ 7176。 ～ 11176。 ） ， 可測定細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對特征 。 90176。 ：垂直光散射 （ 70176。 ～ 110176。 ） ， 測定細(xì)胞核分葉情況 。 90176。 ：消偏振光散射 （ 70176。 ～ 110176。 ） ，區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞與其他細(xì)胞 。 ? 值得一提的是市面上偶見假五分類血球儀。假五分類血球儀則不用上述原理分析血細(xì)胞成分 ,更多的使用電腦軟件的分析而得出五分類結(jié)果。分辨是否真五分類技術(shù)的血球儀，如果是試劑法 ,試劑不應(yīng)該少于四種 ,如果是激光法 ,試劑不少于三種。 三、五分類血細(xì)胞分析儀的使用 ? 自動進(jìn)樣 ? 手工進(jìn)樣 ? 末梢血、靜脈血的可選性 ? 結(jié)果的判斷 ? 質(zhì)量控制 ? 儀器的校準(zhǔn) 準(zhǔn)品的來源、什么情況下需要校準(zhǔn)？如何校準(zhǔn)？ ? 儀器的維護(hù) 標(biāo)本的重要性 ? 高檔的儀器并不意味著結(jié)果一定可靠。 ? 標(biāo)本的采集直接關(guān)系到結(jié)果的準(zhǔn)確性。 ? 壓脈帶的使用時間、抗凝劑的影響、真空管的使用、血量的控制、標(biāo)本放置的溫度和時間、標(biāo)本的混勻等等。 檢驗報告的審核 ? 當(dāng)日質(zhì)控是否在控。 ? 比較報告各參數(shù)之間是否有矛盾。 ? 注意觀察多個測定標(biāo)本相關(guān)參數(shù)是否有一致的系統(tǒng)誤差。 ? 報告與臨床是否符合，不符合時可能存在的原因。如 PLT過低、過高。 ? 什么樣的結(jié)果必須手工復(fù)查？如何復(fù)查？復(fù)查完畢后的報告簽發(fā)模式。 ? 直方圖、散點圖的利用。 血細(xì)胞自動分析異常結(jié)果人工顯微鏡復(fù)檢 ? 鏡檢復(fù)核的現(xiàn)狀 ? 血細(xì)胞分析儀仍只能作為 CBC 分析的一種過篩手段 ，當(dāng)遇到可疑情況 ，尤其是在病理條件下 ，其測定結(jié)果并不可靠 ，需要人工以顯微鏡復(fù)查 ，這已是不爭的事實 。但是 ，國內(nèi)目前各醫(yī)院檢驗科對 CBC異常結(jié)果基不或很少進(jìn)行人工顯微鏡復(fù)查 ，這種現(xiàn)象在經(jīng)濟發(fā)達(dá)的沿海地區(qū)更是普遍 。有資料顯示 ，國內(nèi)各醫(yī)院 CBC實際鏡檢率在 0% ～ 15% ，大部分醫(yī)院鏡檢率 5%或者不鏡檢 。這種現(xiàn)象引發(fā)了不少的醫(yī)療投訴 、糾紛或事故 。分析這類題出現(xiàn)的原因可能有 : (1)認(rèn)識不夠 ，認(rèn)為血細(xì)胞分析儀尤其是五分群的血細(xì)胞分析儀的檢測結(jié)果可靠 ，不需要復(fù)查 ； ( 2)工作量大 ； ( 3 )怕麻煩 ，圖省事 ； ( 4 )目前沒有一個可參照的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn) ，即對 CBC結(jié)果的人工復(fù)查的標(biāo)準(zhǔn) 、內(nèi)容 、方法及程序尚無明確的規(guī)定 。 ? 需要鏡檢的標(biāo)準(zhǔn) ? 目前即使是最先進(jìn)的血細(xì)胞分析儀也不能完全取代人工鏡下白細(xì)胞
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