土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選與鑒定和淀粉酶活測定-文庫吧
2025-05-01 02:53 本頁面
【正文】 產(chǎn)物。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度量呈一定的比例關(guān)系，在540nm波長下測定棕紅色物質(zhì)的吸光值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線可求出樣品中還原糖的含量。（3）40℃時(shí)在5min內(nèi)水解淀粉釋放1mg麥芽糖所需的酶量為1個(gè)酶活力單位（U）計(jì)算公式:酶活力單位（U）=C酶V酶n（C酶—酶液中麥芽糖的濃度 V酶—提取液的總體積 n—酶液的稀釋倍數(shù)） 土樣2種樣品1：生化樓樓下河道邊樣品2：菊苑飯?zhí)煤箝T附近 牛肉膏 （3g） 蛋白胨（10g） 氯化鈉 （5g） 瓊脂（15g）蒸餾水 （1000ml）pH （淀粉牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基）可溶性淀粉（2g） 牛肉膏（3g） 蛋白胨（10g） 氯化鈉（5g ） 瓊脂（15g） 蒸餾水（1000ml）pH 甲液（+5mol/L醋酸100mL乙液（ + 5mol/醋酸100mL）硝酸鉀() 蛋白胨 (5g)蒸餾水(1000ml)pH 營養(yǎng)瓊脂 () 葡萄糖(1g) 配成100ml培養(yǎng)基 卵黃鹽水(5ml)卵黃、鹽水分別滅菌，按1:1制取培養(yǎng)基與卵黃鹽水混合倒平板蛋白胨 (10g) 氯化鈉 (5g)蒸餾水 (1000ml) pH VP實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基 蛋白胨(10g) 氯化鈉 (5g) 葡萄糖 (5g) 蒸餾水 (1000ml)pH 葡萄糖/木糖/甘露醇/阿拉伯糖 （10g） 蛋白胨(10g) 氯化鈉 (5g) K2HP04() 1％溴甲酚紫(3ml) 蒸餾水 (1000ml) pH 酪氨酸()營養(yǎng)瓊脂() （分開滅菌，酪氨酸溶液110℃，營養(yǎng)瓊脂121℃，用時(shí)再混合，） 脫脂奶粉（5g，稀釋到50ml） 瓊脂（）（分開滅菌，酪素110℃，營養(yǎng)瓊脂121℃，現(xiàn)用現(xiàn)倒） 可溶性淀粉（2g） 牛肉膏(3g)蛋白胨(10g) 氯化鈉(5g)瓊脂 (5g)蒸餾水 (1000ml)pH (制斜面）氯化鈉(5g) 硫酸鎂(MgSO47H2O)() 磷酸二氫銨(1g) 磷酸氫二鉀 (1g)%溴麝香草酚藍(lán)溶液 (40mL) 檸檬酸鈉(5g)蒸餾水(1000mL) pH 牛肉膏(3g) 蛋白胨(10g) 氯化鈉(5g)蒸餾水(1000ml) 瓊脂(20g)pH 可溶性淀粉（%） 酵母膏（%）蛋白胨（%） NaCl（%） KH2PO4（%）蒸餾水（100mL）pH=：可溶性淀粉（%）酵母膏（%）蛋白胨（%） NaCl（%） KH2PO4（%）CaCl22H2O（%）MgSO47H2O(%)FeSO4H2O(%) 蒸餾水100mL pH=（培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌：利用水的沸點(diǎn)隨水蒸氣壓力的增加而上升，以達(dá)到100 ℃以上高溫（121 ℃）滅菌的方法。） 1％HCl、蒸餾水、結(jié)晶紫染色液、草酸銨結(jié)晶紫染液、番紅染液、5％孔雀綠染色、碘液、95％乙醇、乙醚、40％NaOH、ɑ酚萘、3,5二硝基水楊酸（DNS試劑配制）、1mg/ml麥芽糖溶液鑰匙、錐形瓶、水浴鍋、膠頭滴管、移液槍、試管、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、玻璃涂棒、酒精燈、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、錐形瓶4個(gè)（2個(gè)種子培養(yǎng)、2個(gè)發(fā)酵培養(yǎng)）、試管無菌防水紙袋、記號(hào)筆、標(biāo)簽、報(bào)紙、橡皮筋3實(shí)驗(yàn)方法與步驟 樣品1：生化樓樓下河道邊樣品2：菊苑飯?zhí)煤箝T附近近㎡為單位采用五點(diǎn)取樣法在各點(diǎn)采樣，距表層515㎝，用鑰匙在五點(diǎn)處各取1的土壤，裝入無菌防水紙袋，封口。稱重，編號(hào)2.。：(錐形瓶中放有玻璃珠)2中(即為稀釋的土壤懸浮液)，塞好棉塞，充分振蕩20min，使土壤中菌體或芽孢子均勻分散，并置于80℃恒溫水浴中保持20min，/100℃恒溫水浴中保持10min，以殺死非芽孢的菌體。，編號(hào)為102,103,104用移液槍吸取1號(hào)錐形瓶內(nèi)土壤懸浮液1ml加入編號(hào)為102的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復(fù)吹洗數(shù)次，即成為102的土壤稀釋液；同法從編號(hào)102試管內(nèi)取1ml加入編號(hào)為103的試管中，并在試管內(nèi)輕輕反復(fù)吹洗數(shù)次，即成為103的土壤稀釋液；依次連續(xù)稀釋為104的土壤稀釋液。并同法完成另一份樣品的稀釋。：，并在無菌操作下倒平板(共13個(gè)，19=232＋1其中2個(gè)土樣，3個(gè)稀釋度，每種2個(gè)平行對(duì)照，,1個(gè)為空白對(duì)照)。,103,104的懸浮液進(jìn)行涂布平板(每種樣品的每個(gè)稀釋度涂布3個(gè)平板)。用移液槍吸取各土樣各個(gè)稀釋度的土壤懸浮液100ul，放入平板中，用灼燒后的玻璃涂棒沿一個(gè)方向涂勻。并置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h。（第一天），觀察三個(gè)稀釋度下的平板的菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)在30~300的平板，舍棄不符合的平板。在所選平板中選取形態(tài)大小顏色等不同的菌落6~8種，分別用接種環(huán)以無菌操作挑起，分別進(jìn)行分區(qū)劃線(3個(gè)區(qū))并做標(biāo)記。(按每種土樣選取5種菌計(jì)算，約10=25個(gè)平板)。將接種過的平板倒置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h。繼續(xù)分區(qū)劃線，重復(fù)3次。（第二三四天） 將第四次劃線得到的單個(gè)菌落進(jìn)行單染色。檢查獲得的菌種是否單一，是否為桿狀菌。若出現(xiàn)不同菌種則說明并未純化，則繼續(xù)劃線培養(yǎng)直至鏡檢菌落單一。 單染色法 涂片（1％HCl清潔，滴加1DH2O于載玻片，挑菌與水混勻）干燥固定（涂面朝上，微火，23次）染色（冷卻，加結(jié)晶紫12d，染色12min）水洗（倒去染色液沖洗至無色）
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