微生物學(xué)實(shí)驗教案-文庫吧
2025-04-12 13:20 本頁面
【正文】 （結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95%乙醇、石碳酸復(fù)紅）5載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。6顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。四、實(shí)驗方法和步驟附表1細(xì)菌染色法分類附表2 微生物染色常用染料A酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。B堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細(xì)菌易被堿性染料染色。C中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細(xì)胞核染色）。D單純?nèi)旧哼@類染料物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類（Sudan b）的染料2革蘭氏染色（1）涂片。（2）初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。（3）媒染：先用新配的盧哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。（4）脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約30秒，后立即用流水沖洗。（5）復(fù)染：滴加番紅染色液，染1分鐘，水洗后用吸水紙吸干。（6）鏡檢：觀察染色結(jié)果。五、實(shí)驗報告1 革蘭氏染色的基本原理和意義2 革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵六、思考題1根據(jù)實(shí)驗體會，你認(rèn)為制備染色標(biāo)本時，應(yīng)注意哪些事項？ 2制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀察？3做革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？其染色成敗的關(guān)鍵一步是什么？4當(dāng)你對一株未知菌進(jìn)行革蘭氏染色時，怎樣能確證你的染色技術(shù)操作正確，結(jié)果可靠?七、教學(xué)反饋實(shí)驗四 培養(yǎng)基的配制一、實(shí)驗?zāi)康?學(xué)習(xí)和掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟2學(xué)會實(shí)驗室滅菌鍋的使用方法二、實(shí)驗材料1牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、鏈霉素、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、KNONaCl、K2HPO43H2O、MgSO47H2O、FeSO4.7H2O。2試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH試紙、棉花、牛皮紙、記號筆、線繩、紗布。3 滅菌鍋三、實(shí)驗方法(一)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g．NaCl5g，瓊脂1520g，水1000mL。1稱藥品：按實(shí)際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒杯中。牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯；也可放在稱量紙上稱量，隨后放人熱水中，牛肉膏便與稱量紙分離，立即取出紙片。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速。2加熱溶解：在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱，并用玻棒攪拌，待藥品完全溶解后再補(bǔ)充水分至所需量。若配制固體培養(yǎng)基，則將稱好的瓊脂放入已溶解的藥品中，再加熱融化，此過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，最后補(bǔ)足所失的水分。3調(diào)pH：檢測培養(yǎng)基的pH，若pH偏酸，可滴加1滴1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測，直至達(dá)到所需pH范圍。若偏堿，則用1mol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂前。應(yīng)注意pH值不要調(diào)過頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。4過濾：液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過濾，以利結(jié)果的觀察。5分裝：按實(shí)驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶內(nèi)。分裝時可用三角漏斗以免培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上面造成污染。分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的1／5，滅菌后制成斜面。分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積一半為宜。半固體培養(yǎng)基以試管高度的1/4為宜，滅菌后垂直待凝。6加棉塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞。棉塞的形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利通汽的作用。要使棉塞總長約3／5塞人試管口或瓶口內(nèi)，以防棉塞脫落。有些微生物需要更好的通氣，則可用8層紗布制成通氣塞。有時也可用試管帽或塑料塞代替棉塞。7包扎：加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙，以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞。若培養(yǎng)基分裝于試管中，則應(yīng)先把試管扎成捆后，再于棉塞外包一層牛皮紙。然后用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。8滅菌：℃濕熱滅菌20min。如因特殊情況不能及時滅菌，則應(yīng)放人冰箱內(nèi)暫存。9擺斜面：滅菌后，如制斜面，則需趁熱將試管口端擱在一根長木條上，并調(diào)整斜度，使斜度的長度不超過試管總長度的1/2。10無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃溫箱中培養(yǎng)2448h，無菌生長即可使用。或儲存于冰箱清潔的櫥內(nèi)，備用。四、實(shí)驗結(jié)果和報告記錄本實(shí)驗配制培養(yǎng)第的名稱、數(shù)量，并圖解說明其配制過程，指明要點(diǎn)。五、問題和思考1配制培養(yǎng)基有哪幾個步驟?在操作過程中應(yīng)注意些什么問題?為什么?2培養(yǎng)基配制完成后，為什么必須立即滅菌?若不能及時滅菌應(yīng)如何處理？如何進(jìn)行無菌檢查，3試設(shè)計實(shí)驗對飲料進(jìn)行無菌檢查。六、演示1培養(yǎng)基的分裝方法。2試管斜面的擱置方法七、注意事項稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應(yīng)及時蓋緊瓶蓋。調(diào)PH時要小心操作，避免回調(diào)。不同培養(yǎng)基各有配制特點(diǎn)，要注意具體操作。八、教學(xué)反饋實(shí)驗五 土壤的稀釋、分離、純化及無菌操作技術(shù)一、實(shí)驗?zāi)康暮蛢?nèi)容1學(xué)習(xí)從上壤中分離微生物的方法，學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)。2用稀釋法分離細(xì)菌、放線茵和霉菌。3用平板劃線法分離微生物。4學(xué)習(xí)平板接種等無菌操作技術(shù)。二、實(shí)驗材料1金黃色葡萄球菌和普通變形菌斜面菌種。2已滅菌的牛肉膏、高氏1號、土豆蔗糖固體
教學(xué)教案相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1