【正文】 體車間（ D 級(jí)）的制粒一、小容量注射劑車間 (C 級(jí) )的配液間、灌封間層流罩（ A 級(jí)）設(shè)備表面消毒前和消毒后分別進(jìn)行取樣，測定其微生物數(shù)量。 3. 確認(rèn)前準(zhǔn)備 . 驗(yàn)證用試劑與材料 . 菌種 序號(hào) 名稱 序列號(hào) 1 金黃色葡萄球菌 [CMCC(B)26003] 2 大腸埃希菌 [CMCC(B)44102] 3 枯草桿菌芽孢 [CMCC(B)63501] 白色念珠菌 [CMCC(F) 98001] . 培養(yǎng)基 序號(hào) 名稱 備注 1 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 培養(yǎng)基經(jīng) 121℃ ， 20min 滅菌備用 2 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 3 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 4 改良馬丁培養(yǎng)基 5 大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號(hào)： BZW12085） 規(guī)格： ： ?55mm，取樣面積為 25m2 6 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)接觸碟 （編號(hào)： BZW15129） Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案 Doc. No./編號(hào)： 2020244712045 Page/頁碼： 6 / 23 . 消毒液擬定選用的中和劑 序號(hào) 消毒劑名稱 中和劑 備注 1 75%乙醇 1%卵磷脂 +%聚山梨酯 80 中和劑經(jīng)121℃ ， 20min 滅菌備用。 2 %新潔爾滅溶液 3 %的新潔爾滅溶液 4 %醋酸洗必泰溶液 5 %醋酸洗必泰 6 60mg/L 二氧化氯溶液 %硫代硫酸鈉 7 40mg/L 二氧化氯 溶液 . 稀釋液 %無菌氯化鈉溶液（ NS） . 器具及設(shè)備 序號(hào) 名稱 1 無菌移液管 2 錐形瓶 3 無菌試管 4 漩渦混合器 5 恒溫水浴鍋 6 恒溫恒濕培養(yǎng)箱 7 恒溫恒濕培養(yǎng)箱 . 驗(yàn)證用試劑與材料記錄見附錄 1。 4. 消毒劑消毒效力試驗(yàn) . 中和 劑鑒定試驗(yàn) . 試驗(yàn)?zāi)康? 通過該試驗(yàn)，確認(rèn)所用的中和劑對對應(yīng)的消毒劑有良好的中和作用，對試驗(yàn)用菌劑及其恢復(fù)期培養(yǎng) Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案 Doc. No./編號(hào)： 2020244712045 Page/頁碼： 7 / 23 示范有害或不良影響。 . 菌液的制備及計(jì)數(shù) . 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌工作菌液的制備 接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中， 30～ 35℃培養(yǎng) 18～ 24 小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用 ％無菌氯化鈉溶液做 10 倍系列稀釋成 1108~5108CFU/ml的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為 1108~5108CFU/ml，可不再用 ％無菌氯 化鈉溶液稀釋）。 計(jì)數(shù)時(shí)，將 1108~5108CFU/ml 的工作菌液 10 倍系列稀釋成含 50～ 100CFU/ml 菌液，并同時(shí)采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 30～ 35℃培養(yǎng) 2 天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)，將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。 . 白色念珠菌工作菌液的制備 接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中， 23～ 28℃ 培養(yǎng) 24～ 48 小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用％無菌氯化鈉溶液做 10 倍系列稀釋成 1108~5108CFU/ml 的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為 1108~5108CFU/ml，可不再 用 ％無菌氯化鈉溶液稀釋）。計(jì)數(shù)時(shí)，將 1108~5108CFU/ml 的工作菌液 10 倍系列稀釋成含 50～ 100CFU/ml 菌液， 并同時(shí)采用 改良馬丁 瓊脂培養(yǎng)基 23～ 28℃培養(yǎng)3 天計(jì)數(shù) 。 計(jì)算該稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)，將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。 . 鑒定試驗(yàn)操作 . 配制 75%乙醇、 %新潔爾滅溶液、 %新潔爾滅溶液、 %醋酸洗必泰、 %醋酸洗必泰、 40mg/L的二氧化氯、 60mg/L 的二氧化氯，具體操作執(zhí)行《清潔劑和消毒劑管理》。將配置好的消毒劑置 20℃177。1 ℃ 恒溫水浴鍋中備用。 . 分組操作 試驗(yàn)分組及稀釋操作方法簡表 組號(hào) 混合液 A 混勻作用 混合液 B 混勻作用 取混合液 B 或混合液 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案 Doc. No./編號(hào)： 2020244712045 Page/頁碼： 8 / 23 具體操作 ? 第 1 組 目的 ： 觀察消毒液對試驗(yàn)菌有無殺滅或抑制能力。 操作： 取消毒劑 +工作菌液 ，混勻作用 10min 后，取混合液 +稀釋液 ，混勻作用 10min，取 注皿，平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉 瓊脂培養(yǎng)基，倒置 23～ 28℃ 培養(yǎng) 5 天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。 ? 第 2 組 目的：觀察殘留消毒劑被中和后受到消毒劑作用后的試驗(yàn)菌是否恢復(fù)生長。 操作： 取消毒劑 +工作菌液 ，混勻作用 10min 后，取混合液 +中和劑 ，混勻作用 10min，用稀釋液稀釋成 101。分別取未稀釋溶液（混合液 +中和劑 的混合液）及 101 注皿，各平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置于30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒 置于 23～ 28℃ 培養(yǎng) 5 天計(jì)數(shù)。 ? 第 3 組 目的：觀察中和劑是否有抑菌性 操作： 取中和劑 +工作菌液 ，混勻作用 10min，取混合液 l+稀釋液 ，混勻作用 10min取 工作 菌液加入下列溶液中 10min 取混合液 A 加入下列溶液 10min B的稀釋級(jí)溶液 平板計(jì)數(shù)（ 2 皿 /組 ） 1 消毒劑 稀釋液 混合液 B、 101 2 消毒劑 中和劑 混合液 B、 101 3 中和劑 稀釋液 10 103 4 中和產(chǎn)物 （消毒液與中和劑比例為 1:1） 稀釋液 10 03 5 稀釋液 稀釋液 10 103 6 稀釋液和中和劑各 注入無菌平皿中，各制備 2 皿。 Cleaning and Sanitizing Compounds the Effect of the Programme Validation Protocol 消毒劑消毒效力及有效期確認(rèn)驗(yàn)證方案 Doc. No./編號(hào)： 2020244712045 Page/頁碼： 9 / 23 后，用稀釋液進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 10 103。取相應(yīng)稀釋級(jí) 注皿，各稀釋級(jí)平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。 ? 第 4 組 目的：觀察中和產(chǎn)物，或未被完全中和殘留消毒劑對 試驗(yàn)菌的生長繁殖是否有影響。 操作： 取消毒劑和中和劑 1:1 的混合液 +工作菌液 ，混勻作用 10min，取混合液 l+稀釋液，混勻作用 10min 后，用稀釋液進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 10 103。取相應(yīng)稀釋級(jí) 注皿，各稀釋級(jí)平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計(jì)。 ? 第 5 組 目的：作菌落數(shù)對照用 操作： 取稀釋液 +工作菌液 ， 混勻作用 10min，取混合液 l+稀釋液 ，混勻作用 10min后，用稀釋液進(jìn)行 10 倍系列稀釋成 10 103。取相應(yīng)稀釋級(jí) 注皿，各稀釋級(jí)平行制備 2 皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孢菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 3 天計(jì)數(shù)。 ? 第 6 組 目的：作為陰性對照用 操作：分別取稀釋液和中和劑各 注入無菌平皿中，各制備 2 皿。 . 結(jié)果判斷 試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件，判斷所選中和劑合格。 ? 第 1 組無菌生長 ，或僅有少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長。 ? 第