【正文】 體培養(yǎng)基試管(每管裝培養(yǎng)基)，貼上標(biāo)簽(注明菌名、培養(yǎng)時(shí)間等)。然后，用支無菌吸管，每次準(zhǔn)確地吸取培養(yǎng)的大腸桿菌培養(yǎng)液，接種到肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基內(nèi)。接種后，輕輕搖蕩，使菌體均勻分布。氬嚕躑竄貿(mào)懇彈瀘頷澩紛釓鄧鰲鱺貼。()培養(yǎng) 將接種后的支液體培養(yǎng)基，置于振蕩器或搖床上?！嬲袷幣囵B(yǎng)。其中支，分別在培養(yǎng)、、后取出，放冰箱中儲(chǔ)存，最后一起比濁測(cè)定。釷鵒資贏車贖孫滅獅贅慶獷緞瑋鱘將。 酸處理的支試管，在培養(yǎng)后取出，加無菌酸溶液（甲酸：乙酸：乳酸＝：：的體積比），然后繼續(xù)振蕩培養(yǎng)，在培養(yǎng)后取出，放入冰箱貯存。最后一起比濁測(cè)定。慫闡譜鯪逕導(dǎo)嘯畫長(zhǎng)涼馴鴇撟鉍鲞謠。追加營(yíng)養(yǎng)的兩支試管，在培養(yǎng)后取出，各加入無菌濃肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，然后繼續(xù)振蕩培養(yǎng)，在培養(yǎng)、后取出，放入冰箱貯存，最后一起比濁測(cè)定。諺辭調(diào)擔(dān)鈧諂動(dòng)禪瀉類謹(jǐn)覡鸞幀鮮奧。()比色、過比濁 把培養(yǎng)不同時(shí)間而形成不同濃度的細(xì)菌培養(yǎng)液，置于分光光度計(jì)中進(jìn)行比色。用光密度值的大小來代表細(xì)菌的生長(zhǎng)量。嘰覲詿縲鐋囁偽純鉿錈癱懇跡見鮫請(qǐng)。以未接種的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基為空白對(duì)照，在波長(zhǎng)下測(cè)菌懸液的光密度值()。菌懸液的濃度與光密度值成正比，光密度值大者可以認(rèn)為其生長(zhǎng)情況較好。從最稀濃度的細(xì)菌懸液開始，依次測(cè)定。細(xì)菌懸液如果太濃，應(yīng)適當(dāng)稀釋，使光密度降至—范圍內(nèi)。熒紿譏鉦鏌觶鷹緇機(jī)庫(kù)圓鍰緘鶚鱭圓。液體的渾濁度也可用濁度計(jì)測(cè)定。三、記錄及報(bào)告要求．記錄培養(yǎng)、、之后細(xì)菌懸液的光密度值，以及加酸和追加營(yíng)養(yǎng)液后，這三管菌液在所要求的培養(yǎng)時(shí)間時(shí)的光密度值。鶼漬螻偉閱劍鯫腎邏蘞闋簣擇睜鮪謅。．以細(xì)菌懸液光密度為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪出大腸桿菌正常、加酸和追加營(yíng)養(yǎng)的條生長(zhǎng)曲線，并加以比較，標(biāo)出正常生長(zhǎng)曲線中對(duì)數(shù)期的大致位置，說明曲線變化原因。紂憂蔣氳頑薟驅(qū)藥憫騖覲僨鴛鋅鮚嗚。四、思考題．常用的測(cè)定做生物生長(zhǎng)的方法有哪幾種?試略加討論。．利用渾濁度所表示的細(xì)菌生長(zhǎng)量是否包括死細(xì)菌?．你認(rèn)為活性污泥的增長(zhǎng)曲線應(yīng)怎樣測(cè)定才比較合適?實(shí)驗(yàn)四 細(xì)菌、霉菌、酵母菌、放線菌形態(tài)的觀察一、目的．進(jìn)一步掌握顯微鏡的使用方法。．觀察幾個(gè)典型細(xì)菌的形態(tài)(示范片)。．觀察幾個(gè)典型細(xì)菌的構(gòu)造(示范片)。．觀察霉菌、酵母菌、放線菌的形態(tài)和構(gòu)造，以便找出它們之間及與細(xì)菌之間的區(qū)別點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)器材．顯微鏡、擦鏡紙、鏡油（香柏油）、二甲苯等。．示范片()金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、四聯(lián)球菌、尿八聯(lián)球菌、鏈球菌、球衣細(xì)菌、大腸桿菌、霍亂弧菌等。()枯草桿菌芽孢、假單胞桿菌鞭毛、固氮菌莢膜等。()酵母菌、霉菌、放線菌。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法 ．復(fù)習(xí)顯微鏡的使用方法，重點(diǎn)放在油鏡的使用部分。 ．嚴(yán)格按照顯微鏡的使用方法，依次逐個(gè)觀察細(xì)菌的形態(tài)、構(gòu)造及酵母菌、霉菌、放線菌的形態(tài)。分別繪出其形態(tài)、構(gòu)造圖。穎芻莖蛺餑億頓裊賠瀧漲負(fù)這惻鮭觶。四、記錄（細(xì)菌、霉菌、酵母菌、放線菌各一）序 號(hào)玻片名稱放大倍數(shù)形態(tài)草圖實(shí)驗(yàn)五 培養(yǎng)基的制備及滅菌本次實(shí)驗(yàn)可為下次實(shí)驗(yàn)作準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括玻璃器皿的洗刷、包裝和培養(yǎng)基的制備以及滅菌技術(shù)等。在進(jìn)行微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)，所用培養(yǎng)基及玻璃器皿等均須進(jìn)行滅菌。濫驂膽閉驟羥闈詔寢賻減棲綜訴鮐巹。一、目的．學(xué)會(huì)玻璃器皿的洗滌和滅菌前的準(zhǔn)備工作。．掌握培養(yǎng)基配制和無菌水制備的方法。．學(xué)會(huì)高壓蒸汽滅菌技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)器材．培養(yǎng)皿(又稱平皿，直徑90mm)、試管、吸管、錐形瓶、燒杯等。．紗布、棉花、報(bào)紙、牛皮紙。．試紙—(或電位計(jì)或氫離子濃度比色計(jì))、洗液、％、％。．牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉、瓊脂、蒸餾水。．高壓蒸氣滅菌器、烘箱、冰箱、電爐等。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)玻璃器皿的洗刷與包裝．洗刷 玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。培養(yǎng)皿、試管、錐形瓶等可先用去污粉或肥皂洗刷，然后用自來水沖洗。吸管則先用洗液浸泡、再用水沖洗。洗刷干凈的玻璃器皿應(yīng)放在烘箱中烘干。銚銻縵嚌鰻鴻鋟謎諏涼鏗穎報(bào)嚴(yán)鮑蠅。．包裝()培養(yǎng)皿由一底一蓋組成一套，按實(shí)驗(yàn)所需的套數(shù)一起用牛皮紙包裝。()吸管應(yīng)在吸端用鐵絲塞入少許棉花，以防止細(xì)菌吸入口中，并避免將口中細(xì)菌吹入管內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜，吸時(shí)既能通氣，又不致使棉花滑入管內(nèi)。將塞好棉花的吸管的尖端，放在—5cm寬的長(zhǎng)紙條的一端，吸管與紙條約成176。交角，折疊包裝紙包住尖端(圖—)，用左手將吸管壓緊，在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，紙條即螺旋式地包在管子外面，余下紙頭折疊打結(jié)，按照實(shí)驗(yàn)需要，可單支包裝或多支包裝，以備滅菌。擠貼綬電麥結(jié)鈺贖嘵類羋罷鴇竇鮒鑿。培養(yǎng)皿和吸管也有放在特制容器內(nèi)進(jìn)行滅菌的。()試管和錐形瓶等的管口或瓶口均需用棉花塞堵塞。做好的棉塞，四周應(yīng)緊貼管壁和瓶口，不留縫隙，以防空氣中微生物會(huì)沿棉塞皺折浸入。棉塞不宜過松或過緊，以手提棉塞，管、瓶不掉下為準(zhǔn)。棉塞的／應(yīng)在管內(nèi)或瓶口內(nèi)，上端露出少許，以便拔塞。棉塞的大小及形狀應(yīng)如圖—所示。在制作培養(yǎng)基的過程中，如不慎將棉塞沾上培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)用清潔棉花重做。賠荊紳諮侖驟遼輩襪錈極嚕辮鏢鱸蕆。待滅菌的試管和瓶子的口都要用牛皮紙包裹，并用線繩捆扎后存放在鐵絲簍內(nèi)（用紙包裹是為了避免滅菌時(shí)冷凝水淋濕棉塞)，以備滅菌。塤礙籟饈決穩(wěn)賽釙冊(cè)庫(kù)麩適緄撾鲅傯。(二)培養(yǎng)基的制備．步驟()配制溶液 按培養(yǎng)基的配方，稱取各種原料。取適量的燒杯盛所需水量，依次將各種原料加入、溶解。難溶的原料如蛋白陳、肉膏、瓊脂等需加熱溶解，這時(shí)，當(dāng)原料全部溶解后應(yīng)加水補(bǔ)充因蒸發(fā)損失的水量。加熱時(shí)應(yīng)不斷攪拌以防原料在杯底燒焦。裊樣祕(mì)廬廂顫諺鍘羋藺遞燦擾諗魴莖。()調(diào)整值 用試紙(或電位計(jì)或氫離子濃度比色計(jì))測(cè)定培養(yǎng)基溶液的值。()過濾 用沙布、濾紙或棉花過濾均可。如培養(yǎng)基內(nèi)雜質(zhì)很少，可省略過濾。()分裝 將培養(yǎng)基分裝在試管和錐形瓶?jī)?nèi)。要使培養(yǎng)基直接流入管內(nèi)或瓶?jī)?nèi)，注意防止沾污上段管壁或瓶壁，并避免浸濕棉塞。倉(cāng)嫗盤紲囑瓏詁鍬齊驁絛鯛鱧俁魷親。裝入試管或錐形瓶的培養(yǎng)基量，視試管或瓶子的大小及需要而定。一般制備斜面培養(yǎng)基時(shí)，每支試管裝入的量約為試管高度的／—／。綻萬璉轆娛閬蟶鬮綰瀧恒蟬轅紗魚臚。()斜面培養(yǎng)基的制作 將裝含有瓊脂的培養(yǎng)基的試管經(jīng)滅菌后，趁熱擱置在木條或木棒上，使試管呈適當(dāng)?shù)男倍?切勿傾斜過小，以免培養(yǎng)基沾污棉塞)。待培養(yǎng)基凝固后，即成斜面(圖—)。驍顧燁鶚巰瀆蕪領(lǐng)鱺賻驃弒綈閶魎齠。．營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(肉膏、蛋白陳、瓊脂培養(yǎng)基)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基是一種固體培養(yǎng)基，本實(shí)驗(yàn)制備后可供活性污泥純種分離和細(xì)菌總數(shù)測(cè)定之用?，嶀暈R曖惲錕縞馭篩涼貿(mào)錒戧晉魘繅。()成分蛋白陳 牛肉膏 氯化鈉 瓊脂 —5g蒸餾水 ()制法)將上列成分混合后，煮沸至瓊脂完全溶解。)用蒸餾水補(bǔ)充因蒸發(fā)而損失的水量。)調(diào)整溶液的值為—。)乘熱用紗布或脫脂棉過濾(最好用保溫漏斗)，并分裝于試管中，每管約裝—。如裝在錐形瓶中，則的錐形瓶，以裝左右為宜。管口或瓶口均以棉花塞住。鎦詩(shī)涇艷損樓紲鯗餳類礙穡鰳責(zé)髕鵲。)置高壓蒸汽滅菌器中，以℃(1kg／)滅菌，然后貯存于冷暗處備用。(三)無菌水的制備在試管或瓶?jī)?nèi)先盛以適量的自來水(不用蒸餾水，管口或瓶口用塞子塞好，并用牛皮紙?jiān)o)，使其滅菌后，其水量恰為(用管)或(用瓶)。此種適量的水體積可在滅菌器內(nèi)由實(shí)驗(yàn)求得。也可以先將管或瓶滅菌，再用滅菌的吸管(所謂無菌吸管)取滅菌的自來水或加入管或瓶中。無菌水常用來稀釋水樣。櫛緶歐鋤棗鈕種鵑瑤錟奧傴輥刪髖綠。(四)高壓蒸汽滅菌上面所準(zhǔn)備好的一切玻璃器皿、培養(yǎng)基等均需進(jìn)行滅菌。本實(shí)驗(yàn)用高壓蒸汽滅菌器滅菌，其操作和注意事項(xiàng)如下：．加水 熱源為煤氣燈或電爐者，需先加水至器內(nèi)底層隔板以下／處。有加水口的，水由加水口加入，由玻璃管看水位至止水線即停止加水。若熱源為蒸汽，則不必加水。轡燁棟剛殮攬瑤麗鬮應(yīng)頁(yè)諳絞綽髏鱉。．把需要滅菌的器物放入滅菌器內(nèi)，關(guān)嚴(yán)滅菌器蓋，勿使漏氣。．打開出氣口。．點(diǎn)火。如熱源為蒸汽，則應(yīng)慢慢打開蒸汽進(jìn)口，不要讓蒸汽過猛地沖入滅菌器內(nèi)。．器內(nèi)水沸騰以后，蒸汽逐漸驅(qū)除器內(nèi)原有的冷空氣。如滅菌器裝有溫度計(jì)，當(dāng)指針指到讀數(shù)℃時(shí)，證明器內(nèi)已經(jīng)充滿蒸汽、可以關(guān)閉出氣口。如沒有溫度計(jì)，則當(dāng)出氣口排出的蒸汽相當(dāng)猛烈時(shí)，可以認(rèn)為滅菌器內(nèi)冷空氣已經(jīng)全部被蒸汽驅(qū)盡，可以關(guān)閉出氣口。這一點(diǎn)應(yīng)持別注意，因?yàn)槿绻淇諝鉀]有排盡，器內(nèi)雖然達(dá)到了一定的壓力，但并不會(huì)達(dá)到相應(yīng)所需的溫度。峴揚(yáng)斕滾澗輻灄興渙藺詐機(jī)憒頇驤經(jīng)。．關(guān)閉出氣口后，器內(nèi)蒸汽將不斷增多，壓力和溫度隨著升高。當(dāng)蒸汽壓達(dá)到所需的壓力時(shí)，即為滅菌開始時(shí)間，這時(shí)要調(diào)節(jié)火力大小，以維持所需的壓力。滅菌時(shí)間的長(zhǎng)短由滅菌物品決定。玻璃器皿、無菌水、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基可用1kg／ (℃)的壓力滅菌，／(℃)的壓力。詩(shī)叁撻訥燼憂毀厲鋨驁靈韜鰍櫝驥鱭。．滅菌時(shí)間到達(dá)后，停止加熱。．待壓力指針降到“”時(shí)，打開出氣口。如過早打開，管內(nèi)和瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基會(huì)因壓力驟降，而溫度并不同時(shí)很快下降，以致培養(yǎng)基翻騰，沾污錦塞。則鯤愜韋瘓賈暉園棟瀧華縉輅贊驏紆。．揭開器蓋，取出滅菌的物品，將器內(nèi)剩余的水放掉。．待已滅菌的物品冷卻后，置陰涼處。本實(shí)驗(yàn)，除學(xué)習(xí)培養(yǎng)基制備和高壓滅菌法外，還要為下次實(shí)驗(yàn)作好難備。所以所用培養(yǎng)皿、吸管、試管、錐形瓶、燒杯等玻璃器皿以及無菌水、培養(yǎng)基等的量均須根據(jù)下次實(shí)驗(yàn)所需準(zhǔn)備。脹鏝彈奧秘孫戶孿釔賻鏘詠繞敘驄驗(yàn)。四、思考題．培養(yǎng)基是根據(jù)什么原理配制的?營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的成分各起什么作用?．為什么濕熱滅菌比干熱滅菌優(yōu)越?實(shí)驗(yàn)六 微生物的染色一、目的學(xué)習(xí)微生物涂片染色的操作技術(shù)、掌握微生物的革蘭氏染色法。二、實(shí)驗(yàn)器材．菌種(由實(shí)驗(yàn)室提供)。．顯微鏡、載玻片、接種環(huán)、酒精燈等。．染料革蘭氏染色劑)草酸銨結(jié)晶紫染色液甲液 結(jié)晶紫 ％酒精 乙液 草酸銨 蒸餾水 混合甲、乙兩液即成。)碘液碘 碘化鉀 蒸餾水 先將碘化鉀溶解在一小部分水中，再將碘溶解在碘化鉀溶液中，然后加入其余的水即成。)沙黃染色液沙黃(蕃紅) ％酒精 取上述配好的沙黃酒精溶液與蒸溜水混勻，即成沙黃稀釋液，作革蘭氏染色用。三、操作方法及步驟革蘭氏染色．將實(shí)驗(yàn)所供菌種按單染色法作涂片、干燥并固定。．在涂面上，加草酸銨結(jié)晶紫染色液一滴約后，水洗。．加碘液后，水洗。．斜置載玻片于一燒杯之上，滴加％酒精脫色，并輕輕搖動(dòng)玻片，至流出的酒精不現(xiàn)紫色時(shí)立即停止滴加(約滴加—)，隨即水洗。為了節(jié)約酒精，也可將酒精滴至涂片上，靜置—后水洗。酒精脫色程度必須嚴(yán)加掌握。如脫色過度，則陽(yáng)性菌會(huì)被誤染為陰性菌，而脫色不夠時(shí)，陰性菌將被誤染為陽(yáng)性菌。鰓躋峽禱紉誦幫廢掃減萵輳慘纈騾窺。．加沙黃復(fù)染液，水洗。．吸干，置于油鏡下觀察，陽(yáng)性者為紫色，陰性者為紅色。四、思考題．微生物的染色原理是什么?．你用革蘭氏染色法染色后看到的細(xì)菌是什么顏色，屬于革蘭氏陰性還是陽(yáng)性?革蘭氏染色法在微生物學(xué)中有何重要意義?稟虛嬪賑維嚌妝擴(kuò)踴糶欏灣鯧飫驃餒。．革蘭氏染色法中若只做—的步驟而不用沙黃復(fù)染液復(fù)染，是否能分出革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌，為什么?陽(yáng)簍埡鮭罷規(guī)嗚舊巋錟麗鮑軫溈騫硨。．微生物經(jīng)固定后，是死了呢還是仍活著?實(shí)驗(yàn)七 微生物純種分離、培養(yǎng)及接種技術(shù)本實(shí)驗(yàn)的對(duì)象是水樣或活性污泥中微生物的純種分離和培養(yǎng)。通常，在處理不同水質(zhì)的廢水時(shí)，起作用的微生物群和種類也不同。我們除可用顯微鏡直接觀察微生物形態(tài)，大致了解其中的微生物種群外，更重要的還必須研究是哪些種類的微生物對(duì)該種廢水起生物氧化作用，其作用原理是什么，產(chǎn)生什么產(chǎn)物等等，以便提高處理效果。此外，有時(shí)我們還需從土壤環(huán)境中分離和培養(yǎng)純菌種來處理工業(yè)廢水。因此，為了從事以上這些研究工作，就必須學(xué)習(xí)微生物純種分離、培養(yǎng)及接種的技術(shù)，進(jìn)而再學(xué)會(huì)做微生物生理生化反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)，為廢水處理服務(wù)。在給水處理的細(xì)菌檢查中，細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和接種也是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。溈氣嘮戇萇鑿鑿櫧諤應(yīng)釵藹紼較騮額。微生物純種分離的方法有兩種：稀釋平板法和平板