【正文】 需加 10％血清．⑦對于血清支持細胞生長的生物學效應已得到證明，但對血清中的復雜成分至今尚未完全清楚．⑧血清中不僅存在促細胞生長因子，同對也存在細胞生長抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞所反映的生物學特性是細胞和復雜血清因子的綜合反應。12. 簡述完全培養(yǎng)基的組成及配制方法?組成：基礎培養(yǎng)基80％一95％血清 5％一20％ g/L青、鏈霉素 各100單位／毫升. 配制方法:⑴認真閱讀說明書⑵配制時要保證充分溶解，各種物質要在培養(yǎng)基完全溶解后添加⑶配制水應為雙蒸水或三蒸水⑷所用器皿應十分清潔⑸配制好后馬上過濾，低溫無菌保存。？簡述過濾除菌的全過程？將液體或氣體用微孔慮膜過濾,使大于孔徑的的細菌等微生物顆粒阻留,達到除菌的目的. 常用于不易高壓滅菌的物品。如：培養(yǎng)液、各種酶類等。，使用過的玻璃和塑料制品應如何處理后重復使用？1. 常用玻璃器皿清洗：浸泡（自來水）刷洗（洗潔精）酸泡5％鹽酸過夜（不少于6小時）流水沖洗蒸溜水浸泡和沖洗（注滿水－倒空）50℃烘干121℃高壓蒸汽滅菌20min2. 塑料制品的清洗： 料自制品現(xiàn)多是采用無毒并已經(jīng)特殊處理的成品，打開包裝即可用,多為一次性物品。必要時用：2% NaOH浸泡過夜自來水充分沖洗 ，清潔液洗刷 5%鹽酸溶液浸泡30分鐘自來水和蒸餾水沖洗（15－20遍）晾干備用 ,紫外線直接照射或輻照滅菌15．無菌操作的注意事項？、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％。 （如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時仍要過火。，動作要輕、準確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。，防止交叉污染16. 分別指出下列物品通常使用那種消毒方法進行消毒？（培養(yǎng)室、工作臺、玻璃制品、金屬器械、塑料制品，橡膠制品，培養(yǎng)用液、布類）.消毒方法分為三類： （A） 物理滅菌法（紫外線、濕熱、過濾等）。 （B） 化學滅菌法（各種化學消毒劑）。 （ C） 抗生素。1. 紫外線消毒：用于空氣，操作臺表面和不能使用其它法進行消毒和培養(yǎng)器 。紫外線燈應距地面 ，且消毒的物品不宜相互遮檔，照射不到的地方起不到消毒作用。時間30分鐘。2. 溫熱消毒：即高壓蒸氣消毒，是一種使用最廣泛、效果最好的消毒方法。常用物品消毒壓力及時間：培養(yǎng)液、橡膠制品10磅10分鐘；布類、玻璃制品、金屬器械18磅20分鐘。3. 過濾消毒：將液體或氣體用微孔慮膜過濾,使大于孔徑的的細菌等微生物顆粒阻留, 壓滅菌的物品。如：培養(yǎng)液、各種酶類等。4化學消毒法：利用消毒劑來消毒那些不能用物理方法消毒的物品和場地。最常見的是75%酒精及1‰的新潔而滅，前者主要用于操作者的皮膚，操作臺表面及無菌室內的壁面處理。后者則主要用器械的浸泡及皮膚和操作室壁面的擦試消毒。 5抗生素消毒：即抗生素滅菌，主要用于培養(yǎng)用液滅菌或預防培養(yǎng)物污染。17. 你認為細胞培養(yǎng)中微生物污染主要是通過那些途徑導致的，并簡要說明。(1)空氣：空氣是微生物傳播的最主要途徑。如凈化工作臺使用過久，濾器受塵埃阻塞，可使凈化工作不能正常進行。工作時不戴口罩或面對操作野大聲講話、咳嗽等使外界氣流過強。污染空氣可侵入操作野，造成污染。因此工作時減少空氣流動是防止污染的重要環(huán)節(jié)。(2)器材：各種培養(yǎng)器皿及器械清洗消毒不徹底，例如洗刷不干凈．污物殘留及培養(yǎng)用液等滅菌不徹底都可以引入有害物質。另外需要注意的是CO2溫箱．由于溫箱內濕度大，溫度適宜，取存細胞時不慎將培養(yǎng)液漏出，易使細菌、霉菌孽生，而CO2溫箱內是開放式培養(yǎng)．如不定期消毒,可形成污染. (3）操作：實驗操作無菌觀念不強、動作不準確、使用污染的器具．或封瓶時不嚴，都可發(fā)生污染。培養(yǎng)兩種以上細胞時，操作不規(guī)范、交叉使用吸管或營養(yǎng)液瓶等有可能導致細胞交叉污染。(4)血清：有些血清在生產(chǎn)時就已被支原體或病毒等污染，即可成為污染的來源。 (5）組織樣本：原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來源于組織樣本；另一方面手術時使用碘酒消毒，這些混入組織中的碘可以影響細胞生長。？配制時需注意什么？（見表二）？應如何配制?如何終止其活性？胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細胞骨架，從而使細胞分離。胰蛋白酶液濃度越高，作用越強，但超過一定限度會損傷細胞。胰蛋白酶是一種黃白色粉末，溶解及作用的最佳PH是8－9，用無Ca2+、Mg2+的PBS緩沖液配制，％ 。用濾器過濾除菌。胰蛋白酶液消化時間：210分鐘。用含血清培養(yǎng)液終止其對細胞的消化作用 （1）EDTA液：常用濃度為 ％，配制時采用無Ca2+、Mg2+平衡鹽液溶解，高壓滅菌后即可使用。（2）胰蛋白酶、EDTA:胰蛋白酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化率，但需注意EDTA不能被血清中和，消化后要徹底清洗，否則細胞易脫壁。（3）膠原酶：適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS或含血清的培養(yǎng)液配制，這樣實驗操作簡便同時提高細胞成活率。但膠原酶價格較高，大量使用將增加實驗成本。膠原酶的常用劑量為 200 U／ml（約為 lmg／ml）或 0．03％－0．3％。： 細胞株 密度抑制 接觸抑制 原代培養(yǎng) 傳代1細胞株（cell strain）：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養(yǎng)物稱細胞株。2密度抑制（density inhibition）：細胞數(shù)量到一定數(shù)量后引起抑制增殖的現(xiàn)象3接觸抑制（contact inhibition）：細胞匯合相互接觸后失去運動的現(xiàn)象。4原代培養(yǎng)（primary culture）：從體內取出細胞或組織的第一次培養(yǎng)。5傳代（passage）也稱再培養(yǎng)無論是否稀釋，將細胞從一個培養(yǎng)瓶轉移或移植到另一個培養(yǎng)瓶即稱為傳代或傳代培養(yǎng)。也稱再培養(yǎng)。21．細胞凍存與復蘇的基本原則是什么？1慢凍快融2當細胞冷到零度以下，可以產(chǎn)生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質濃度升高，并在細胞內形成冰晶。3如果緩慢冷凍，可使