生化技術(shù) 課件 第一章 生命大分子物質(zhì)的制備ppt課件-文庫吧
2025-01-03 19:03 本頁面
【正文】 含量較高，可以獲得高產(chǎn)量。以微生物為材料時(shí)有兩種情況： （ 1）微生物菌體 分泌 到培養(yǎng)基中的代謝產(chǎn)物和胞外酶等 （ 2）菌體 含有 的生化物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、核酸和胞內(nèi)酶等 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 另外，對(duì)預(yù)處理好的材料，若不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，應(yīng) 冷凍保存 ； 對(duì)于易分解的生物大分子應(yīng)選用 新鮮材料 制備 ； 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 第二節(jié) 確立測(cè)定方法 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 一、目的與要求 ? 生物大分子的兩個(gè)重要特征：極易失活和含量極微 ? 測(cè)定方法應(yīng)該： 簡便、靈敏、準(zhǔn)確、快速、專一 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 分析測(cè)定的方法主要有兩類： ?即生物學(xué)和物理化學(xué)的測(cè)定方法 。 ?生物學(xué)的測(cè)定法主要有：酶的各種測(cè)活方法 、 蛋白質(zhì)含量的各種測(cè)定法 、 免疫化學(xué)方法 、 放射性同位素示蹤法等； 二、常用的測(cè)定方法 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ?物理、化學(xué)方法主要有： 比色法 、氣相色譜和液相色譜法、 光譜法 （紫外／可見、紅外和熒光等分光光度法）、 電泳法 、以及核磁共振等。 ?實(shí)際操作中盡可能多用 儀器分析方法 ，以使分析測(cè)定更加快速、簡便。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 光譜法 ?不同的生命大分子物質(zhì)與相應(yīng)波長的光會(huì)發(fā)生特定的作用，依據(jù)作用結(jié)果可推斷出被測(cè)物質(zhì)的含量和部分理化性質(zhì)，這類測(cè)定方法為光譜法。 ?所需的樣品量少、操作簡單、反應(yīng)迅速、靈敏廣泛用于物質(zhì)的含量測(cè)定。 ?紫外光譜法、可見光光譜法、熒光光譜法、濁度法 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 紫外光譜法 利用某些生物大分子具有吸收紫外光的性質(zhì)而建立的一種方法。將一定濃度的待測(cè)物溶液，通過某一特定波長的紫外分光光度計(jì)，測(cè)定此溶液的消光值即可換算出待測(cè)物的濃度。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 芳香族氨基酸的紫外吸收 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ? 測(cè)定核酸 \蛋白質(zhì)的含量 : OD260= 50μ g/ml雙鏈 DNA 40μ g/ml單鏈 DNA（或 RNA） 20μ g/ml寡核苷酸 ? 測(cè)定核酸 \蛋白質(zhì)的純度 : DNA純品 : OD260/OD280 = RNA純品 : OD260/OD280 = 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 可見光光譜法 ?有色物質(zhì)溶液的顏色與其濃度有關(guān)。溶液的濃度越大，顏色越深。利用光學(xué)比較溶液顏色的深度，可以測(cè)定溶液的濃度。 ?可見光光譜法是基于 有色溶液對(duì)光的選擇性吸收而建立起來的一種分析方法。將待測(cè)物與相關(guān)試劑或酶作用后的有色產(chǎn)物置于相應(yīng)的可見光波長下，即測(cè)定其消光值 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 例如：測(cè)定某一蛋白質(zhì)溶液的濃度 方法：蛋白質(zhì)與相關(guān)試劑（如 雙縮脲試劑 ）作用后產(chǎn)生特定顏色的物質(zhì)（ 紫色絡(luò)合物 ），紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，于波長 540nm處進(jìn)行比色測(cè)定。 最后與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)即可計(jì)算出該待測(cè)蛋白質(zhì)溶液的濃度 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 利用有些生命大分子物質(zhì)自身可以吸收特定光波的能量后，發(fā)出熒光的特性而建立的一種方法。 精確性 重復(fù)性 靈敏度 比吸收光譜法好 熒光光譜法 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 濁度法 主要用于懸浮液的測(cè)定。 測(cè)定懸浮液在不被吸收的波長下表現(xiàn)的消光值。 不被吸收，主要是 散射、反射。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 光譜法 電化學(xué)法 生物活性檢測(cè)法 免疫分析法 生物傳感器 吸收光譜 法 熒光法 濁度法 直接測(cè)定法 比色法 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 第三節(jié) 細(xì)胞的破碎 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ?不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細(xì)胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同。 ?如動(dòng)物臟器的細(xì)胞膜較脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有較堅(jiān)固的纖維素、半纖維素組成的細(xì)胞壁，要采取專門的細(xì)胞破碎方法。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 一、機(jī)械破碎 ： 將剪碎的動(dòng)物組織置于研缽或勻漿器中，加入少量石英砂研磨或勻漿。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ： 這是一種較劇烈的破碎細(xì)胞的方法，通?？上扔眉矣檬称芳庸C(jī)將組織打碎，然后再用 10000r/min～ 20220r/min的內(nèi)刀式組織搗碎機(jī) (即高速分散器 )將組織的細(xì)胞打碎。
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