生化技術 課件 第一章 生命大分子物質(zhì)的制備ppt課件-文庫吧
2025-01-03 19:03 本頁面
【正文】 含量較高，可以獲得高產(chǎn)量。以微生物為材料時有兩種情況： （ 1）微生物菌體 分泌 到培養(yǎng)基中的代謝產(chǎn)物和胞外酶等 （ 2）菌體 含有 的生化物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、核酸和胞內(nèi)酶等 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 另外，對預處理好的材料，若不立即進行實驗，應 冷凍保存 ； 對于易分解的生物大分子應選用 新鮮材料 制備 ； 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 第二節(jié) 確立測定方法 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 一、目的與要求 ? 生物大分子的兩個重要特征：極易失活和含量極微 ? 測定方法應該： 簡便、靈敏、準確、快速、專一 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 分析測定的方法主要有兩類： ?即生物學和物理化學的測定方法 。 ?生物學的測定法主要有：酶的各種測活方法 、 蛋白質(zhì)含量的各種測定法 、 免疫化學方法 、 放射性同位素示蹤法等； 二、常用的測定方法 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 ?物理、化學方法主要有： 比色法 、氣相色譜和液相色譜法、 光譜法 （紫外／可見、紅外和熒光等分光光度法）、 電泳法 、以及核磁共振等。 ?實際操作中盡可能多用 儀器分析方法 ，以使分析測定更加快速、簡便。 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 光譜法 ?不同的生命大分子物質(zhì)與相應波長的光會發(fā)生特定的作用，依據(jù)作用結果可推斷出被測物質(zhì)的含量和部分理化性質(zhì)，這類測定方法為光譜法。 ?所需的樣品量少、操作簡單、反應迅速、靈敏廣泛用于物質(zhì)的含量測定。 ?紫外光譜法、可見光光譜法、熒光光譜法、濁度法 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 紫外光譜法 利用某些生物大分子具有吸收紫外光的性質(zhì)而建立的一種方法。將一定濃度的待測物溶液，通過某一特定波長的紫外分光光度計，測定此溶液的消光值即可換算出待測物的濃度。 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 芳香族氨基酸的紫外吸收 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 ? 測定核酸 \蛋白質(zhì)的含量 : OD260= 50μ g/ml雙鏈 DNA 40μ g/ml單鏈 DNA（或 RNA） 20μ g/ml寡核苷酸 ? 測定核酸 \蛋白質(zhì)的純度 : DNA純品 : OD260/OD280 = RNA純品 : OD260/OD280 = 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 可見光光譜法 ?有色物質(zhì)溶液的顏色與其濃度有關。溶液的濃度越大，顏色越深。利用光學比較溶液顏色的深度，可以測定溶液的濃度。 ?可見光光譜法是基于 有色溶液對光的選擇性吸收而建立起來的一種分析方法。將待測物與相關試劑或酶作用后的有色產(chǎn)物置于相應的可見光波長下，即測定其消光值 。 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 例如：測定某一蛋白質(zhì)溶液的濃度 方法：蛋白質(zhì)與相關試劑（如 雙縮脲試劑 ）作用后產(chǎn)生特定顏色的物質(zhì)（ 紫色絡合物 ），紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，于波長 540nm處進行比色測定。 最后與標準品比對即可計算出該待測蛋白質(zhì)溶液的濃度 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 利用有些生命大分子物質(zhì)自身可以吸收特定光波的能量后，發(fā)出熒光的特性而建立的一種方法。 精確性 重復性 靈敏度 比吸收光譜法好 熒光光譜法 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 濁度法 主要用于懸浮液的測定。 測定懸浮液在不被吸收的波長下表現(xiàn)的消光值。 不被吸收，主要是 散射、反射。 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 光譜法 電化學法 生物活性檢測法 免疫分析法 生物傳感器 吸收光譜 法 熒光法 濁度法 直接測定法 比色法 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 第三節(jié) 細胞的破碎 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 ?不同的生物體或同一生物體的不同部位的組織，其細胞破碎的難易不一，使用的方法也不相同。 ?如動物臟器的細胞膜較脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有較堅固的纖維素、半纖維素組成的細胞壁，要采取專門的細胞破碎方法。 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 一、機械破碎 ： 將剪碎的動物組織置于研缽或勻漿器中，加入少量石英砂研磨或勻漿。 生命科學學院：金晶 Copyright(C) 2022 ： 這是一種較劇烈的破碎細胞的方法，通常可先用家用食品加工機將組織打碎，然后再用 10000r/min～ 20220r/min的內(nèi)刀式組織搗碎機 (即高速分散器 )將組織的細胞打碎。
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1