生化技術(shù)課件第一章生命大分子物質(zhì)的制備［ppt課件］-wenkub
2023-02-02 19:03:50 本頁(yè)面
【正文】 光值 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 芳香族氨基酸的紫外吸收 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ? 測(cè)定核酸 \蛋白質(zhì)的含量 : OD260= 50μ g/ml雙鏈 DNA 40μ g/ml單鏈 DNA（或 RNA） 20μ g/ml寡核苷酸 ? 測(cè)定核酸 \蛋白質(zhì)的純度 : DNA純品 : OD260/OD280 = RNA純品 : OD260/OD280 = 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 可見光光譜法 ?有色物質(zhì)溶液的顏色與其濃度有關(guān)。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 光譜法 ?不同的生命大分子物質(zhì)與相應(yīng)波長(zhǎng)的光會(huì)發(fā)生特定的作用，依據(jù)作用結(jié)果可推斷出被測(cè)物質(zhì)的含量和部分理化性質(zhì)，這類測(cè)定方法為光譜法。在微生物的 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 ，酶和核酸的含量較高，可以獲得高產(chǎn)量。 動(dòng)物組織 必須選擇 有效成份含量豐富 的臟器組織為原材料，先進(jìn)行絞碎、脫脂等處理后在適當(dāng)?shù)娜軇┲刑崛?，如果所要求的成分在?xì)胞內(nèi)，則要先破碎細(xì)胞。 一、材料的選擇 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ? 有效成分 ： 指欲純化的某種單一的生命大分子物質(zhì)。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 材料的選擇與處理 第一節(jié) 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 制備生物大分子，首先要選擇適當(dāng)?shù)纳锊牧稀? 首要了解生物大分子的理化性質(zhì)： 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ④ 固態(tài)時(shí)對(duì)溫度、含水量和凍干時(shí)的穩(wěn)定性。 ?正是這些特點(diǎn)致使蛋白質(zhì)的分離純化和分析的難度極大。 ⑵通常以 復(fù)合物 的形式存在，提取分離困難。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 在自然科學(xué)，尤其是生命科學(xué)高度發(fā)展的今天，蛋白質(zhì)、酶和核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能的研究是探求生命奧秘的中心課題。生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 第一章 生命大分子物質(zhì)的制備 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 生物大分子 (biomacromolecule) ? 通常是指動(dòng)物、植物和微生物在進(jìn)行新陳代謝時(shí)產(chǎn)生 蛋白質(zhì)和核酸 等有機(jī)化合物的總稱。生物大分子結(jié)構(gòu)與功能的研究， 必須首先解決生物大分子的制備問題 ，沒有能夠達(dá)到足夠純度的生物大分子的制備工作為前題，結(jié)構(gòu)與功能的研究就無(wú)從談起。 ⑶許多生物大分子離開了生物體環(huán)境就 極易失活 ，因此分離過程中如何防止其失活，是生物大分子提取制備最困難之處。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ① 在水和各種有機(jī)溶劑中的 溶解性 。 ⑤其他化學(xué)性質(zhì)：如對(duì)各種蛋白酶、水解酶的穩(wěn)定性和對(duì)各種化學(xué)試劑的穩(wěn)定性。材料的來源無(wú)非是動(dòng)物、植物和微生物及其代謝產(chǎn)物。 ? 雜質(zhì) ： 有效成分以外的其他物質(zhì)的統(tǒng)稱。 二、材料的處理 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ? 冰凍 70℃ 保存?zhèn)溆幂^好 ?干燥 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 植物材料 必須清洗 ,去殼，脫脂，并注意植物 品種 和 生長(zhǎng)發(fā)育狀況 不同，其中所含生物大分子的量變化很大，另外與季節(jié)性關(guān)系密切。以微生物為材料時(shí)有兩種情況： （ 1）微生物菌體 分泌 到培養(yǎng)基中的代謝產(chǎn)物和胞外酶等 （ 2）菌體 含有 的生化物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、核酸和胞內(nèi)酶等 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 另外，對(duì)預(yù)處理好的材料，若不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，應(yīng) 冷凍保存 ； 對(duì)于易分解的生物大分子應(yīng)選用 新鮮材料 制備 ； 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 第二節(jié) 確立測(cè)定方法 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 一、目的與要求 ? 生物大分子的兩個(gè)重要特征：極易失活和含量極微 ? 測(cè)定方法應(yīng)該： 簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、快速、專一 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 分析測(cè)定的方法主要有兩類： ?即生物學(xué)和物理化學(xué)的測(cè)定方法 。 ?所需的樣品量少、操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)迅速、靈敏廣泛用于物質(zhì)的含量測(cè)定。溶液的濃度越大，顏色越深。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 例如：測(cè)定某一蛋白質(zhì)溶液的濃度 方法：蛋白質(zhì)與相關(guān)試劑（如 雙縮脲試劑 ）作用后產(chǎn)生特定顏色的物質(zhì)（ 紫色絡(luò)合物 ），紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，于波長(zhǎng) 540nm處進(jìn)行比色測(cè)定。 不被吸收，主要是 散射、反射。 生
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