【正文】 ?碘 碘化鉀 （ Wagner） KII2 棕褐色，紅棕色 沉淀 ?碘化鉍鉀 （ Dragendoff） BiI3?KI 黃色到橘 紅色 沉淀 ?碘化汞鉀 （ Mayer試劑） HgI2?2KI 類(lèi)白色 沉淀 若加過(guò)量試劑，沉淀又被溶解。 ?硅鎢酸 (Bertrand試劑 )SiO2?12WO3 類(lèi)白色沉淀 ?苦味酸 (Hager試劑 ) 2,4,6三硝基苯酚 黃色沉淀 ?雷氏銨鹽 (Ammoniumreineckate) 硫氰酸鉻銨試劑 ， 與季銨型生物堿反應(yīng)生成紅色沉淀或結(jié)晶 。 四、生物堿的鑒定（一）沉淀反應(yīng) （ 1） 通常在酸性水溶液中生物堿成鹽狀態(tài)下進(jìn)行； （若在堿性條件下則試劑本身將產(chǎn)生沉淀） （ 2） 在稀醇或脂溶性溶液中時(shí)，含水量 50%； （當(dāng)醇含量 50%時(shí)可使沉淀溶解） （ 3） 沉淀試劑不易加入多量。 （如：過(guò)量的碘化汞鉀可使產(chǎn)生的沉淀溶解） 四、生物堿的鑒定（一）沉淀反應(yīng) （ 1） 鑒別時(shí)每種 Alk需采用三種以上沉淀試劑； （沉淀試劑對(duì)各種 Alk的靈敏度不同） （ 2） 直接對(duì)中藥酸提液進(jìn)行沉淀反應(yīng)，則 陽(yáng)性 結(jié)果 ， 不能判定 Alk的存在 陰性 結(jié)果可判斷無(wú) Alk存在。 氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)等 + 沉淀試劑 —— 沉淀 四、生物堿的鑒定（一）沉淀反應(yīng) （ 1） 礬酸銨 濃硫酸溶液 （ Mandelin試劑）為 1%礬酸銨的濃硫酸溶液。如遇阿托品顯紅色，可待因顯藍(lán)色，士的寧顯紫色到紅色。 （ 2） 鉬酸銨 濃硫酸溶液 （ Frohde試劑）為 1%鉬酸鈉或鉬酸銨的濃硫酸溶液，如遇烏頭堿顯黃棕色，小檗堿顯棕綠色，阿托品不顯色。 （ 3） 甲醛 濃硫酸試劑 （ Marquis試劑）為 30%甲醛溶液 10ml濃硫酸的混合溶液。如遇嗎啡顯橙色至紫色，可待因顯紅色至黃棕色。 四、生物堿的鑒定（二）顯色反應(yīng) 薄層色譜 吸附劑：硅膠、氧化鋁 展開(kāi)劑：以苯、氯仿為主 顯色劑： 改良碘化鉍鉀 因硅膠為弱酸性，因此需加堿處理： 1）在濕法鋪板時(shí)加一定量的 NaOH溶液，使板呈堿性。 2）在中性展開(kāi)劑中加入一定量的二乙胺或氨水（如氯仿 二乙胺 9﹕ 5或 9﹕ 1） 3）在層析槽中放一盛有氨水的小杯。 四、生物堿的鑒定（三） 色譜檢識(shí) 紙色譜 固定相：水、甲酰胺、酸性緩沖液 高效液相色譜 四、生物堿的鑒定（三） 色譜檢識(shí) 一、提取 （一）總生物堿的提取 植物中生物堿的性質(zhì)和存在狀態(tài)決定提取方法。 常用提取方法： ※ 水蒸氣蒸餾法： 用于具有揮發(fā)性的生物堿，如 麻黃堿 及液體生物堿。 ※ 升華法： 用于具有升華性的生物堿，如 咖啡因 。 ※ 溶劑法： 用于大多數(shù)生物堿。 主要介紹溶劑提取法 第二節(jié) 生物堿的提取和分離 1. 水或酸水提取法 原理 ：①利用生物堿鹽易溶于水，難溶或不溶于親脂性有機(jī)溶劑的溶解性能，用水進(jìn)行提取。 ②用酸水提取可使生物堿都以鹽的形式被提出，提高提取率。 常用的酸 ： ％～ 1％的乙酸、硫酸、鹽酸或酒石酸等。 提取方法 ：浸漬法、滲漉法、煎煮法。 此方法的 缺點(diǎn) 是提取液體積大，濃縮困難，水溶性雜質(zhì)多。 2. 醇類(lèi)溶劑提取法 原理 ：游離生物堿及其鹽一般都能溶于乙醇和甲醇。 提取方法： 浸漬法、滲漉法、加熱回流（連續(xù)回流）提取法。 此方法的 缺點(diǎn) 是含有大量脂溶性雜質(zhì)。 3. 親脂性有機(jī)溶劑提取法 原理 ：利用游離生物堿易溶于低極性有機(jī)溶劑，進(jìn)行提取。 提取方法 ：冷浸法、加熱回流（連續(xù)回流）提取法。 此方法的 特點(diǎn) 是 ① 提取前需用堿堿化。 ② 只能提取親脂性生物堿，親水性生物堿不被提出 。 ③ 雜質(zhì)少，易于進(jìn)一步純化。 ④ 毒性大，易燃易爆。 （二）水溶性生物堿堿的提取 沉淀法 溶劑法 二、分離 （一）總生物堿的初步分離 （二）生物堿單體的分離 利用生物堿堿性的差異進(jìn)行分離 即在不同 pH條件下進(jìn)行分離 —— pH梯度法，有兩種操作： 方法 1 總生物堿 / 酸水溶解 │ │用堿調(diào)節(jié) PH由低到高 │每調(diào)一次用 氯仿萃取 一次 ┌────┬───┴───┬─────┐ ↓ ↓ ↓ ↓ 氯仿液 氯仿液 氯仿液 氯仿液 PH值： 低 ─────────────────→ 高 得到的生物堿堿度： 弱 ─────────────────→ 強(qiáng) 方法 2 總生物堿 / 氯仿溶解 │ │用不同 pH緩沖酸溶液 依次 萃取 ┌────┬───┴───┬─────┐ ↓ ↓ ↓ ↓ 緩沖液 緩沖液 緩沖液 緩沖液 PH值： 高 ─────────────────→ 低 得到的生物堿堿度： 強(qiáng) ─────────────────→ 弱 采用 pH梯度法分離前，通常先用 多緩沖紙色譜 法對(duì)總堿中各生物堿的堿度強(qiáng)弱作初步了解，據(jù)此調(diào)節(jié) pH值。 利用生物堿或生物堿鹽溶解度的差異進(jìn)行分離 生物堿以及生物堿鹽在不同溶液的溶解度存在明顯的差異，可用于分離。 如： 氧化苦參堿 是 苦參堿 的氮氧化物，極性稍大，不溶于乙醚。而苦參堿溶于乙醚，于兩者的氯仿液中加入乙醚，氧化苦參堿即可析出。 如： 麻黃堿 草酸鹽在水中的溶解度比偽麻黃堿草酸鹽的溶解度小，可以自水溶液中先行析出。 某些生物堿特殊功能團(tuán)（羥基、內(nèi)酯鍵和內(nèi)酰胺鍵等）能發(fā)生可逆性化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致其溶解性改變，從而與其他成分分離。 1）酚性堿的分離 2）內(nèi)酯類(lèi)和內(nèi)酰胺類(lèi)生物堿的分離 H O－ Ar≡N O－ Ar≡N OH （苛性堿） H＋ （氯化銨） 酚鹽（溶于水） （溶于氯仿等）酚性堿 o oN oC O O O HN H2C O O（溶于氯仿等） （溶于水） OH / Δ H+ 利用生物堿的特殊官能團(tuán)分離 利用色譜法分離 1）吸附柱色譜（常用）常用氧化鋁或硅膠作為吸附劑，以氯仿、苯等為底劑的溶劑系統(tǒng)作為洗脫劑，其中加少量堿性試劑，可改善分離效果。 2）分配柱色譜 例如三尖衫酯堿和高三尖衫酯堿的分離。 3）高效液相色譜法（ HPLC） 這是一種現(xiàn)代高效的分離分析方法。常用 C18反相色譜柱，流動(dòng)相以甲醇 水、乙腈 水為底劑。 麻黃（ herba ephedrae）為麻黃科草麻黃 (Ephedra sinica Stapf.)、中麻黃 (Ephedra intermedia Schrenk et .)或木賊麻黃 (Ephedra equisetina Bge.)的干燥草質(zhì)莖。具有發(fā)汗解表、宣肺平喘、利水消腫的作用。麻黃中含有多種生物堿 ,因產(chǎn)地和品種的不同有一定的差異 ,一般以麻黃堿和偽麻黃堿為主 ,此外還含少量甲基麻黃堿、甲基偽麻黃堿和去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿。 第三節(jié) 應(yīng)用 一、 麻黃中生物堿類(lèi)成分的提取分離技術(shù) （一）麻黃中主要有效成分及結(jié)構(gòu) 麻黃中含有多種生物堿，以麻黃堿和偽麻黃堿為主，其次是甲基麻黃堿和去甲基麻黃堿。它們的結(jié)構(gòu)如下： CH OCHC H 3HN H