《基因工程工具酶》ppt課件-文庫吧
2024-12-24 04:51 本頁面
【正文】 i n d Ⅲ H i n d Ⅱ 特性 Ⅰ 型 Ⅱ 型 Ⅲ 型 限制和修飾活性 單一功能 單一功能 雙功能 識(shí)別與切割位點(diǎn) 分別，隨機(jī)切割，相距較遠(yuǎn) 同一位點(diǎn) 相距 510bp 在基因工程中意義 無用 非常有用 意義不大 限制性核酸內(nèi)切酶的分類 限制性核酸內(nèi)切酶的類型 主要特性 I 型 II 型 III 型 限制修飾 多功能 單功能 雙功能 蛋白結(jié)構(gòu) 異源三聚體 同源二聚體 異源二聚體 輔助因子 ATP Mg2+ SAM Mg2+ ATP Mg2+ SAM 識(shí)別序列 TGAN8TGCT AACN6GTGC 旋轉(zhuǎn)對(duì)稱序列 GAGCC CAGCAG 切割位點(diǎn) 距識(shí)別序列 1kb處隨機(jī)性切割 識(shí)別序列內(nèi)或附近特異性切割 距識(shí)別序列下游 2426bp處 二、限制性內(nèi)切酶作用機(jī)制 限制性內(nèi)切酶以雙鏈 DNA為底物，識(shí)別特定的核苷酸序列，切斷特定位置的磷酸二酯鏈，產(chǎn)生具有 3’OH和 5’P的 DNA片段。 限制性內(nèi)切酶作用過程 點(diǎn)擊播放 三、限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列 限制性內(nèi)切酶在雙鏈 DNA上識(shí)別的特殊核苷酸序列稱為識(shí)別序列。 絕大多數(shù)的 Ⅱ 型限制性核酸內(nèi)切酶都能夠識(shí)別由 4~8個(gè)核苷酸組成的特定的核苷酸序列。限制性核酸內(nèi)切酶就是從其識(shí)別序列內(nèi)切割 DNA分子的，因此這些識(shí)別序列又叫核酸內(nèi)切酶的切割位點(diǎn)或靶序列。 理論上，某限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列長度為 n個(gè)核苷酸，則該酶切割 DNA的頻率為 1/4n，也就是說 DNA每隔 4n個(gè)核苷酸便 會(huì)出現(xiàn)一次該酶的識(shí)別序列。 識(shí)別序列 ? 識(shí)別序列有連續(xù)的 （ 如 GATC） 和間斷的 (如GANTC)兩種 ， 它們都呈回文結(jié)構(gòu) 。 A B C C’ B’ A’ A’ B’ C’ C B A A’ B’ N’ B A A B N B’ A’ A B B’ A’ A B B’ A’ 或 或 ? 回文結(jié)構(gòu)（ palindrome）：序列正讀和反讀是一樣的，即有一個(gè)中心對(duì)稱軸
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