sds-page電泳培訓(xùn)資料-文庫吧
2025-09-08 15:03 本頁面
【正文】 程要迅速 , 催化劑 TEMED要在注膠前再加入 ,否則凝結(jié)無法注膠 .注膠過程最好一次性完成 ,避免產(chǎn)生氣泡 . + ※ 水封的目的是為了使分離膠上延平直，并排除氣泡 ※ 凝膠聚合好的標(biāo)志是膠與水層之間形成清晰的界面 . 倒出水并用濾紙把剩余的水分吸干 ,按比例配好濃縮膠 ,連續(xù)平穩(wěn)加入濃縮膠至離邊緣 5mm處 ,迅速插入樣梳 ,靜臵 40分鐘 . ※ 樣梳需一次平穩(wěn)插入 ,梳口處不得有氣泡 ,梳底需水平 . 把樣品稀釋到合適濃度，按樣品和樣品緩沖液 3:1的比例加入 MARKER 10UL水 +1ULMARKER+5UL還原BAFFUR 沸水煮 5分鐘，離心 8000RPM/5分鐘，然后上樣 ：電泳結(jié)束后，撬開玻璃板，將凝膠板做好標(biāo)記后放在塑料盒內(nèi)，加入染色液，染色過夜。 脫色：染色后的凝膠，棄掉染色液，加入脫色液在搖床上再脫色，直到蛋白質(zhì)區(qū)帶清晰。 ※ 剝膠時(shí)要小心 ,保持膠完好無損 ,染色要充分 . 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：凝膠成像系統(tǒng) SDSPAGE電泳過程中影響結(jié)果的因素： 1. 配膠緩沖液系統(tǒng)對電泳的影響？ 在 SDS－ PAGE不連續(xù)電泳中，制膠緩沖液使用的是 Tris－ HCL緩沖系統(tǒng)，濃縮膠是 ，分離膠 ；而電泳緩沖液使用的Tris－甘氨酸緩沖系統(tǒng)。在濃縮膠中，其 pH環(huán)境呈弱酸性，因此甘氨酸解離很少，其在電場的作用下，泳動(dòng)效率低；而 CL離子卻很高，兩者之間形成導(dǎo)電性較低的區(qū)帶，蛋白分子就介于二者之間泳動(dòng)。由于導(dǎo)電性與電場強(qiáng)度成反比，這一區(qū)帶便形成了較高的電壓剃度，壓著蛋白質(zhì)分子聚集到一起，濃縮為一狹窄的區(qū)帶。當(dāng)樣品進(jìn)入分離膠后，由于膠中 pH的增加，呈堿性，甘氨酸大量解離，泳動(dòng)速率增加，直接緊隨氯離子之后，同時(shí)由于分離膠孔徑的縮小，在電場的作用下，蛋白分子根據(jù)其固有的帶電性和分子大小進(jìn)行分離。 所以， pH對整個(gè)反應(yīng)體系的影響是至關(guān)重要的，實(shí)驗(yàn)中在排除其他因素之后仍
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