[醫(yī)學(xué)]第六章 中藥含量測(cè)定方法-文庫(kù)吧
2024-10-03 22:53 本頁(yè)面
【正文】 邊都除以 [A]m， VR = Vm + Vs ([A]s / [A]m) = Vm + KVs = Vm(1+k’) 流動(dòng)相流速恒定， tR = to (1 + k’) 塔板理論 理論塔板數(shù) N = (tR / W1/2)2 N是反映物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相中動(dòng)力學(xué)特征的重要參數(shù)，是代表一根色譜柱效能的指標(biāo)。 N保持不變， tR ， W1/2 —— “一般色譜現(xiàn)象” 理論塔板高度 H = L / N —— 碼書(shū)原理 H 的意義？ 實(shí)際上，色譜中并不存在塔板，是一種理論假設(shè) 速率方程理論 渦流擴(kuò)散 縱向分子擴(kuò)散 傳質(zhì)阻力 流動(dòng)相中傳質(zhì) 固定相里流動(dòng)相中傳質(zhì)固定相中傳質(zhì) 理論塔板高度 H = 2ldp + CdDm/u + (Cm+Csm)dp2u/Dm + Csdf2u/Ds = A + B/u + Cu Van Deemter 方程 色譜分離的量度 —a和 Rs N或 H僅作為色譜柱效率的量度，但不能衡量在同一根色譜柱上兩個(gè)物質(zhì)分離的好壞。 分離系數(shù) a = k2’/k1’ = tR2’/tR1’ = VR2’/VR1’ a代表了兩個(gè)物質(zhì)在相同的色譜條件下的分離選擇性。 a只是從熱力學(xué)上表示兩物質(zhì)分離的可能性，直觀地看，僅表示兩峰相差多遠(yuǎn)，沒(méi)有考慮峰的寬度。 由于一般色譜現(xiàn)象的存在，峰寬隨著保留時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。峰相距再遠(yuǎn)，峰太寬，仍然不能分離。 分離度 Rs = 2 (tR2tR1) / (W2+W1) 良好的分離應(yīng)該是：峰之間有一定的距離，峰形盡量窄。 相鄰兩個(gè)峰，令 W2 = W1 ，則 Rs = (tR2tR1) / W2 )39。k1 39。k()1(N41Rs22??a?a??式中： (tR2tR1) 反映 k’值的差異，受熱力學(xué)控制； W 反映柱效的高低，受動(dòng)力學(xué)影響。 Rs將 N和 a結(jié)合起來(lái)，將決定色譜過(guò)程的熱力學(xué)因素和動(dòng)力學(xué)因素綜合起來(lái)考慮。 達(dá)到基線分離的分離度 Rs： 一般分析要求的分離度 Rs 分離度與實(shí)際分離程度之間的關(guān)系，與兩個(gè)峰的相對(duì)大小有關(guān) 第三部分 HPLC分析方法 的建立和應(yīng)用 1. HPLC在分析中的地位 2. HPLC分析的內(nèi)容和要求 3. 產(chǎn)品分析中 HPLC模式和儀器配置 4. HPLC耗材的選用 5. HPLC分析過(guò)程中的注意點(diǎn) 6. 產(chǎn)品分析中 HPLC方法的建立 常用 HPLC模式和儀器配置 模式 吸附 鍵合相 離子交換 尺寸排阻 疏水作用 親和 色譜柱 C18 C8 Phenyl CN NH2 SiO2 SO3H 泵 一元 二元 三元 四元 檢測(cè)器 UV PDA FL RI EC ELSD MSD HPLC耗材的選用 色譜柱 : C18 ， C8柱的通用性 無(wú)定型填料 —柱效低，強(qiáng)度差，壽命短，價(jià)格低廉， 如 LiChrosorb RP18， YWGC18 球形填料 — 柱效較高，強(qiáng)度高，價(jià)格適中，如 LiChrospher C18， Spheresorb ODS， Kromasil C18 對(duì)稱性填料 —柱效高，峰形對(duì)稱，價(jià)格較高，如 Symmetry ODS， 新一代反相柱 —100％水性流動(dòng)相兼容，耐酸堿性強(qiáng)，價(jià)格昂貴，如 Prevail， Platimum 色譜柱的保養(yǎng) —裝卸、沖洗、貯存 C O O HN OC O O H2C O O HC O O HN O 2不同品牌、不同規(guī)格色譜柱的比較 3NPA 4NPA 正、反相鍵合相色譜的概念 正相鍵合相色譜 — 鍵合相極性強(qiáng)，流動(dòng)相極性弱，極性弱的物質(zhì)先出峰 反相鍵合相色譜 — 鍵合相極性弱，流動(dòng)相極性強(qiáng)，極性強(qiáng)的物質(zhì)先出峰 鍵合相極性中等，流動(dòng)相極性相對(duì)于鍵合相極性的強(qiáng)弱決定鍵合相色譜的正、反相 反相色譜流動(dòng)相的選用 純度：有機(jī)溶劑 —HPLC級(jí)；水 —超純水； 無(wú)機(jī)物 —GR；表面活性劑 —HPLC級(jí) 中性成分：甲醇 水、乙腈 水、四氫呋喃 水 酸 —乙酸、三氟乙酸、磷酸、高氯酸、正離子對(duì) 堿 —乙二胺、三乙胺、 Na2CO (NH4)2CO 負(fù)離子對(duì) 過(guò)濾：有機(jī)溶劑 mm，水性溶液 mm 脫氣：超聲波、氦氣、在線脫氣 某黃酮提取物的色譜圖 Impurity 正相色譜流動(dòng)相的選用 正己烷、庚烷、氯仿 重現(xiàn)性的重要性 通過(guò)有限次測(cè)定獲取準(zhǔn)確可靠的結(jié)果是企業(yè)的追求。 同一份樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣得到再現(xiàn)的譜圖是HPLC分析的基本保障。 多次取樣，重復(fù)測(cè)定得到再現(xiàn)的結(jié)果是 HPLC分析的最終目標(biāo)。 溶劑的選擇 — 樣品溶液的制備（ 10 ml) 流動(dòng)相最好 流動(dòng)相的組成部分次之 與流動(dòng)相混溶的其它溶劑亦可，但最好用流動(dòng)相或流動(dòng)相的一個(gè)組成部分稀釋
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