【正文】 以快速育肥畜禽；在動物復合飼料里添加麥冬成分還可以有效防治畜禽哮喘、增強動物機體的免疫力、抵抗流行性疾病 [3]。近年來，隨著世界人口的老齡化，導致糖尿病、腦血栓等疾病發(fā)病年齡提前，麥冬因其含有多種生物功能性物質在治療這些病癥方面有良好的功效，從而引起國內外醫(yī)藥工作者的一致好評。麥冬不僅可以入藥，還可作為保健食品的理想來源。麥冬作為新 型食品、藥源將越來越受到人們的關注。 研究現(xiàn)狀及存在問題 現(xiàn)代研究證明，麥冬含多種甾體皂苷、 β谷甾醇、豆甾醇等。麥冬煎劑能顯著提高實驗動物耐缺氧能力，增加冠狀動脈血流量，對心肌缺血有明顯保護作用，并能抗心律失常及改善心肌收縮力；還能協(xié)調胰島素功能，降低血糖，促使胰島細胞恢復正常。對白色葡萄球菌、大腸桿菌和傷寒桿菌有較強的抑制作用。有一定的鎮(zhèn)靜作用。能提高機體的免疫功能。目前， 對麥冬主要藥理作用及其有效部位的研究 ,現(xiàn)已取得階段性成果。但對于麥冬多糖降血糖的作用機理處于實驗研究階段，仍有待進一步探討。 抗心肌缺血作用 現(xiàn)代研究顯示麥冬多糖可以抗心肌缺血，增加心肌營養(yǎng)血流量，使缺血氧的心肌細胞較快獲得恢復與保護，減少心肌細胞的受損。 異丙腎上腺素誘導大鼠心肌壞死實驗結果表明 ,麥冬多糖抗心肌缺血的活性部位西南科技大學本科生畢業(yè)論文 4 為分子量 10000以下的多糖。進一步研究表明 ,麥冬活性多糖可拮抗垂體后葉素引起的S T段抬高 ,可使結扎大鼠冠脈后升高的 S T段明顯降低 ,同時降低動物血清中 CK和LDH 含量升高 ,提示可保護 心肌 細胞，增加細胞的抗缺血抗缺氧能力，提高膜的穩(wěn)定性， 防止心肌進一步的壞死， 而且麥冬多糖 對心肌缺血造成 的 SOD降低和 MDA增加有一定的抑制作用。由此可見 ,麥冬活性多糖可保護心肌細胞 ,同時具有抑制心肌缺血造成的自由基生成增加和清除氧自由基的作用。其機制可能涉及冠脈擴張和冠脈流量的增加 [4]。 抗血栓形成作用 由于血栓形成于血管內皮細胞（簡稱 VEC）損傷密切相關，因此為了進一步探討麥冬保護 VEC的分子機制，做如下實驗， 取人臍靜脈內皮細胞 (HUVEC) ,用內毒素造成凋亡細胞模型 ,研究麥冬藥物血清抗其凋亡的保護作用 ,結果發(fā)現(xiàn)， 麥冬煎劑以人臨床用量 動物等效劑量比值 血清稀釋度為參考濃度制備的含藥血清 可明顯保護人臍靜脈內皮細胞 ( HUVEC)，減少內毒素對其的損傷，而且以麥冬藥物作用血清后，HUVEC活細胞明顯增多，死亡細胞與凋亡細胞數(shù)目明顯減少，并降低其 MDA水平并增加SOD含量。其作用機理與減少自由基，增加超氧化物歧化酶有關。 [5]血管內皮細胞的損傷 ,促進血栓形成 ,加重以 “瘀血 ”為主要病機的疾病。麥冬能滋補陰液，抗 HUVEC凋零，并且 通過抗氧化作用、抑制鈣離子跨膜流動 ,對血管內皮細胞的保護作用 ,防止 “血瘀 ”證的發(fā)生，進而有效的防止血栓病的發(fā)生。 免疫活性 多糖作為一種生物反應調節(jié)劑 (BRMS),對免疫系統(tǒng)有重要的調節(jié)作用 ,主要表現(xiàn)為免疫增強和刺激作用。國內外大量的研究表明 ,多糖對體液免疫有作用。 研究山麥冬多糖對免疫低下小鼠的保護作用 ， 采用小白鼠 60Coγ射線全身照射和注射環(huán)磷酰胺 ,形成免疫損傷模型 ,觀察山麥冬多糖對模型小鼠的免疫活性的影響 .結果 表明， 與模型小鼠 相 比較 ,山麥冬多糖高劑量組 (1600mg/kg)和低劑量組 (400mg/kg)對 60Coγ全身照射 和環(huán)磷酰胺造成的小鼠免疫器官損傷有一定的 保護或者 恢復作用 ,能顯著增強免疫低下小鼠的胸腺和脾臟重量 ,還能 在一定程度上 升高注射環(huán)磷酰胺小鼠 外周血的白細胞數(shù) ， 麥冬多糖可能具有促使 T 淋巴細胞和 B淋巴細胞增殖的作用。 [6]另外，西南科技大學本科生畢業(yè)論文 5 小鼠體內實驗表明 ,山麥冬多糖還對小鼠原發(fā)性肝癌實體瘤有一定的抑制作用 。 此研究顯示山麥冬多糖作為一種低毒多效的免疫增強劑 ,在臨床上應有一定的應用價值。 降血糖 在研究麥冬多糖對正常和試驗性糖尿病小鼠血糖的影響中發(fā)現(xiàn) ,麥冬多糖 為 75 mg/ kg、 150mg/ kg 和 300mg/ kg 的劑量灌胃對蔗糖、鏈脲霉素誘發(fā)高血糖引起的小鼠高血糖均有抑制作用 , 其對正常小鼠血糖無明顯影響 ， 但能推遲大鼠口服蔗糖后血糖升 高時間 ， 能降低自發(fā)性高血糖及升高血清胰島素 ，并且 能降低鏈脲霉素誘發(fā)高血糖大鼠的血糖及糖化血紅蛋白 [7]。 其他作用 麥冬具有多種藥理作用 ,有很高的藥用和保健價值 ,研究表明，麥冬還 具有多種藥理活性 ,如平喘、抗過敏、 耐缺氧、抗衰老、 保肝、對胃腸道等作用 [89]。 然而，其藥理作用是否僅限于上述幾個方面，還有待于我們進行更深入細致的研究。 綜上所述，麥冬中的多糖成分具有多種生物活性，具有很高的應用價值。麥冬作為主要組成藥物，廣泛應用于心腦血管，免疫調節(jié)和腫瘤治療及糖尿病等方面已經(jīng)取得了很大的進展。 麥冬 不但作為單味藥對疾病的治療取得顯著成效 ,而且作為主藥與其它中藥組成復方藥對疾病治療也取得了一定的發(fā)展。 而作為中藥對疾病起作用的具體成分多糖的研究也倍受廣大科研工作者的關注。隨著對麥冬及其主要有效成分多糖的深入研究，麥冬不僅在中醫(yī)治療，而且在細胞分子水平中應用前景更加光明。 研究的目的及意義 近年來，有文獻報道單味麥冬全草可以治療糖尿病 [10]，麥冬的水提取物和正丁醇提取物可降低正常及糖尿病家兔的血糖 [11]，這引起國內外醫(yī)學界的重視，紛紛轉向中醫(yī)藥麥冬在糖尿病治療中的作用 , 希望從中能找到有效的 解決方法。 本實驗通過 四氧嘧啶制備小鼠糖尿病模型， 進一步探討 川麥冬多糖對糖尿病小鼠血糖、體重的影響，為臨床實驗提供實驗依據(jù)。 西南科技大學本科生畢業(yè)論文 6 第 2章 材料和方法 實驗材料 實驗動物 ： NIH 小鼠 , 雌雄兼用 , 雌鼠未孕 , 體質量 22～ 24g ,由四川大學醫(yī)學院試驗動物場提供。 主要儀器與試劑 ： 眼科剪、鑷子、低溫冰箱、 移液器及吸頭 、電子天平、手套、5ml 及 10ml 離心管、 1ml 注射器、灌胃針、標記筆、 Tips 等。 優(yōu)降糖片 , 天津太平洋生制藥有限公司 ,批號 040502。 四氧嘧啶 ( Alloxan) , 美國 Sigma 化學公司產品，批號 068K1131。 強生穩(wěn)步型 ONETOUCH SureStep 血糖試紙 及 測試儀 (美國 強生 公司 ) 麥冬多糖 選取四川綿陽三臺麥冬塊莖 1kg，將麥冬放于瓷盤中 60176。C 烘干至恒重。 然后將粉碎好后的麥冬盛于 1000ml 圓底燒瓶中，加入 6 倍量的 95%乙醇，90176。C 的水浴鍋里回流提取 90min，連續(xù) 3 次， 醇提后殘渣揮干乙醇 , 殘渣用 8 倍水煎提取后 ,用紗布過濾混合液再 用活性炭脫色 。 脫色后使用旋轉蒸發(fā)儀將液體濃縮到原來的 1/5 左右， 所得到的 濃縮 液在進行脫蛋白。脫蛋白 利用三氯甲烷 和正丁醇 5:1混合液， 用量為濃縮液的 1/5 混合于 300ml 三角燒瓶中于雙層搖瓶機在 240r/min 的轉速下?lián)u轉 2030min,轉入 500ml 分液漏斗中靜置 2 小時，去掉下層沉淀和有機液，保留上層澄清液。 上層澄清液 依次用 乙醚、丙酮依次洗滌 并 5060℃ 真空干燥器干燥、即得麥冬多糖。使用時用蒸餾水配制成所需濃度。 實驗方法 標記 將購自四川大學 醫(yī)學院 NIH小鼠，進行如下方式標記： 依次為 左耳（為 1 號）、左前肢（為 2 號）、左后肢（為 3 號）、右耳（為 4 號）、右前肢（為 5 號）、右后肢（為 6 號） 、背部（為 7 號）、腹部（為 8 號）做標記，然后用電子天平稱量每只小鼠體重 ,多次稱量求平均值；再將稱量好的小白鼠放于飼養(yǎng)箱中喂養(yǎng)，最后為每組飼養(yǎng)箱做標記。 西南科技大學本科生畢業(yè)論文 7 糖尿病小鼠模型的建立 ： 取用小鼠 80 只 , 雌雄各 40 只，總共為 10 組，每組 8 只， 1～ 5 組為雄鼠， 6～10 組為雌鼠。通過 四氧嘧啶 處理 建立糖尿病小鼠模型。 將小白鼠禁食 12 小時，然后用手術剪剪去小鼠尾部尾端采血，使用血糖 試紙 及測試儀測定小鼠基礎血糖值。造模分一次腹腔注射和兩次腹腔注射，即隨機在雄鼠和雌鼠中取一半的小鼠，一次注射在禁食 12 小時后按 220mg/kg 體重一次性注射四氧嘧啶水溶液；兩次腹腔注射，在禁食 12 小時后按 220mg/kg 體重四氧嘧啶總量的 70％第一次注射， 12 小時后再在禁食 12 小時后第二次注射余下的 30%。 3 天后，將小白鼠禁食 12 小時后尾部尾端采血，使用血糖 試紙 及 測試儀測定小鼠血糖，并測定體重。選取建模成功的小白鼠，即小鼠血糖值為正?？崭怪档?2～ 3 倍時，表明建模成功。結果統(tǒng)計，建模成功的小鼠總共 63 只，實驗中途死亡的小鼠共 12 只，建模失敗的小鼠共 5 只。 試驗小鼠的分組及處理 將成功建立糖尿病模型的小鼠 63只隨機分為 4組，每組 15只，分別為① 模型組（陽性對照組） , 試驗期灌胃蒸餾水 ～ ； ②優(yōu)降糖組，試驗期灌胃優(yōu)降糖（ 10mg/Kg）③麥冬 200組，試驗期灌胃麥冬多糖 200mg/Kg；④麥冬 400組，試驗期灌胃麥冬多糖 400mg/Kg ；⑤陰性對照組，正常小鼠在試驗期灌胃蒸餾水 ～ ，各組 雌雄各半， 正常喂食。試驗期 14天，試驗結束時各組空腹 12 h, 然后小 鼠取血，使用血糖 試紙 及 測試儀測定小鼠血糖。 在試驗期間，分別在造模后 7d、 11d、 17d，測定體重。然后求整個實驗過程中增量，即增量（ %） =（小鼠此次體重 小鼠前次體重） /小鼠前次體重。 統(tǒng)計學處理 用 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析 ,組間顯著性檢驗采用獨立樣本 t 檢驗。 x ? s。 西南科技大學本科生畢業(yè)論文 8 第 3 章 結果與討論 結果 四氧嘧啶制備小鼠糖尿病不同給藥方式比較 腹腔注射 220mg/kg濃度的四氧嘧啶溶液后 ,大部分 小鼠在 24～ 48h后出現(xiàn)多飲、多食、多尿、呆滯 、 皮毛松散 、 體重下降 等癥狀，小 部分死亡 。采用一次注射 四氧嘧啶的小 鼠造模成功 26只，成功率 %，死亡 10只 ，死亡率 %； 采用二次注射 四氧嘧啶的小 鼠 造模成功 37只，成功率 %，死亡 2只，死亡率 %。 結果見表 31。 表 31四氧嘧啶制備小鼠糖尿病不同給藥方式比較 造模前 造模后（ 3天后） 注射次數(shù) 一次 二次 鼠數(shù) 40 40 平均血糖值 （ x ? s） ? ? 鼠數(shù) 26 37 平均血糖值 （ x ? s） ? ? 從表中可以分析出，一次注射與分二次劑量注射在小鼠 造模成功數(shù)量上比較 差異有顯著性，說明分二次劑量注射 四氧嘧啶比一次注射造模成功率更高，而 一次注射與分二次劑量注射在致小鼠死亡 數(shù)量上比較 差異不顯著，說明分二次劑量注射在在降低小鼠死亡率上僅有這個趨勢。從血糖值上對比， 一次注射與分二次劑量注射差異性不顯著。 在四氧嘧啶制備小鼠糖尿病中，其中造模成功的雄鼠 32只，成功率 %，死亡 5只，死亡率 %；雌鼠造模成功的有 32只，成功率 %，死亡 7只， 死亡率 %。結果見 表 32。 表 32四氧嘧啶對糖尿病小鼠性別的影響 造模前 造模后（ 3天后） 性別 雄鼠 雌鼠 鼠數(shù) 40 40 平均血糖值 （ x ? s） ? ? 鼠數(shù) 32 32 平均血糖值 （ x ? s） ? ? 西南科技大學本科生畢業(yè)論文 9 在造模成功數(shù)量上，雌雄鼠數(shù)目相等；從成功率上分析，雌鼠的成功率高于雄鼠；但在死亡率上雌鼠的死亡率高于雄鼠。從血糖值上對比，四氧嘧啶對雌雄鼠的血糖值影響不是很大。 川麥冬多糖對糖尿病小鼠血 糖的影響比較 將分組的小鼠按試驗設計進行處理， 17 天后測的小鼠血糖值如下：如下表 33 表 （ x ? s） 組別 劑量 N 血糖值（ mmol/l) 基礎血糖 造模后 3d血糖 試驗 17d 血糖 正常對照組 ～ 10 177。 — 177。 模型組 ～ 8 177。 177。 177。 優(yōu)降糖組 10mg/kg 8 177。 177。 177。﹡﹡ 麥冬 200 200mg/kg 7 177。 177。 177。﹡ 麥冬 400 400mg/kg 8 177。 177。 177。﹡﹡ 注：與模型組比較， * P