【正文】 ................................................. 5 動(dòng)物組織病理切片的制作 .......................................................................................... 6 取材與修塊 ............................................................................................................... 6 固定 ........................................................................................................................... 6 沖洗 ........................................................................................................................... 6 脫水 ........................................................................................................................... 6 透明 ........................................................................................................................... 6 浸蠟 ........................................................................................................................... 6 包埋 ........................................................................................................................... 6 石蠟塊的整修 ........................................................................................................... 7 切片與展片 ............................................................................................................... 7 貼片及烤片 ............................................................................................................. 7 HE 染色 ........................................................................................................................ 7 酶聯(lián)免疫分析 .............................................................................................................. 7 小鼠免疫球蛋白 IgG 酶聯(lián)免疫分析 ...................................................................... 8 3 結(jié)果 ............................................................................................................................... 9 脾臟的形態(tài)學(xué)變化 ...................................................................................................... 9 小鼠的臨床表現(xiàn) ........................................................................................................ 10 鉬銅聯(lián)合對(duì)小鼠免疫學(xué)指標(biāo)的影響 .........................................................................11 IV 4 分析與討論 ............................................................................................................... 12 鉬銅聯(lián)合對(duì)小鼠脾臟的形態(tài)學(xué)影響 ........................................................................ 12 鉬銅對(duì)小鼠免疫學(xué)指標(biāo)的影響 ................................................................................ 13 鉬銅對(duì)小鼠血清中 IgG 含量的影響 .................................................................... 13 5 結(jié)論 ............................................................................................................................. 14 參考文獻(xiàn) ........................................................................................................................ 14 致 謝 ............................................................................................................................. 17 外文文獻(xiàn)翻譯 ............................................................................................................... 18 1 1 前言 鉬 鉬 (Molybdenum， Mo)相對(duì)原子質(zhì)量： ，原子序數(shù)為 42。鉬是黃嘌呤氧化酶、醛氧化酶和亞硫酸氧化酶的組成成分， 1953年，研究者才確定鉬為人體及動(dòng)植物必須的微量元素。鉬在機(jī)體內(nèi)的含量甚微，卻有著極其重要的作用。人體對(duì)鉬的需要量比較少，成人鉬的需要量為 25μ g/d，日常飲食中所含的鉬即可滿足需求。適量增加鉬的攝 人可以減少心血管疾病、食道癌及乳腺癌的發(fā)生，但攝食過量會(huì)引起動(dòng)物機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生銅缺乏，進(jìn)而導(dǎo)致鉬中毒 [1]。 自從 1938年英國的 Ferguson發(fā)現(xiàn)牧草中鉬含最過高可使牛發(fā)生以腹瀉和 被 毛褪色為特征的鉬中毒癥后，學(xué)者們對(duì)鉬的毒性及中毒機(jī)制進(jìn)行了大量的研究。銅是動(dòng)物體必需的微量元素之一，是動(dòng)物體內(nèi)許多酶（如酪氨酸酶、胺氧化酶、抗壞血酸氧化酶、亞鐵氧化酶、超氧化物歧化酶和細(xì)胞色素氧化酶）的組成成分，參與機(jī)體代謝。當(dāng)機(jī)體缺銅時(shí)，多種酶的活性降低。導(dǎo)致貧血、心臟肥大、骨變形、主動(dòng)脈瘤、肌肉間出血、毛發(fā)褪色、脊 髓的脫鞘髓。微量元素銅與動(dòng)物免疫功能之間有著密切的關(guān)系，自 1981年首例實(shí)驗(yàn)性缺銅改變免疫反應(yīng)的報(bào)道發(fā)表多發(fā)到現(xiàn)在，世界各地的學(xué)者廣泛開展有關(guān)方面的研究。 1981年，樊璞等首次報(bào)道了在江西省南部贛南大余縣的鎢鉬礦附近， 8個(gè)鄉(xiāng)萬余頭耕牛發(fā)生鉬中毒。隨后李三強(qiáng)等人報(bào)道陜西南洛河流域流行多年的頑固性腹瀉癥，河南省欒川縣發(fā)生的“黑水癥瀉”等均為高鉬飼料或飲水引起。近些年來，鉬制劑作為飼料添加劑被 廣泛應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)，由此所造成的奶牛鉬中毒事件屢有發(fā)生 。多年的調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)在河南、陜西、山西、甘肅、 江西等省鉬礦附近，均存 在不同程度的鉬污染 [ 2]。尤其是豫西地區(qū)的鉬儲(chǔ)量極大，居亞洲第一位，居世界第三位，礦區(qū)周圍環(huán)境中的鉬含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他地區(qū)，對(duì)周圍人畜健康已 構(gòu)成潛在威脅 。 在研究小鼠鉬中毒的毒性試驗(yàn)中 ， 劉鳳軍等用鉬酸銨對(duì)小鼠進(jìn)行中毒試驗(yàn)，結(jié)果表明鉬酸銨對(duì)小鼠屬于中等毒性，可造成貧血、組織臟器痛變及精子畸形等。吳茂江在研究鉬與人體健康中，結(jié)果表明鉬是一種生命必需的微量元素。它是人體內(nèi)多種酶的重要組成 ,具有抗癌、保護(hù)心血管、擔(dān)負(fù)細(xì)胞內(nèi)電子的傳遞、防止齲齒和腎結(jié)石等多種生理作用 [3]。人體內(nèi)鉬缺乏能引起食管癌、心血管病、腎結(jié)石等多 種病癥；人體內(nèi)鉬過量，也能損傷生殖細(xì)胞及性機(jī)能，影響人體的生長發(fā)育。 但是目前關(guān)于鉬的研究主要集中在禽類，劉明明 等 [4]研究表明：日糧鉬含量為1000及 1500 mg/kg時(shí)可抑制法氏囊生長發(fā)育，高鉬造成法氏囊絕對(duì)質(zhì)量和臟器指數(shù)顯著低于對(duì)照組，引起法氏囊淋巴細(xì)胞減少，網(wǎng)狀細(xì)胞增生，淋巴細(xì)胞線粒體腫脹、嵴斷裂，凋亡淋巴細(xì)胞增多。而對(duì)小鼠的研究，主要是心臟等方面， 20xx年，張才，朱重偉 ，等 [5]，發(fā)現(xiàn)鉬制劑不僅對(duì)接觸鉬制劑的小鼠本身有損害作用，還對(duì)小鼠的 2 后代產(chǎn)生損傷作用。而對(duì)小鼠的免疫系統(tǒng)的中毒后的表現(xiàn)這方面 報(bào)道較少。 銅 銅是機(jī)體必需微量元素，參與動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物和維生素等營養(yǎng)物質(zhì)的代謝，提高飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，也是體內(nèi)多種酶的組成成分，對(duì)維護(hù)動(dòng)物正常生理機(jī)能至關(guān)重要 [6]。近年來，銅作為畜禽飼料的添加劑，廣泛用于現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)。銅參與動(dòng)物的營養(yǎng)調(diào)節(jié)，還與動(dòng)物的免疫功能有著密切的關(guān)系。銅參與機(jī)體免疫功能調(diào)節(jié)，缺銅可引起免疫功能下降 [7]。鼠傷寒沙門氏菌的感染試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)銅缺乏大鼠比對(duì)照組死亡率高，存活時(shí)間短?？赡苁侨便~鼠的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)感染的反應(yīng)降低所致。比較兩種小鼠對(duì)急性和遲發(fā)性過敏應(yīng)答 的效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)缺銅不影響小鼠對(duì)急性過敏的應(yīng)答，卻能明顯延遲小鼠對(duì)臭氧的遲發(fā)接觸過敏的應(yīng)答。大鼠實(shí)驗(yàn)性缺銅時(shí)，白細(xì)胞總數(shù)下降，中性粒細(xì)胞數(shù)減少，白細(xì)胞吞噬能力尤其是吞噬之后的殺傷能力下降，血清中補(bǔ)體總濃度降低。銅缺乏也使 T細(xì)胞減少，淋巴細(xì)胞對(duì)抗原反應(yīng)的能力減退 [8]。銅缺乏小鼠白細(xì)胞介素的水平僅為正常鼠的 40％ 50％，并發(fā)現(xiàn)在患各種感染時(shí)，血清銅升高，刺激并增加肝臟合成和釋放銅藍(lán)蛋白，有利于抵抗微生物的侵襲。而血銅升高主要與中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞被激活時(shí)分泌的一種白細(xì)胞內(nèi)源性物質(zhì)有關(guān)，該物質(zhì)隨血液到達(dá)相關(guān)靶細(xì)胞 ，并發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)及殺菌功能。 微量元素銅對(duì)動(dòng)植物營養(yǎng)的必要性早在 1925 年就由 M C Hargue 報(bào)道，隨后由Hart 等 [9]揭示了銅對(duì)動(dòng)物具有防止貧血的功能。從此銅作為動(dòng)物體內(nèi)的必需微量元素慢慢被人們所接受，銅在動(dòng)物體內(nèi)的代謝過程也得到了深入廣泛的研究。 小鼠的免疫系統(tǒng) 細(xì)胞周期是近年來細(xì)胞、分子生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)研究的前沿課題和研究熱點(diǎn)，特別是淋巴細(xì)胞的周期及分布反映著細(xì)胞生長增殖的具體過程。它的變化較為客觀地顯示了機(jī)體免疫力的變化，老化的免疫細(xì)胞可以導(dǎo)致機(jī)體免疫功能下降，從而誘發(fā)一系 列的像傳染性、自身免疫系統(tǒng)紊亂和癌癥等疾病 [10]。 人體內(nèi)有一個(gè)免疫系統(tǒng)，它是人體抵御病原菌侵犯最重要的保衛(wèi)系統(tǒng)。這個(gè)系統(tǒng)由免疫器官（骨髓、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾、胸腺等）、免疫細(xì)胞（淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血小板，以及免疫分子 [11]。雄性小鼠的免疫系統(tǒng)主要有胸腺和脾臟。 脾臟 脾是體內(nèi)最大的淋巴器官，其結(jié)構(gòu)與淋巴結(jié)有許多相似之處，也由淋巴組織構(gòu)成。但脾的實(shí)質(zhì)無皮質(zhì)與髓質(zhì)之分，而分為白髓、邊緣區(qū)和紅髓；脾位于血液循環(huán)的通 路上，脾內(nèi)沒有淋巴竇，而有大量的血竇。 (1) 被膜與小梁 脾有較厚的被膜，表面覆有間皮，被膜結(jié)締組織伸入脾內(nèi)形成許 3 多分支的小梁，他們互相連接夠長脾的粗支架。小梁之間充有網(wǎng)狀組織，夠長脾的海綿狀多孔隙的細(xì)的細(xì)微支架。脾的被膜和小梁內(nèi)含有數(shù)量不等的平滑肌纖維，小梁內(nèi)有發(fā)達(dá)的小梁動(dòng)脈與靜脈。平滑肌的收縮可調(diào)節(jié)脾內(nèi)的血量。 (2) 白髓 由密集的淋巴組織環(huán)繞動(dòng)脈而成，包括脾小結(jié)和動(dòng)脈周圍淋巴鞘。在新鮮脾的切面上，呈灰白小點(diǎn)狀，因而得名。 (3) 動(dòng)脈周圍淋巴鞘 是圍繞中央動(dòng)脈周圍的厚層彌散淋巴組織，由 大量的 T 細(xì)胞、少量的巨噬細(xì)胞和交錯(cuò)突細(xì)胞等構(gòu)成，屬胸腺依賴區(qū)，相當(dāng)于淋巴結(jié)的深層皮質(zhì)，但無高內(nèi)皮的毛細(xì)血管后微靜脈。中央動(dòng)脈旁有一條伴行的小淋巴管，沿動(dòng)脈進(jìn)入小梁，繼而在門部匯集成較大的淋巴管出脾，它是鞘內(nèi) T 細(xì)胞遷