【正文】 ） 和銅（以 CuSO4 組織病理形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示，組 I 小鼠 脾臟 的組結(jié)構(gòu)清晰、細(xì)胞排列整齊 ， 而另外組 III、 組 IV、組 V 的 胞核固縮或分解 ， 結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，出現(xiàn)大量空泡 ，脾臟淋巴細(xì)胞減少。 鉬銅聯(lián)合超過(guò)（ 200mg/ml） 會(huì)降低小鼠的免疫力，但補(bǔ)銅在一定程度上可以延緩小鼠免疫功能的下降。 5H2O): Group I (Mo 0mg / L, copper 0mg / L)。 group V (molybdenum 800mg /, copper 50mg / L) group。人體對(duì)鉬的需要量比較少，成人鉬的需要量為 25μ g/d，日常飲食中所含的鉬即可滿足需求。當(dāng)機(jī)體缺銅時(shí)，多種酶的活性降低。隨后李三強(qiáng)等人報(bào)道陜西南洛河流域流行多年的頑固性腹瀉癥，河南省欒川縣發(fā)生的“黑水癥瀉”等均為高鉬飼料或飲水引起。 在研究小鼠鉬中毒的毒性試驗(yàn)中 ， 劉鳳軍等用鉬酸銨對(duì)小鼠進(jìn)行中毒試驗(yàn)，結(jié)果表明鉬酸銨對(duì)小鼠屬于中等毒性，可造成貧血、組織臟器痛變及精子畸形等。 但是目前關(guān)于鉬的研究主要集中在禽類，劉明明 等 [4]研究表明：日糧鉬含量為1000及 1500 mg/kg時(shí)可抑制法氏囊生長(zhǎng)發(fā)育，高鉬造成法氏囊絕對(duì)質(zhì)量和臟器指數(shù)顯著低于對(duì)照組，引起法氏囊淋巴細(xì)胞減少，網(wǎng)狀細(xì)胞增生，淋巴細(xì)胞線粒體腫脹、嵴斷裂，凋亡淋巴細(xì)胞增多。近年來(lái)，銅作為畜禽飼料的添加劑，廣泛用于現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)。可能是缺銅鼠的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)感染的反應(yīng)降低所致。銅缺乏小鼠白細(xì)胞介素的水平僅為正常鼠的 40％ 50％，并發(fā)現(xiàn)在患各種感染時(shí)，血清銅升高，刺激并增加肝臟合成和釋放銅藍(lán)蛋白，有利于抵抗微生物的侵襲。 小鼠的免疫系統(tǒng) 細(xì)胞周期是近年來(lái)細(xì)胞、分子生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)研究的前沿課題和研究熱點(diǎn)，特別是淋巴細(xì)胞的周期及分布反映著細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的具體過(guò)程。雄性小鼠的免疫系統(tǒng)主要有胸腺和脾臟。小梁之間充有網(wǎng)狀組織，夠長(zhǎng)脾的海綿狀多孔隙的細(xì)的細(xì)微支架。在新鮮脾的切面上，呈灰白小點(diǎn)狀，因而得名。與淋巴結(jié)的淋巴小結(jié)不同的是，脾小結(jié)內(nèi)有中央動(dòng)脈的分支穿過(guò)，當(dāng)受到抗原刺激引起免疫應(yīng)答時(shí)，脾小結(jié)增多、增大。邊緣區(qū)是脾內(nèi)免疫細(xì)胞捕獲、識(shí)別、處理抗原和誘發(fā)免疫應(yīng)答的重要部位。 (7) 脾索 為富含血細(xì)胞的淋巴索，相互連接成網(wǎng) ，內(nèi)含 T 細(xì)胞、 B 細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和其他血細(xì)胞。鞘毛細(xì)血管可間歇性地收縮或擴(kuò)張，有調(diào)節(jié)血流的作用。此外，還有濾血、儲(chǔ)血、和造血的作用。脾內(nèi)濾血的 主要部位是脾索和邊緣區(qū)。 (4) 造血 胚胎早期的脾具有造血功能，但骨髓開(kāi)始造血后，脾逐漸變?yōu)橐环N淋巴器官，僅能產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞。2H 2O），天津市化學(xué)試劑四廠，含鉬量為 %； 銅用硫酸銅（ CUSO4178。 （ 2）伊紅染液 伊紅 g； 85 %酒精 100 mL 將伊紅加入酒精內(nèi)攪拌，待其全部溶解后即可使用。在 5 周、 7 周、 9 周時(shí)用摘眼球取血法剖殺小鼠，取出脾臟，固定包埋處理后，制得切片，經(jīng) HE 染色，用顯微鏡觀察小 鼠脾臟組織病理形態(tài)學(xué)變化；將血液靜置 30 分鐘，高速離心取上清液進(jìn)行小鼠免疫球蛋白酶聯(lián)免疫分析并用酶聯(lián)免疫分析小鼠血清中 IgG 含量。并做好標(biāo)記，以便于識(shí)別。 沖洗 固定后的組織用 70 %酒精稍加清洗后進(jìn)行修切， 去掉不需要部分，選擇好包埋部分。過(guò)程： 100 %酒精：二甲苯（ 1:1） 20 min、二甲苯（Ⅰ） 15 min、二甲苯（Ⅱ） 15 min。 切片與展片 將切片刀安裝妥當(dāng)，與組織塊成 5176。 貼片及烤片 待石蠟切片自然伸展平，且切片邊沿的蠟開(kāi)始融化時(shí)，從水中撈取切片，撥正位置，控干水分，然后放入溫箱內(nèi)烘干（ 65~68 ℃， 1 h）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μ l,然后再加待測(cè)樣品 10μ l（樣品最終稀釋度為 5倍）。 5洗滌 ：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。 10 終止：每孔加入終止液 50μ l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 3 結(jié)果 脾臟的形態(tài)學(xué)變化 如圖 2~6所示，與 I組相比 脾臟低倍鏡下體積增大、腫脹、顏色暗紅，呈現(xiàn)急性充血、出血，后期逐漸萎縮，脾內(nèi)淋巴細(xì)胞少，實(shí)質(zhì)細(xì)胞萎縮。 與淋巴結(jié)的淋巴小結(jié)不同的是，脾小結(jié)內(nèi)有中央動(dòng)脈的分支穿過(guò)，當(dāng)受到抗原刺激引起免疫應(yīng)答時(shí)，脾小結(jié)增多、增大。 177。 177。 IV 177。 177。 7 周與 5周和 9 周相比差異極顯著 (P＜ )。這說(shuō)明不同劑量的鉬銅聯(lián)合對(duì)小鼠的脾臟重量影響較大。 177。 177。 IV 177。 177。 7 周與 9 周相比差異極顯著 (P＜ )。 IV 與其它各組相比差異極顯著 (P＜ )。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（ OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠 免疫球蛋白 G(IgG）濃度如表 4。 II 177。 177。 177。 注 : 同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同大寫字母表示 (P＜ )差異極顯著，肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著 (P＜ )差異顯著，肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著 (P＞ )。 III 組與 V 組相比差異差異顯著 (P＜ )。 4 分析與討論 鉬銅聯(lián)合對(duì)小鼠脾臟的形態(tài)學(xué)影響 鉬 (Mo)是動(dòng)物、植物、微生物及人類必需的微量元素，是黃嘌呤氧化酶，醛氧化 13 酶，亞硫酸氧化酶的組成成分，參與電子傳遞及鐵的釋放與運(yùn)輸，影響多種物質(zhì)的代謝，具有重要的生理學(xué)功能 [13]。 脾有較厚的被膜，表面覆有間皮，被膜結(jié)締組織伸入脾內(nèi)形成許多分支的小梁，他們互相連接夠長(zhǎng)脾的粗支架。 邊緣區(qū)是脾內(nèi)免疫細(xì)胞捕獲、識(shí)別、處理抗原和誘發(fā)免疫應(yīng)答的重要部位。 銅參與機(jī)體免疫功能調(diào)節(jié)，缺銅可引起免疫功能下降 [17]。 小鼠的 IgG有四個(gè)亞類，為 IgG1， IgG2a，IgG2b， IgG3[19]。它在抗體介導(dǎo)的防衛(wèi)機(jī)理中占主要的地位， 個(gè)別中的哺乳動(dòng)物哺乳 14 后代不能在胎兒期獲得被動(dòng)免疫力，而是在出生后從初乳中獲得被動(dòng)免疫力 [21]。 其中 IgG雖然隨年齡的增。 試驗(yàn)表明：與 5周的相比較可以發(fā)現(xiàn)， 7周、 9周中的小鼠血清 IgG 的濃度均有降低，這說(shuō)明一定劑量的鉬銅聯(lián)合對(duì)小鼠 免疫系統(tǒng)影響較大，它們會(huì)使小鼠血清中的IgG 逐漸降低。鉬銅聯(lián)合可以使血清中的免疫球蛋白含量降低，隨著鉬含量的逐漸增加，血清中的免疫球蛋白含量下降明顯，但一定量的銅對(duì)在一定程度上可以延緩小鼠免疫功能的下降。導(dǎo)師 不僅在學(xué)術(shù)上嚴(yán)格要求我 ，在為 人處事上對(duì)我也是言傳身教， 這 對(duì)我以后的研究生生涯有莫大的幫助。在此，我要衷心感謝河南科技大學(xué) 及動(dòng) 物 科 技學(xué) 院 所有關(guān)心、愛(ài)護(hù)、幫助我的 領(lǐng)導(dǎo)和老師們 ，四年 來(lái)對(duì)我的培養(yǎng)和指導(dǎo)。在這里，我們公布對(duì)海星暴露于海洋環(huán)境的長(zhǎng)時(shí)間污染的免疫細(xì)胞反應(yīng)的調(diào)查結(jié)果。由蛋白質(zhì)組圖譜的比較分析，我們發(fā)現(xiàn)， 31 蛋白不同點(diǎn)在于他們的相對(duì)豐度，表示基因表達(dá)對(duì)于所述金屬混合物危險(xiǎn)回應(yīng)。雖然國(guó)家和地方政府致力于控制和減少環(huán)境的惡化，然而專家強(qiáng)調(diào)使用集成方法可以提供更顯著的和現(xiàn)實(shí)的無(wú)污染的棲息地。少數(shù)金屬（鎘，鉛，鋅，銅）被發(fā)現(xiàn)從底部到峽灣的口沿梯度分布，由于冶煉廠廢棄的污染物排出的原因，更多積累超過(guò) 80年（吉蘭等， 20xx）。 Pinsino 等人， 20xx。施羅德等， 20xx。Pinsino 等， 20xx）。他們 中 的 這些，是吞噬細(xì)胞的主要成分，約占 95％的總?cè)丝冢?Pinsino 等， 20xx）。具體來(lái)說(shuō)，我們?cè)u(píng)估了該HSC70 應(yīng)激蛋白在海星的體腔細(xì)胞表達(dá)從各采樣點(diǎn)，并 用計(jì)算機(jī)來(lái)標(biāo)記 蛋白質(zhì)組映射的區(qū)別來(lái)自低和高金屬影響的。 根據(jù) 所選位點(diǎn)的地理位置和特點(diǎn)，以及沉積物的特性， 它們 已被先前描述（ Coteur 等， 20xx年 a。 （ Coteur 的濃度等人， 20xx年 a）。 體腔細(xì)胞處理和免疫印跡產(chǎn)品分析 20 取出 約 （ CF）， 其中 含有游離循環(huán)體腔細(xì)胞，從每一個(gè)海 星 的手臂倒 刺加入 等體積的抗凝血緩沖， 80％由 CMASW（鈣 /鎂免費(fèi)人工海水，滲透壓200毫滲量： 37克 / L 的 / L 的 / L 硫酸鈉 / L 的NaHCO 3）和 20％的 EDTA 溶液（ / L）。器官礦化 是 由如先前所描述的高壓 微波方法（ Coteur 等人， 20xx年 a）。在 S1高度污染的采樣點(diǎn)是位于 峽灣（ 60*790N， 06*），而在S4相對(duì)未受污染的部位是在它的嘴 和底部 ， 面 向公海 （ 60*， 06*）。 通過(guò) 分析海星的 2DE 蛋白質(zhì)模式的體腔細(xì)胞從 highand 低金屬影響 來(lái) 凸顯 出 蛋白質(zhì) 表達(dá)的差異。rfjord聚集在南挪威西海岸金屬積聚成幾個(gè)組織（體壁和幽門 coeca）中以濃度依賴性的方式，相對(duì)于存在于沉積物中重金屬含量 （ Coteur 等人， 20xx 年 a）。Oweson 等， 20xx）。 Sugni等人， 20xx 年， Falugi 等， 20xx）。近年來(lái)，我們建立使用感持久的海洋環(huán)境 壓力 的 棘皮動(dòng)物作為定點(diǎn)生物能 ，并 建立用 19 于實(shí)驗(yàn) 試驗(yàn)的長(zhǎng)期生物效應(yīng)的生物標(biāo)志物。rfjord 仍然是污染最嚴(yán) 重的區(qū)域在歐洲。rfjord 在挪威被認(rèn)定為嚴(yán)重的沿海重金屬沉積物污染區(qū)域。 關(guān)鍵詞 ： 棘皮動(dòng)物 ，海洋污染 ，金屬堆積 ，熱休克蛋白 1 前言 海洋生物受到越來(lái)越多的環(huán)境污染所造成的壓力，例如過(guò)度捕撈和海岸線的退化。相反地，鉛和鋅的積累在皮層并沒(méi)有涉及到HSC70 水平，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)金屬在幽門 coeca 積累。 最后， 由衷的感謝我的父母 和同學(xué) ，他們的 關(guān)心、 理解和 不懈 支持永遠(yuǎn)是我繼續(xù)前進(jìn)的精神動(dòng)力！ 再次 感謝動(dòng)醫(yī) 10 級(jí)的全體兄弟姐妹們，以及所有關(guān)心、幫助和支持我的朋友們！ 弓超 20xx 年 6 月 7 日 18 外文文獻(xiàn)翻譯 長(zhǎng)期暴露于金屬（銅，鎘，鉛，鋅）環(huán)境中歐洲共同海星免 疫細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)（海星魯本斯） 摘要 常見(jiàn)的海星（海星魯本斯）是東北部大西洋底棲息生物群落的一個(gè)關(guān)鍵物種。 感謝本室實(shí)驗(yàn)員林霖 老師 ，研究生 趙紅先、杜博強(qiáng) 以及同在本 實(shí)驗(yàn) 室 做 畢業(yè) 論文的張義博、呂先召、李凱江、陶玉、劉永濤 等 同學(xué)， 特別要謝謝 趙紅先學(xué)姐 ，在我論文寫作的過(guò)程中給了很大的幫助 ，以 及其 他 工作人員在實(shí)驗(yàn)中的幫助與協(xié)作。 20xx. 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