全面組織培養(yǎng)實驗室及操作技術-文庫吧
2025-04-20 00:26 本頁面
【正文】 干熱消毒滅菌 飽和蒸汽壓力與其對應的溫度 飽和蒸汽壓力 溫度（ ℃ ） 飽和蒸汽壓力 溫度（ ℃ ） kg/cm2 1b/m2 kg/cm2 1b/m2 0 2 4 6 8 10 12 14 100 15 16 18 20 22 24 30 50 （ 3） 塑料器皿滅菌： 多采用 高壓蒸汽消毒滅菌 （ 4）金屬用具滅菌： 灼燒滅菌 浸入 95%酒精，后置于酒精火焰上灼燒，冷卻后使用 （ 5）接種室滅菌 空氣消毒滅菌 接種室 超凈工作臺 紫外燈照射 70%— 75%的酒精擦洗 培養(yǎng)材料的接種 紫外燈照射 （ 6）外植體滅菌 流水沖洗 10— 20min或更長時間 70%— 75%酒精中浸泡30s %— %氯化汞液中浸泡 10min左右 蒸餾水沖洗4— 5次 在 10%的次氯酸鈉、飽和漂白粉浸泡30min左右 備用 常用消毒劑消毒滅菌比較表 消毒劑 使用濃度 （ %） 去除難易 消毒時間 （ min） 效果 次氯酸鈣 次氯酸鈉 漂白粉 溴水 過氧化氫 升汞 酒精 抗生素 硝酸銀 9~10 2 飽和溶液 1~2 10~12 ~1 70~75 4~5（ mg/L 1 易 易 易 易 最易 較難 易 中 較難 5~30 5~30 5~30 2~10 5~15 2~10 ~2 30~60 5~30 很好 很好 很好 很好 好 最好 好 較好 好 六、無菌操作 實驗員消毒 實驗室、無菌臺滅菌 實驗器材的滅菌 無菌接種 消 毒 實驗臺 衛(wèi)生 培養(yǎng)室培養(yǎng) 消毒，更換實驗服、帽子與鞋子，進入接種室。 打開超凈工作臺和無菌操作室的紫外燈，照射 40min左右，后關閉。 開啟過濾室風機，使無菌風吹拂工作臺面和四周的臺壁。 用 70%— 75%的酒精擦拭工作臺和雙手。 用沾有 70%— 75%酒精的紗布擦拭盛培養(yǎng)基的培養(yǎng)器皿，放進工作臺。 把解剖刀、剪刀、鑷子等器械浸泡在 95%的酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。 在酒精燈火焰附近切割備用的接種材料。 打開瓶口，用火焰燒瓶口，轉(zhuǎn)動瓶口使瓶口各部分都燒到。 取下接種器械，在火焰上消毒。 把培養(yǎng)材料放入培養(yǎng)瓶，蓋上瓶口。 1接種結(jié)束后，清理和關閉超凈工作臺。 注意：操作期間應經(jīng)常用 70%— 75%的酒精擦拭工作臺和雙手；接種器械應反復在 95%的酒精中浸泡和在火焰上消毒。 第二節(jié) 植物組織培養(yǎng)所需的環(huán)境 條件及營養(yǎng)成分 一 、所需環(huán)境條件 與自然條件一樣，組織培養(yǎng)中的材料的生長要受到溫度、光照、濕度等各種物理條件，不同氣體、培養(yǎng)基的組成、 pH值和滲透壓等各種化學條件，以及外植體部位、大小、細胞密度等各種生物條件等環(huán)境條件的影響。如何根據(jù)需要來控制培養(yǎng)條件是組織培養(yǎng)中的一個重要問題。 溫度 光照 濕度 氣體 培養(yǎng)基的滲透壓 pH值 植物材料一般最適溫度在 25177。 2℃ 之間 環(huán)境條件 最常用的光周期是光照 16h，黑暗 8h 一般情況下，培養(yǎng)器內(nèi)相對濕度應達 100%，培養(yǎng)室內(nèi)環(huán)境的相對濕度在 70%— 80% 氧氣是愈傷組織生長所必需的 調(diào)節(jié)滲透壓常常從糖入手 植物組織培養(yǎng)時培養(yǎng)基的 pH值大多在 — 二、營養(yǎng)成分 植物體內(nèi)至少含有幾十種化學元素，其中大部分元素在植物體內(nèi)起到一定的生理作用：
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