菊花嫩莖快繁技術的研究生物技術及應用(已改無錯字)
2023-05-05 23:51:25 本頁面
【正文】 握好時間，不宜過長以免糖分受熱分解，導致滅菌好的培養(yǎng)基發(fā)黃。滅菌前要檢查滅菌鍋是否缺水，滅菌時要正確操作，滅菌一定要徹底，中途期間不要打開滅菌鍋?！≡趯嶒灥那耙惶?將接種室用高錳酸鉀和甲醛熏蒸進行滅菌消毒。啟動超凈工作臺,操作之前用 70 %的酒精擦臺面。將操作用刀、 鑷子、 剪子等用具在酒精燈下用火灼燒到變紅,冷卻待用。 選取在脫毒實驗中成功移栽上盆而且長勢健壯的植株作為實驗材料,選取莖作為實驗材料[8]。 選取生長健壯的嫩莖洗去表面泥土 ,在超凈工作臺 ,用 75 %酒精處理 20～30 秒 ,再用無菌水沖洗 3～5 次 ,轉入 %升汞溶液浸泡 8～10 分鐘 ,再用無菌水沖洗 4～6 次 ,用濾紙吸干水分。在無菌條件下將其切成2厘米左右?guī)в幸秆康男《危描囎訆A取切好的外殖體材料,然后按極性方向直立迅速接種到錐形瓶的培養(yǎng)基中,深約 2～3 mm,注意培養(yǎng)瓶口始終在火焰下方,盡量使切口接觸培養(yǎng)基，每個錐形瓶可接種 3～4 塊外殖體。接種時錐形瓶應保持傾斜,接種后要迅速將瓶口在酒精燈上轉動灼燒一遍進行消毒,然后迅速蓋上專用透性膜封好。最后在瓶壁上貼上標簽,注明接種材料的名稱、 編號和接種日期。接種完成后即轉入培養(yǎng)室進行初代培養(yǎng) ,培養(yǎng)溫度22～28 ℃,光強1000～4000 Lx。接種于誘導培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。置于光照培養(yǎng)箱中,每天連續(xù)光照12～16h ,光照強度為2 000～3 000Lx ,培養(yǎng)溫度(25 177。1) ℃。經過10d 菊花莖尖顏色逐漸變綠,基部逐漸增大,莖尖也逐漸伸長,一般25d 后,長出叢生芽。 繼代培養(yǎng)將叢生芽切割下,分開接種于繼代培養(yǎng)基之上,一般15d 后可長出叢生芽,取叢生芽轉接于新的培養(yǎng)基繼代上,則可在更短的時間內(約10d) 長出叢生芽,繼代培養(yǎng)的次數越多,從接種到長出叢生芽所需的時間越短,但不短于7d ,若不及時轉接,芽苗會迅速長高?！≌T導生根待繼代獲得較多叢生芽后,將叢生芽切成單株,取長約2～3 cm的芽苗分開接種于生根培養(yǎng)基上,進行誘導生根培養(yǎng),10d 左右就可出現大量小根,最后有1～6 條根可長得較長,芽苗也迅速長高。待生根后,將生根試管苗開蓋練苗,移栽?！∫圃耘囵B(yǎng)待根長至1～2cm時開瓶進行練苗,先將瓶塞打開,讓其由無菌環(huán)境轉至有菌且濕度較低的環(huán)境之中約3d ,將苗取出,小心用流水洗去根表面的培養(yǎng)基殘留物,移栽到素沙中,適當遮蔭,一星期后即可成活,成活率達95 %以上,一個月后即可上盆。2結果與分析2．1初代培養(yǎng)不同外植體對芽誘導的影響[9]，外植體誘導成芽時間有差異[4]。在拿菊花莖尖和菊花葉片接種到初代培養(yǎng)基上在相同的條件下培養(yǎng)時，發(fā)現莖尖及莖段最為合適,其他外殖體在此培養(yǎng)基效果不明顯。在培養(yǎng)過程中我們發(fā)現有很多都褐變死亡。為了防止褐變我們加入了VC溶液。為了證明VC能抑制褐變我們做了組對比實驗，在1，2組中我們沒加入VC，在3，4組中我們加入了VC，其他條件不變（如表2）。表2 初代培養(yǎng)記錄表：次數接種量真菌污染細菌污染褐變玻璃化正常成活率160107523660%260128823050%360910203965%460116313965%統(tǒng)計：240423118514460%從表2上我們看到第3，4組的褐變的數量比第1，2組的褐變數量少?？梢娫诮臃N前先用100 mg/ L Vc 浸泡外植體1 h ,在其以后的繼代過程中加入 200 mg/ L 聚乙烯吡咯吡烷酮（PVP） ,可有效地控制褐變現象[5]。當褐變現象不再發(fā)生時,要及時停止添加PVP ,以防長期使用 PVP 對外植體產生毒副作用。2．2繼代培養(yǎng)表3 繼代培養(yǎng)記錄表：次數接種量真菌污染細菌污染褐變玻璃化正常成活率1992130304545%2841527004250%31171833036354%41082433304844%統(tǒng)計：408781236319849%2．3生根誘導及移栽對大多數菊花而言加入適量的生長素效果會更好, 從生根的天數和生根的質量看IBA 較NAA 好[ 6]。表4 菊花組培中生長素的濃度范圍(單位:mg/L )生長素NAAIBAIAA愈傷誘導和分
化學相關推薦
鄂ICP備17016276號-1