【正文】 境中的氧氣，同時 在培養(yǎng)基中添加還原劑，降低 培養(yǎng)基中的氧化還原電位勢。 培養(yǎng)兼性厭氧或耐氧微生物：可深層靜止培養(yǎng) 。 第五節(jié) 滅菌和消毒 滅菌：采用強烈的理化因素，是任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠喪失其生長繁殖能力的措施，稱為滅菌。 消毒： 采 用較溫和的理化因素，僅殺死物體表面或內(nèi)部的一部分對人體有害的病原菌，而對被處理物體基本無害的措施，稱為消毒。 防腐：利用理化因素完全抑制霉腐微生物的生長繁殖，從而達到防止物品發(fā)生霉腐的措施，稱為防腐。 化療：即化學治療。利用具有高度選擇毒力的化學物質(zhì)抑制宿主體內(nèi)病院微生物的生長繁殖，以達到治療該傳染病的一種措施。 一、常用的滅菌、消毒、抑菌及除菌的物理方法 火焰灼燒法烘箱熱空氣滅菌法干熱滅菌法巴氏消毒法煮沸消毒法間歇滅菌法高壓蒸汽滅菌法濕熱滅菌（消毒）法高溫滅菌（消毒）法 高溫滅菌（消毒）法 —— 是最常用的物理方法。高溫可引起蛋白質(zhì)、核酸等活性大分子氧化或變性失活而導致微生物死亡。 干熱滅菌法 焚燒法：是將被滅菌物品在火焰中燃燒，使所有的生物質(zhì)碳化。簡單、徹底，但對被滅菌物品的破壞極大。適用于無經(jīng)濟價值的物品滅菌，及不怕燒的實驗器具，如接種環(huán)、鑷子、試管或三角瓶口的滅菌等。 干燥熱空氣滅菌法 將物品放入烘箱內(nèi)，然后升溫至150℃ — 170 ℃ ，維持 1— 2小時。適用于玻璃、陶瓷和金屬物品的滅菌，不適合液體樣品，及棉花、紙張、纖維和橡膠類物質(zhì)的滅菌。 特點：由于空氣傳熱穿透力差，菌體在脫水狀態(tài)下不易殺死，所以溫度高、時間長。 濕熱滅菌法： 特點：溫度低、時間短、滅菌效果高 原因： 1) 菌體內(nèi)含水量越高，則凝固溫度越低； 2) 蒸汽冷凝會放出潛熱； 3) 飽和水蒸汽穿透力強； 4) 濕熱易破壞細胞內(nèi)蛋白質(zhì)大分子的穩(wěn)定 性，主要破壞氫鍵結構。 高壓蒸汽滅菌法 利用水的沸點隨水蒸氣壓力的增加而上升，以達到 100 ℃ 以上高溫滅菌的方法。 方法： 121℃ （ 1kg/cm2或 15磅 /英寸 2）維持 1520min。 112℃ （ ） 2030min。 115℃ （ ） 2030min。 應根據(jù)滅菌物品的性質(zhì)或成分選擇滅菌溫度 例如：生理鹽水、營養(yǎng)瓊脂等培養(yǎng)基用 121 ℃ 。 含葡萄糖、乳糖、氨基酸等培養(yǎng)基用 112 ℃ 。 適用：耐高溫物品，玻璃儀器、含水或不含水的物品。 注意事項： 排凈冷空氣； 滅菌終了，緩慢降壓； 滅菌結束，趁熱取出物品。 高 壓 蒸 汽 滅 菌 鍋 高溫對培養(yǎng)基的影響及其防止措施 高溫對培養(yǎng)基的不利影響： 會產(chǎn)生混濁或形成不溶性沉淀 營養(yǎng)成分被破壞（ PO43存在，葡萄糖生成酮糖，菌不利用）； 色澤加深（褐變?nèi)绠a(chǎn)生氨基糖等）； 改變培養(yǎng)基的 pH值（通常下降 ） ； 形成有害物質(zhì)，抑制微生物生長； 消除有害影響的措施 采用特殊的加熱滅菌法 過濾除菌法 加入螯合劑 煮沸消毒法 將水加熱至 100℃ ，煮沸 15min— 30min，可殺死所有營養(yǎng)細胞和部分芽孢，達到消毒物的目的。 巴斯德消毒法： 用較低的溫度來殺死其中的病源微生物，這樣既保持食品的營養(yǎng)風味，又進行了消毒 該法一般是將待消毒的液體食品置于 62℃ 處理 30min，然后迅速冷卻。即可達到消毒目的。 低溫長時法： ℃30min 處理牛奶 高溫瞬時法： ℃15s 處理牛奶 超高溫巴斯德滅菌法：讓液體食品停留在 140℃左右 34s，急劇冷卻至 75℃ ，經(jīng)勻質(zhì)化后冷卻至 20℃ 。 間歇滅菌法： 將待滅菌物品在 80100℃ 蒸煮 1560min，冷卻后擱置室溫（ 2837℃ ）下過夜，并重復以上過程三遍以上。 其蒸煮過程可殺死微生物的營養(yǎng)體，但不能殺死芽胞，室溫過夜促使殘留的芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，再經(jīng)蒸煮過程可殺死新的營養(yǎng)體；循環(huán)三次以上可保證徹底滅菌的目的。 適用于不耐高溫的物品滅菌，如不適于高壓滅菌的特殊培養(yǎng)基、藥品的滅菌。 缺點是麻煩、費時 。 低溫抑菌 低溫 低溫是通過降低酶反應速度使微生物生長受到抑制。 冷藏法： 5℃ ，微生物斜面菌種放置冷藏箱中可保存數(shù)周至數(shù)月而不衰竭死亡；食品保鮮 冷凍法：食品工業(yè)中采用 10℃ 左右的冷凍溫度較長時間地保藏食品；冷凍法也可用作菌種保藏，但所需溫度更低，如 80℃ 低溫冰箱、或 78℃ 干冰、或 80℃ 液氮中冷凍保存。 （二）過濾除菌法 采用濾孔比細菌還小的篩子或濾膜作成各種過濾器，當空氣或液體流經(jīng)篩子或濾膜時，微生物不能通過濾孔而被阻留在一側，從而達到滅菌的目的。但不能除去病毒。 實驗室中常用的濾器： 濾膜過濾器、蔡氏過濾器、玻璃過濾器、磁土過濾器等。 過濾介質(zhì)：醋酸纖維素膜、硝酸纖維素膜、聚丙烯膜； 以及石棉板、燒結陶瓷、燒結玻璃等。 濾器孔徑： 常用 μm 、 μm 。 應用：對于含酶、血清、維生素和氨基酸等熱敏物質(zhì)除菌。 （三）輻射 輻射：是能量通過空間傳遞的一種物理現(xiàn)象。 與微生物有關的輻射： 電磁輻射：可見光、紫外光， 電離輻射： χ 、 γ 、 β 射線 。 電磁輻射： 可見光： 波長在 400 800nm的電磁輻射為可見光。 大部分微生物不需要光，少數(shù)菌需要光作為能源。 一般來講，可見光對大多數(shù)化能微生物沒有影響，但是，太強或連續(xù)長時間照射也會導致微生物死亡（光氧化作用）。 紫外線（ＵＶ） 波長在 100 — 400nm的電磁輻射為紫外線。 紫外線殺菌或誘變原理： 紫外線 作用于 DNA ，使其產(chǎn)生胸腺嘧啶二聚體，引起 DNA結構變形，阻礙正常的堿基配對，從而造成 微生物 變異或死亡。 紫外線會使空氣中的分子氧變成臭氧，臭氧釋放的原子氧有殺菌作用。 其中波長在 260 — 280nm處的紫外線 殺菌力最強。主要因為核酸（ DNA、 RNA）的吸收峰為 260nm，蛋白質(zhì)的吸收峰為 280nm。 光復活現(xiàn)象 經(jīng)紫外線照射的微生物，在可見光下，光可以激活 DNA修復酶，該酶能修復 DNA上的損傷，使微生物的突變率或死亡率下降。 微生物對紫外線的抵抗力與以下因素有關： 照射時間：照射時間長，死亡率高。 照射強度：照射強度大，死亡率高。