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流式細(xì)胞儀的構(gòu)造、工作原理及數(shù)據(jù)分析(已改無錯字)

2022-12-26 22:30:51 本頁面
  

【正文】 細(xì)胞的干擾。 ? (2)側(cè)向角散射:側(cè)向角散射是指與激光束正交 90176。 方向的散射光信號,側(cè)向散射光對細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感,可提供有關(guān)細(xì)胞內(nèi)精細(xì)結(jié)構(gòu)和顆粒性質(zhì)的信息。 2.熒光信號 激光的作用原理 (1)熒光信號的線性測量與對數(shù)測量 ? 當(dāng)攜帶熒光素的細(xì)胞與激光正交時,受激發(fā)發(fā)出熒光,經(jīng)過濾光片分離不同波長的光信號分別到達(dá)不同的光電倍增管(PMT), PMT將光信號轉(zhuǎn)換成電信號。電信號輸入到放大器放大,放大器分兩類:線性放大和對數(shù)放大。 ? 細(xì)胞 DNA含量、 RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測量一般選用線性放大測量。 ? 在細(xì)胞膜表面抗原等的檢測時,細(xì)胞膜表面抗原的分布有時要相差幾十倍,甚至幾萬倍。如用線性放大器,將無法在一張圖上清晰地將細(xì)胞陽性群、陰性群同時顯示出來通常使用對數(shù)放大器,如果原來輸出是 1,當(dāng)輸入增大到原來的 10倍時,輸出為 2;當(dāng)輸入增大到原來的100倍時,輸出為 3等。 (2)熒光信號的面積和寬度 ? 所謂熒光信號的面積是采用對熒光光通量進(jìn)行積分測量,一般對 DNA含量測量時,均采用面積 (FL2- A)來計算。這是因為熒光脈沖的面積比熒光脈沖的高度更能準(zhǔn)確反映 DNA的含量。 ? 熒光信號的寬度 (如 FL2- W)常用來區(qū)分雙聯(lián)體細(xì)胞 (3)光譜重疊的校正 ? 使用熒光補(bǔ)償電路 ? 合理設(shè)置熒光信號的補(bǔ)償值。 ?(五 ) FCM測量數(shù)據(jù)的的 存儲、顯示和分析 流式細(xì)胞儀數(shù)據(jù)分析 ? 數(shù)據(jù)存儲 : LIST MODE ? 數(shù)據(jù)顯示 : 直方圖 ( Histogram ) 二維點圖 (Dot Plot) 等高線圖 (Contour Plot)
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