【正文】 色、抗酸染色、印度墨汁染色 ? 無(wú)菌采集技術(shù)：避免標(biāo)本污染及患者被感染 ? 病毒培養(yǎng)標(biāo)本：置 4 ℃ 保存 ? 分枝桿菌培養(yǎng)標(biāo)本： 2mL以上，置 4 ℃ 保存 ? 細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本置 35 ℃ 保存 ? 種類和環(huán)節(jié)多 （ 細(xì)菌鑒定 、 藥敏 、 培養(yǎng)基 、 生化管 、 儀器 、 稀釋液 ） ? 涉及知識(shí)面廣 ? 復(fù)雜性高 ? 需要強(qiáng)烈的責(zé)任感 四、微生物試驗(yàn)分析中質(zhì)量控制 常規(guī)試驗(yàn)的質(zhì)量控制 天天做（質(zhì)控菌株） ? 觸酶試驗(yàn)： 3％ H2O2每三天更換一次 ? 血漿凝固酶試驗(yàn)：人血漿或商品乳膠試劑 ? 氧化酶試驗(yàn)： 1％鹽酸四甲基對(duì)苯胺水溶液浸泡厚濾紙，室溫吹干壓成小紙片，置含干燥劑容器－ 20℃ 保存，或買商品制劑 ? β －內(nèi)酰胺酶：頭孢硝噻吩 (Nitrocefin)為底物，適于測(cè)試嗜血桿菌、淋球菌、卡他莫拉菌、腸球菌 ? 革蘭染色：革蘭陽(yáng)性菌染成紫色；革蘭陰性菌染成紅色；另涂片厚度、染色和脫色時(shí)間、染料沉渣等也影響染色質(zhì)量 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 ? 一般性狀：① 外觀： 透明、清亮、無(wú)混濁、無(wú)沉淀，顏色符合要求，表面濕潤(rùn)但無(wú)水汽、平整、光潔無(wú)凹坑和氣泡。 ② 厚度 ： 一般厚度在 3mm，但 MH平板厚度 ≥ 4mm。 ③ pH是細(xì)菌生長(zhǎng)的重要條件之一，合格培養(yǎng)基的 pH應(yīng)在規(guī)定值上下 。 購(gòu)買的培養(yǎng)基要有質(zhì)量保證如合格證明等文件；若無(wú)質(zhì)量保證需檢測(cè)相應(yīng)的性能。標(biāo)準(zhǔn)菌株分 2種：一種是已知的可在某種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)并產(chǎn)生典型生物學(xué)性狀的，對(duì)培養(yǎng)基中的某種物質(zhì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)的菌株；另一種是用已知的不能在某種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)或?qū)ε囵B(yǎng)基中的某種物質(zhì)產(chǎn)生陰性生化反應(yīng)的菌株。 試劑質(zhì)控 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室常用的試劑包括染色液 、 診斷血清以及各種生化反應(yīng)試劑等 。 常用生化試劑的質(zhì)控： 隨著細(xì)菌鑒定儀和快速微量生化鑒定板條的普及 ， 臨床微生物檢驗(yàn)常用的生化試劑種類日趨減少 ， 應(yīng)注意在用試劑在貯存時(shí)的避光 、 冷藏等要求 ， 保證試劑的穩(wěn)定性 。 診斷血清的質(zhì)控： 診斷血清是一種重要的細(xì)菌鑒定試劑 ， 應(yīng)從有資質(zhì)的生產(chǎn)單位購(gòu)買 。 試驗(yàn)中應(yīng)注意無(wú)菌操作 ，避免細(xì)菌污染 。 為保證血清凝集反應(yīng)結(jié)果準(zhǔn)確 ， 應(yīng)每 3個(gè)月對(duì)血清進(jìn)行一次質(zhì)控 。 紙片藥敏試驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控 ? 基礎(chǔ)質(zhì)控：連續(xù)做 30天，如失控超過(guò) 3次還需繼續(xù)，如失控低于 3次可改為每周 1次 ? 糾控：每周質(zhì)控中發(fā)生失控應(yīng)糾控，方法：連續(xù) 5天，每天 1次，每次重復(fù) 5個(gè)紙片，如找到明確失控原因，可立即改為每周 1次，否者繼續(xù) ? 4℃ 冰箱保存一周的用量 ? 藥物敏感試驗(yàn)是臨床微生物檢驗(yàn)的重要步驟之一，其結(jié)果正確與否涉及治療效果的好壞。以保障實(shí)驗(yàn)室各種設(shè)備、儀器的正常運(yùn)轉(zhuǎn)。 ? 對(duì)于有菌部位或易被正常菌群污染的標(biāo)本，培養(yǎng)出細(xì)菌后，要根據(jù)標(biāo)本的不同，排除正常菌群后，再挑選致病菌（請(qǐng)看下圖）。 1 革蘭染色：革蘭染色報(bào)告必須包括染色反應(yīng)或微生物種類和類別 ， 描述物種的形態(tài)或結(jié)構(gòu) 。 ：抗酸染色報(bào)告應(yīng)顯示找到或未找到或可疑抗酸桿菌三種結(jié)果 ， 報(bào)告中應(yīng)以加號(hào)體現(xiàn)標(biāo)本中抗酸桿菌的存在量 。 細(xì)菌鑒定 血清學(xué)試驗(yàn) 腸道致病菌生化特征符合的前提下必須有血清學(xué)的試驗(yàn)作最后確認(rèn)，基層細(xì)菌室應(yīng)具備 13項(xiàng)血清試劑。區(qū)別曲菌或毛霉菌 。 ， 如 ?D葡聚糖的檢測(cè) 。 C空氣孵育 ） 苛養(yǎng)菌 5％CO2孵育 判度結(jié)果和解釋結(jié)果 ESBL確認(rèn)試驗(yàn) ESBL的質(zhì)控頻率 ? 篩選試驗(yàn)和表型確證試驗(yàn)均可每日進(jìn)行或每周進(jìn)行，所選擇菌株為肺克 700603或大腸埃希菌 25922。 奇異變形桿菌 ESBL 監(jiān)測(cè)試驗(yàn) 不適用 不適用 Ceftriaxone 1 ?27 Cefotaxime NA NA Aztreonam 1 ?22 Ceftazidime 1* ?22* Cefpodoxime 稀釋法 (181。平板應(yīng)距離一個(gè)黑色不反光的背景數(shù)英寸，并用反射光照明。 ?如果被測(cè)菌是葡萄球菌或腸球菌，則應(yīng)孵育 24小時(shí)，再在透射光下分別觀察苯唑西林或萬(wàn)古霉素的透明抑菌圈內(nèi)有無(wú)耐甲氧西林或耐萬(wàn)古霉素菌落的微弱生長(zhǎng)，遇不敏感的結(jié)果需用稀釋法測(cè)定 MIC法確 ?變形桿菌 (遷移生長(zhǎng) )以及磺胺類藥物的紙片法藥敏忽略薄紗樣蔓延生長(zhǎng)，微弱生長(zhǎng)（ 20%或更少），克林霉素對(duì)葡萄球菌的抑菌圈內(nèi)如有薄霧狀菌苔應(yīng)報(bào)告細(xì)菌對(duì)克林霉素耐藥 ,不管其是否顯示 “ D” 抑菌圈 五、實(shí)驗(yàn)后質(zhì)量控制 藥敏結(jié)果結(jié)果的審核 ? S敏感（ Susceptible）：用常規(guī)用量治療有效，常規(guī)用藥時(shí)達(dá)到的平均血藥濃度超過(guò)細(xì)菌的 MIC 5倍以上。 ? I中介 (Intermediate)： MIC接近血、體液中藥物的濃度，治療反應(yīng)率低于敏感株，藥物生理濃集部位有效 (泌尿道 )，加大用藥劑量可能有效。 ? 應(yīng)分兩種報(bào)告形式： A. 危重感染報(bào)告 : B. 常規(guī)報(bào)告 : 報(bào)告的規(guī)范化 ① 革蘭染色：危重報(bào)告 30－ 60分鐘報(bào)告 。 有無(wú)細(xì)胞內(nèi)吞嗜現(xiàn)象 ， 有無(wú)菌絲 。 常規(guī)報(bào)告 24h,危重報(bào)告 1h－ 2ｈ 。 報(bào)告的規(guī)范化 ① 24小時(shí)可發(fā)出初始報(bào)告 。 ④ 錯(cuò)誤報(bào)告 : 未見(jiàn)到致病菌 ：可在 24小時(shí)報(bào)告初始結(jié)果，包括菌落計(jì)數(shù)和可能細(xì)菌種類，如氧化酶陰性的革蘭陰性桿菌；金黃色葡萄球菌等。 ： 24h初始報(bào)告 ， 有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)；革蘭陽(yáng)性或陰性細(xì)菌或特征明顯的細(xì)菌名稱；根據(jù)涂片結(jié)果推測(cè)致病菌 。 2．鑒定試劑質(zhì)量控制：購(gòu)入新的試劑；在更換批號(hào)；更換生產(chǎn)廠家；結(jié)果發(fā)生異常等情況時(shí)均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制。 4．分離培養(yǎng)基：如血瓊脂和巧克力，用肺炎鏈球菌、 B溶血和草綠色溶血的鏈球菌、流感嗜血桿菌、等苛養(yǎng)細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株或經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化試劑已證實(shí)結(jié)果正確的菌株進(jìn)行測(cè)試，判斷其分離能力。 6．冰箱溫度記錄：按每一冰箱存放的物品不同設(shè)置不同的質(zhì)控范圍，特別對(duì)低溫冰箱；每天記錄一次。 。 e. 本室所進(jìn)行的試驗(yàn)方法、量值可溯源，不準(zhǔn)確度限制在國(guó)內(nèi)有關(guān)部分標(biāo)準(zhǔn)。 g. 參加國(guó)際、國(guó)內(nèi)室間質(zhì)評(píng)，其總成績(jī) “ 優(yōu)秀 ” 應(yīng)為 90％， “ 良好 ” 小于 10％。 i. 檢查差錯(cuò)發(fā)生率應(yīng)