【正文】 取次數(shù)和水浴溫度，采用加標回收的方法，均在樣品中加入100ug/mL的TBHQ標準品2mL。 （3） 提取次數(shù) 分別選取提取次數(shù)為2和3，其他條件不變，測定其回收率。（5） 水浴時間 分別選取水浴時間為10s、20s、30s和40s，其他條件不變，測定其回收率。本實驗采用L9(3)進行正交優(yōu)化實驗[15]見下表：表23 L9(34)正交試驗因素水平編碼表水平試驗因素溶劑體積/mL A混合時間/min B提取次數(shù) C水浴溫度/℃ D12 1110024 228036 3360 實驗結(jié)果評定 精密度測定精密度：指在相同條件下N次重復(fù)測定結(jié)果彼此相符合的程度。本實驗直接采用標準樣品的精密度對其方法進行判定。分層后，將上清液用移液管轉(zhuǎn)移到60mL的瓷蒸發(fā)皿中，再用5mL的80%的乙醇溶液重復(fù)提取兩次，提取液一并倒入蒸發(fā)皿中，將蒸發(fā)皿放在60℃的水浴鍋上通風(fēng)揮發(fā)近干（切勿蒸干）。每個組每個濃度平行做七次，測定其濃度含量，計算其平均值、標準差和相對標準偏差。每個組每個濃度平行做七次，測定其濃度含量，計算其平均值、標準差和相對標準偏差。 回收率測定 本實驗采用加標回收的方法測定回收率[16] 采用國標方法測定回收率 用移液管分別取TBHQ標準儲備液100mg/mL、150 mg/mL、250 mg/mL各2mL于25mL的比色管中，并在比色管中加入2mL的樣品（即菜籽油）溶液，加入5mL的80%乙醇溶液（80%乙醇是將95%乙醇80mL和15mL蒸餾水混合配置而成）。分層后，將上層澄清提取液用吸管轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)皿中（切勿將油滴帶入）。提取液一并加入到蒸發(fā)皿中。在蒸發(fā)皿中加入二硫化碳，用小玻璃棒少量多次洗滌蒸發(fā)皿中殘留物，轉(zhuǎn)移到2mL容量瓶中，試液作為試樣測定液。 采用優(yōu)化處理方法測定回收率 用移液管分別吸取TBHQ標準儲備液100mg/mL、150 mg/mL、250 mg/mL各2mL于25mL的比色管中，并在比色管中加入2mL的樣品（即菜籽油）溶液，采用優(yōu)化后的條件，即加入6mL 80%的乙醇溶液，振搖2min，然后再用6mL的乙醇溶液提取一次，放入80℃的水浴鍋中水浴30s，其它條件與國標方法相同。將兩種方法測定的回收率進行比較對照。 表31 標準品濃度與峰面積表 濃度(ug/mL) 峰面積（UV*S） 69094 127370 193676 240462 319013圖31 TBHQ標準品標準曲線其標品的回歸方程為y=（ ）*X，R2=，表明該曲線的線性相關(guān)性較好，可以作為標準曲線。其濃度與峰面積見表32和色譜圖見圖32：表32 樣品（菜籽油）濃度與峰面積樣品標號出峰時間(min)濃度（ug/min）峰面積（UV*S）133872233960333821TBHQ Q 圖32 樣品（菜籽油）氣相色譜圖其一對其取平均值。 優(yōu)化實驗條件 提取溶劑的優(yōu)化 本實驗采用加標回收的方法，已知樣品中的TBHQ含量，在菜籽油添加標準品，并采用甲醇、乙醇和乙腈三種溶劑對植物油中的TBHQ進行提取，在2mL的菜籽油中添加2mL的濃度為100ug/mL的TBHQ標準品，并對其回收率進行計算，多次測定取平均值，比較其回收率的大小，其回收率較大的為最優(yōu)。 三種提取溶劑對樣品的回收率結(jié)果見表33：表33 不同溶劑對樣品處理的回收率表 溶劑編 號12345平均值 甲醇（%) 乙腈(%) 乙醇(%) 根據(jù)上表可知，乙醇對樣品的提取效果最好，考慮到甲醇和乙腈都是有毒的有機溶劑，不僅會對環(huán)境造成污染，而且對實驗人員的健康造成危害，而乙醇的毒性明顯要低于甲醇和乙腈。 提取條件優(yōu)化 單因素實驗（1） 溶劑提取體積 ，分別加入2mL、4mL、6mL、8mL的80%乙醇溶液，振搖1min，靜置片刻，放入90℃的水浴中加熱30s，促其分層。再重復(fù)分別用2mL、4mL、6mL、8mL的80%乙醇溶液提取，最后蒸發(fā)至近干，用二硫化碳定容，轉(zhuǎn)移到2mL的容量瓶中，用吸管吸取放入樣品中，進入氣相色譜儀中自動進樣測量。提取體積太大，導(dǎo)致溶劑占有的量太大，反而會減少物質(zhì)的提取，導(dǎo)致回收率下降。混合時間越長，導(dǎo)致后續(xù)操作分離不完全，使樣品中的待測物質(zhì)含量減少，故平均回收率會減小。提取次數(shù)太少，樣品中的待測物質(zhì)不能被溶劑提取出來，提取次數(shù)太多，增大了溶劑的量，反而會降低樣品中TBHQ的含量。水浴溫度太低，不能促進分層，提取不完全。（5） 水浴時間 選取溶劑體積為6mL，混合時間為1min，提取次數(shù)為2次，水浴溫度為80℃，水浴時間分別為10s、20s、30s、40s，每組平行做三次，其回收率見表38： 表38 水浴時間對樣品回收率的影響水浴時間/s編 號123平均回收率(%)10203040由上表38可知，水浴時間對回收率的影響不是很大。 正交實驗在單因素實驗的基礎(chǔ)上，對提取溶劑體積、混合時間、提取次數(shù)和水浴溫度進行正交實驗，吸取2mL的菜籽油，并加入100ug/mL的TBHQ標準品2mL，采用四因素三水平的正交優(yōu)化實驗對菜籽油中TBHQ的提取最佳工藝進行研究[20]，正交試驗及回收率見表39。實驗結(jié)果表明：菜籽油中溶劑提取抗氧化劑的最佳條件為溶劑提取溶劑為6mL，混合時間2min，提取次數(shù)為2次，水浴溫度為80℃時提取對測定結(jié)果最好。測得的結(jié)果見表310： 優(yōu)化處理方法精密度測定 取TBHQ標準品濃度分別為50ug/mL、100 ug/mL、200 ug/mL的溶液2mL，按照上述優(yōu)化的條件進行預(yù)處理，即提取溶劑為6mL、混合時間為2min，提取次數(shù)為2 次，水浴溫度為80℃，每個濃度平行做七次，測定其濃度含量，計算其標準差和相對標準偏差來判定試驗方法的有效程度。檢測性良好，可用此實驗方法進行檢定食用油中抗氧化劑。振搖1min，靜置片刻，放入90℃左右的水浴中加熱30s，待其分層。再用5mL的80%乙醇溶液重復(fù)提取兩次。將蒸發(fā)皿放入60℃的水浴上通風(fēng)揮發(fā)或自然揮發(fā)至近干（切勿蒸干）并同時做空白實驗。每個加標濃度做六次平行試驗，利用標準曲線查出樣品加標回收的濃度，取平均值并計算回收率。每個加標濃度也是平行做六次，計算回收率。 對其加標回收后，在相同加標濃度100ug/mL和250ug/mL的情況下，優(yōu)化后的方法回收率要高于國標方法，%%，回收效果較好。首先將TBHQ標準品稀釋成不同濃度的標準液，利用氣相色譜方法測定，建立標準曲線。并且對溶劑的總體積、樣品和溶劑的混勻時間、提取次數(shù)和水浴溫度進行正交試驗，得出在溶劑總體積為6mL、混勻時間為2min、提取兩次和水浴溫度在80℃的情況下，可以得到較準確的結(jié)果。在此基礎(chǔ)上，對樣品進行測定研究，對其進行精密度和回收率計算，%%，%%。參考文獻[1][M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2006,3:132[2]閻果蘭,[J].(3):20[3]胡慰望,[M].北京:科學(xué)出版社,2002,6:100108。在這里，我首先要感謝我的指導(dǎo)老師王中鳳教授，在百忙之中抽出時間幫我從課題的選題、資料的查閱、實驗的進行到最后論文的撰寫、審閱和最后細致修改，這其中的每一個環(huán)節(jié)王老師都是親力親為，讓我非常感激。導(dǎo)師不但知識淵博且學(xué)習(xí)態(tài)度嚴謹，這些都將為我以后學(xué)習(xí)、工作作出榜樣。 與此同時，也要非常感謝肥東質(zhì)監(jiān)局能給我一個很好的實驗平臺，感謝王莉主任和張曉玲老師和同我一起來肥東質(zhì)監(jiān)局實習(xí)的實驗伙伴們對我的實驗的幫助和建議，尤其是在實驗儀器操作部分，對我精心教導(dǎo)，讓我從生疏到熟練，每一步都很耐心的講解，直到學(xué)會為止。最后，衷心感謝在百忙之中抽出時間審閱本論文和答