【正文】 stress on SS content of broadleaf holly leaves由圖48可以看出，可溶性糖含量總的趨勢(shì)是隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，而呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。相比之下0 ℃處理在48 h時(shí)出現(xiàn)了峰值，%。48h時(shí)6 ℃、12 ℃、18 ℃處理下大葉冬青葉片的可溶性糖開始下降。12 ℃、18 ℃%、%，下降明顯。驟然降溫下大葉冬青葉片可溶性糖含量的變化見圖49所示。在降溫48 h時(shí)，三個(gè)處理都達(dá)到了峰值，分別較對(duì)照上升了140%、%、%。表明低溫脅迫適應(yīng)后，植物體內(nèi)仍存在某種機(jī)制，調(diào)節(jié)體內(nèi)糖含量的增加以增加其對(duì)低溫脅迫的適應(yīng)能力。SOD是主要的活性氧清除酶系，植物體在遭受到低溫脅迫時(shí)，積累的自由基就會(huì)引發(fā)膜脂的過氧化作用，SOD的主要功能是催化超氧化物陰離子自由基發(fā)生的歧化反應(yīng)，生成H2O2和O2(其中的H2O2再由POD、CAT酶清除)，從而有效的消除氧自由基對(duì)植物的傷害。緩慢降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化見圖410。表明經(jīng)過緩慢降溫，植株得到一定的低溫鍛煉，SOD活性對(duì)低溫有一定的適應(yīng)性，即具有一定的抗寒性。0℃、6℃處理下，SOD活性升高，表明SOD能有效地清除活性氧等各種自由基對(duì)植株的傷害，避免了活性氧等各種自由基的大量積累,此溫度下不會(huì)對(duì)大葉冬青造成傷害。即隨著低溫脅迫時(shí)間的延長(zhǎng),低溫造成的傷害最終打破了體內(nèi)的代謝平衡,酶活性不可逆轉(zhuǎn)的下降,清除自由基的能力下降,動(dòng)態(tài)平衡失調(diào),表現(xiàn)出傷害。圖11驟然降溫下大葉冬青葉片SOD活性的變化Fig411 Effect of slow cooling chill stress on SOD activity of broadleaf holly leaves由圖411，大葉冬青在驟然降溫下葉片內(nèi)SOD活性隨著時(shí)間變化的曲線，可以看出，3個(gè)低溫處理與對(duì)照相比，都出現(xiàn)了先升后降的“Z”形變化趨勢(shì)，這與緩慢降溫SOD活性的變化不同。說明大葉冬青在驟然降溫初期對(duì)低溫具有一定的防御反應(yīng)，來減緩傷害的速度與程度，是大葉冬青自身的一種調(diào)節(jié)對(duì)環(huán)境的一種適應(yīng)。 低溫脅迫對(duì)大葉冬青葉片POD活性的影響POD酶對(duì)植物的作用比較復(fù)雜，目前認(rèn)為它是具有雙重效應(yīng)的一種酶。另一種觀點(diǎn)認(rèn)為，POD參與葉綠素的降解、活性氧的產(chǎn)生(曾韶西等，1997)并引起膜脂過氧化，是植物衰老到一定階段的產(chǎn)物，為一種傷害反應(yīng)，可作為植物衰老的標(biāo)志。圖412 緩慢降溫下大葉冬青葉片POD活性的變化Fig412 Effect of rapid cooling chill stress on POD activity of broadleaf holly leaves由圖412可知，緩慢降溫下大葉冬青葉片POD活性都低于對(duì)照。在24h處理時(shí)4 個(gè)處理都下降明顯，%、%、%、%。12℃、18℃%、% 。 驟然降溫對(duì)大葉冬青葉片POD活性的影響驟然降溫下大葉冬青POD活性的變化見圖413所示。在低溫脅迫24h時(shí)，三者POD活性的變化較為緩慢，POD的活性分別是444 u?g1FW?min1 、458 u?g1FW?min557 u?g1FW?min1，%、%、%?？梢姵掷m(xù)低溫可引起植物體內(nèi)超氧自由基等活性氧的增加,降低其葉片中POD的活性。緩慢降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化如圖414所示。24h時(shí)CAT活性最高，分別較對(duì)照高出 %、 %、%、%。但在較低溫度的持續(xù)脅迫下，CAT活性都有不同程度下降，至72h時(shí)，0 ℃、6 ℃處理下CAT活性仍高于對(duì)照，保持了較高的CAT活性。驟然降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化如圖415所示。%、 %、%。大葉冬青葉片在低溫脅迫下各項(xiàng)生理指標(biāo)的相關(guān)性分析見表42所示。在低溫脅迫下，膜脂過氧化的加劇，致使植物滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)合成速度減小，滲透調(diào)節(jié)能力降低，葉綠素含量下降，致使植物生成機(jī)制遭到破壞。在脅迫第72h，MDA與電導(dǎo)、SOD正相關(guān)，與可溶性糖、POD、CAT負(fù)相關(guān)，說明可溶性糖、POD、CAT在這個(gè)過程中起著重要的作用。表明在整個(gè)低溫脅迫過程，這些物質(zhì)都不能有效清除MDA對(duì)細(xì)胞膜的傷害，不同物質(zhì)在不同階段對(duì)MDA直接清除作用是不同的。但由于植物的抗寒性是由多因素調(diào)控的，因此對(duì)抗寒性的評(píng)價(jià)也需要是多方面的，應(yīng)對(duì)植物材料同時(shí)采用多種方法相互加以印證，以期得到更加正確的結(jié)論。可直接反映植物對(duì)干旱脅迫的抵抗能力，通過測(cè)定葉綠素含量的變化可以確定大葉冬青抗旱性的強(qiáng)弱。圖51 干旱脅迫下大葉冬青葉片葉綠素總量的變化Fig 51The total content of chlorophyll on Broadleaf Holly leaf under drought stress表51不同干旱脅迫處理下大葉冬青葉片葉綠素含量隨時(shí)間的變化的方差分析（單位：mg注：表中不同字母表示差異顯著（p），下同. Note: Different letters indicate significance（p）,The same as below.由圖51可知，隨著PEG脅迫，與CK比較SS2處理水平下在第3天時(shí)葉綠素含量就有所上升，而S3處理下葉綠素含量有所降低，并且差異顯著?？傮w來說，在SS2處理下隨著干旱脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，葉綠素含量表現(xiàn)為先升后降，最后又緩慢回升的趨勢(shì)。隨著干旱脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，從第9天到第15天葉綠素含量與對(duì)照差異并不顯著（見表51），這是大葉冬青對(duì)干旱脅迫的一種適應(yīng)（黃顏梅等，1998；王金錫等，1995），在干旱脅迫下，葉綠素含量表現(xiàn)出了較強(qiáng)的穩(wěn)定性，這是耐旱植物的生理特點(diǎn)之一（李在軍等，2006）。 干旱脅迫對(duì)大葉冬青葉片MDA含量的影響 植物器官衰老或遭受逆境，常會(huì)發(fā)生膜脂過氧化作用，丙二醛(MDA)是膜脂過氧化的最終產(chǎn)物之一，其積累是活性氧毒害作用的表現(xiàn)，目前常用MDA的含量作為脂質(zhì)過氧化的主要指標(biāo)。 圖52 干旱脅迫下大葉冬青葉片MDA含量的變化Fig52 The contents variation of MDA on Broadleaf Holly leaf under drought stress表52 不同干旱脅迫處理下大葉冬青葉片MDA含量隨時(shí)間變化的方差分析（單位：μmol﹒g1FW）Table52 Different drought stress treatments Broadleaf Holly leaf MDA changes with time analysis of variance處理Treatment處理時(shí)間Treating Time0 d3 d6 d9 d12 d15 d18 dCK a a a a a a aS1 a a a ab b bcd abS2 a a a ab b ab bS3 a a a b b d c由圖52可以看出，從脅迫開始至第9天，除S3處理葉片MDA含量增幅稍大以外，其余處理與CK相差不大，并且在這段時(shí)間內(nèi)都保持在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的水平，這說明輕度的干旱脅迫尚未對(duì)大葉冬青產(chǎn)生明顯傷害。到第15天時(shí)，各處理的MDA含量稍有下降，表明大葉冬青在受到傷害后能積極地進(jìn)行自我調(diào)整，顯示出一定的抗旱能力。 干旱脅迫對(duì)大葉冬青葉片SOD活性的影響 超氧化物歧化酶(SOD)是植物體內(nèi)清除自由基的最關(guān)鍵的保護(hù)酶之一，它能催化生物體內(nèi)氧活化的第一個(gè)中間產(chǎn)物O2發(fā)生歧化反應(yīng)，生成O2和H2O2，從而起到清除活性氧，維護(hù)氧代謝平衡的重要作用。干旱脅迫下大葉冬青葉片SOD活性的變化的變化見圖53。各處理的SOD活性峰值均在第3天就出現(xiàn)了，%，%，%，說明干旱脅迫激活了SOD活性的水平，使其清除自由基的能力加強(qiáng)，且隨著脅迫濃度的增加，其激活程度也較大。此后9～12 d之間，SOD活性與對(duì)照差異不顯著（見表53），說明大葉冬青進(jìn)行有效地調(diào)節(jié)，適應(yīng)了此濃度的脅迫。而S3處理產(chǎn)生不可逆的下降，說明SOD的防御和清除自由基的能力只在一定范圍內(nèi)有效，一旦超出了其范圍，SOD就會(huì)失活。 圖54 干旱脅迫下大葉冬青葉片POD活性的變化Fig54 The activity variation of POD on leaf Broadleaf Holly under drought stress表54不同干旱脅迫處理下大葉冬青葉片POD活性隨時(shí)間變化的方差分析（單位：μ﹒g1FW﹒min1）Table54 Different drought stress treatments Broadleaf Holly leaf POD changes with time analysis of variance處理Treatment　處理時(shí)間Treating Time0 d3 d6 d9 d12 d15 d18 dCK717 a710 a629 a627 a600 a721 a798 aS1703 a801 a594 a944 ab1393 b842 a1153 bS2738 a909 a445 a878 ab1809 c1134 b1169 bS3798 a917 a601 a1277 bc1325 b1086 b463 c由圖54可以看出，隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，SSS3處理的大葉冬青POD活性呈現(xiàn)“升—降—升—降”的變化趨勢(shì)，在脅迫的第3天，各處理的POD活性都有小幅上升，說明干旱脅迫導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)外過氧化物酶的積累，植物體內(nèi)的保護(hù)酶會(huì)同時(shí)啟動(dòng)來抵御不良環(huán)境，POD活性會(huì)上升。說明隨著脅迫濃度的增加，POD清除能力也隨之增加。S3處理的活性在18 天時(shí)低于CK，說明在長(zhǎng)時(shí)間的重度脅迫下，植物細(xì)胞忍耐活性氧的水平可能存在一個(gè)閾值，超過了這個(gè)閾值，就會(huì)導(dǎo)致植物受到極大的傷害(李雪等，2008)。過氧化氫過多，則會(huì)造成植物體內(nèi)生理系統(tǒng)的紊亂，破壞膜的結(jié)構(gòu)。圖55 干旱脅迫下大葉冬青