【正文】 煙酰胺腺嘌呤二 核苷酸還原型（ Thio－ NAD）。如此進(jìn)行循環(huán)反應(yīng)，最后測定生成的β－硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（ Thio－ NAD）的吸光度，求得膽汁酸濃度值。 試劑盒保存：保存 2～ 25℃，試劑未啟封情況下可穩(wěn)定至標(biāo)簽的失效期。 試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)雙試劑型，即開即用，無特殊準(zhǔn)備。s 緩沖液 200 mmol / L， pH 。s 緩沖液 200 mmol/L， pH 。 校準(zhǔn)類型和數(shù)目：線性模式， 4 個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。但在：①更換試劑批號或出現(xiàn) 質(zhì)控漂移時(shí)；②當(dāng)儀器進(jìn)行全面保養(yǎng) 后；③重要零件更換后；均須進(jìn)行一次校準(zhǔn)。 6 質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則 6. 1 質(zhì)控品采用由 BIORAD 公司提供的定值質(zhì)控血清，產(chǎn)品號為 616/1UN 質(zhì)控液重建方法：即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。 質(zhì)控規(guī)則：采用 Westgard 多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。 7 適用儀器 適用 Hitachi 7600 型全自動生化分析儀。 9 主要分析參數(shù) Assay Code： 2 Point End； Reaction Time： 10； Assay Point： 19～ 28；Wave Length Sec： 660； Wave Length Prim： 405； Sample N： ， D： － － 95， I： ； R1： 120； R2： 30； Calibration Type： Linear； Point： 4； Span 3； TimeOut： Blank 20 Full 160； SD Limit： ； S1ABS Limit： 10 120； Unit：μ mol/L； Technical Limit： 5 180。 11 檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍 結(jié)果的報(bào)告 結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。 如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。超過此范圍的結(jié)果報(bào)告時(shí)必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測定的結(jié)果。 線性范圍： 5～ 180μ mol/L。 5 % 。 14 臨床意義 血清膽汁酸水平是反映肝實(shí)質(zhì)損傷的一個(gè)重要指標(biāo)。 對檢測酒精或工業(yè)化學(xué)品引起的肝細(xì)胞損傷的靈敏度優(yōu)于其它肝功能試驗(yàn)。 血清 TBA 對慢性肝炎的鑒別以及預(yù)后的判斷有意義。 肝硬化患者的空腹 TBA 和餐后 TBA 均增高，其異常率高于所有其他肝功能試驗(yàn)。 15 結(jié)果審核以 及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系 由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。 相關(guān)項(xiàng)目：審核與丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、谷胺酰轉(zhuǎn)移酶及膽紅素的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。 臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請?；虿捎煤蛛x膠的 黃色蓋子 SST 真空采血管 ， 如為 急診標(biāo)本，使用淺綠色蓋子 PST 試管 。 標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請單上填寫標(biāo)本采集時(shí)間 ， 如為 急診標(biāo)本，加上急查標(biāo)識。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。 對反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。 其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。 標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（ 15～ 25℃ ）下可穩(wěn)定 48h，普通冰箱中（ 2～ 8℃）穩(wěn)定 7 天。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時(shí)間超過 1 天的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。 標(biāo)本采集的注意事項(xiàng) 采血前使受檢者保持平靜、松弛、 避免劇烈活動 ， 和 12h 以 上禁食空腹?fàn)顟B(tài)。 3 方法原理 測定反應(yīng)以如下的原理進(jìn)行：＋L D HA L T＋NADNA D H 乳酸丙酮酸 丙酮酸谷氨酸酮戊二酸丙氨酸 ?? ??? ??? ???? ? ALT 催化 L丙氨酸的氨基轉(zhuǎn)移至α 酮戊二酸，生成丙氨酸和 L谷氨酸。 NADH 吸光度的下降速率和 ALT 的活力成正比。 23 試劑盒保存： 未啟封試劑盒在 2～ 8℃ 保存 ，可儲存至失效期。 開蓋后避免污染。 試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)雙試劑型， 即開即用，無特殊準(zhǔn)備。 含有穩(wěn)定劑與保護(hù)劑。 校準(zhǔn)周期：校準(zhǔn)間隔時(shí)間： Full 3 天； Blank 1 天。 校準(zhǔn)液 重建方法：用 ，輕輕混勻， 20min后即可使用 。 質(zhì)控品測定： 在每一批標(biāo)本中 測定兩個(gè)水平質(zhì)控血清各一次。 如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時(shí)糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測。 8 標(biāo)本檢測步驟 裝載試劑 → 進(jìn)行校準(zhǔn) → 進(jìn)行質(zhì)控 → 輸入標(biāo)本檢測項(xiàng)目 → 加載標(biāo)本 → 標(biāo)本測定 → 結(jié)果復(fù)核 → 報(bào)告 9 主要分析參數(shù) Assay Code： Rate A； Reaction Time： 5； Assay Point： 6～ 10； Wave Length Sec： 405； Wave Length Prim： 340； Sample N： ， D： － － 147， I：； R1： 200； R2： 100； Abs. Limit： 5000 Decrease； Calibration Type：Linear； Point： 4； Span 3； Time Out： Full 72， Blank 24； SD Limit： ；Duplicate Limit： 32020； Sensitivity Limit： 0； S1ABS Limit：－ 20 10；Unit： U/L； Technical Limit： 3 1400。 11 檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍 結(jié)果的報(bào)告 結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。 如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。 12 操作性能 精密度：批內(nèi) CV 約為 %，批間 CV 約為 %。 方法的有限性及干擾因素： EDTA(200mg/dl)，檸檬酸鈉（ 116mmol/L）對本試驗(yàn)有干擾。 磷酸吡哆醛能使血清中 ALT 顯示最大活性 ，使用不含有磷酸吡哆醛試劑測定ALT 活性 ，某些疾病患者如 腎臟病患者 ，可因血清中磷酸吡哆醛含量不足而致 ALT活性低估 。 肝細(xì)胞因感染病毒而受損傷，尤其是處于急性期時(shí)， ALT 從細(xì)胞內(nèi)逸出至血液中，血清中 ALT 活性可明顯升高，因此是各種肝炎患者檢查的一個(gè)重要指標(biāo)。 實(shí)質(zhì)性臟器有非感染性炎癥或損傷時(shí)，如脂肪肝、梗阻性膽紅素、肝內(nèi)膽汁瘀滯、膽管炎、膽囊炎、肝癌、急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭時(shí)的肝臟淤血 等，均可成為血清 ALT 升高的原因。 15 結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系 由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。 相關(guān)項(xiàng)目：審核與肝功能組合中其他 項(xiàng)目、膽汁酸的關(guān)系， ALT/AST 比值是否與疾病一致。 16 威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定 ＞ 1000/L 為應(yīng)引起臨床重視的緊急值，可能有較嚴(yán)重的肝細(xì)胞壞死或 受損 的情況。 審核者首先根據(jù)審核程序，分析質(zhì)控、定標(biāo)、試劑的情況是否正常，當(dāng)天其他已做標(biāo)本本項(xiàng)目的總體情況有無異常，確認(rèn)實(shí)驗(yàn)有關(guān)的基礎(chǔ)是在正常狀態(tài) 25 中。 對該標(biāo)本進(jìn)行一次重復(fù)測定，確認(rèn)緊急值是否重現(xiàn)。 確認(rèn)此緊急值是可報(bào)告的，由技術(shù)主管或科主任立即電話向主管臨床醫(yī)生報(bào)告，并作好電話報(bào)告記錄，包括電話報(bào)告時(shí)間和對方接聽人員的標(biāo)識。 17 有關(guān)引用程序與文件 (同前 ) 18 參考文獻(xiàn) (同前 ) 19 本 SOP 變動程序 (同前 ) 20 本 SOP 涉及的記錄與表單 (同前 ) 26 寧 波市第 九醫(yī)院檢驗(yàn)科管理文件 項(xiàng)目 SOP 文件 編號： SHFXXM0207 版本： 2020A/0 生效日期： 20201001 七 血清 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 測定 第 1 頁 共 4 頁 1 檢驗(yàn)申請 單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請： 血清 天門冬氨酸 氨基轉(zhuǎn)移酶 (縮寫 AST)； 組合項(xiàng)目申請：心肌酶譜或 肝功能測定。 2 標(biāo)本采集與處理 標(biāo)本采集 常規(guī)靜脈采血約 2ml，不抗凝，置普通試管中。 檢驗(yàn)申請單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識符。 標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請單一起及時(shí)運(yùn)送至檢驗(yàn)科。 下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本 標(biāo)本量不足：少于 的全血標(biāo)本，或少于 的血清或血漿。 無法確認(rèn)標(biāo)本與 申請單對應(yīng)關(guān)系的。 標(biāo)本保存 接收標(biāo)本后在 30min 內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清。－ 20℃ 保存穩(wěn)定 30天。 已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，置 2～ 8℃冰箱內(nèi)保存 7 天。 可以使用 EDTA、枸櫞酸鹽、草酸鹽 抗凝的血液標(biāo)本，但 肝素 抗凝劑 可引起反應(yīng)液混濁 。 MDH 催化草酰乙酸還原的同時(shí)將 NADH 氧化成 NAD+。 4 試劑及其他用品 試劑： 門冬 氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定 試劑盒，由 日本和光公司出品 。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內(nèi)穩(wěn)定 28 天。當(dāng)試劑變混濁，或者未開蓋的液體有沉淀時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。 試劑盒主要成分： R1： Tris 緩沖 液 () 35mmol/L， L－ 天門冬氨酸 100mmol／ L， MDH≥ 2900 U/L ， NADH ／ L； R2： Tris 緩沖 液 () 178mmol/L， L－ 天門冬氨酸 420mmol／ L，α －酮戊二 酸 31mmol／ L。 5 校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式 校準(zhǔn)品：由羅氏公司提供的多項(xiàng)目校準(zhǔn)液 校準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點(diǎn)數(shù)目：線性模式， 4個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)。但在：①更換試劑批號或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時(shí)；②儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后；均須進(jìn)行一次校準(zhǔn)。 6 質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則 質(zhì)控品采用由 BIORAD 公司提供的定值質(zhì)控血清，產(chǎn)品號為 616/1UN 質(zhì)控液重建方法 ：用 蒸餾水溶解，輕輕混勻， 20min 后即可使用 。 質(zhì)控規(guī)則：采用 Westgard 多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷 。 7 適用儀器 適用 Hitachi 7600 型全自動生化分析儀。 9 主要分析參數(shù) Assay Code： Rate A； Reaction Time： 5； Assay Point： 6～ 10； Wave Length Sec： 405； Wave Length Prim： 340； Sample N： ， D： － － 147， I：； R1： 200； R2： 100； Abs. Limit： 5000 Decrease； Calibration Type：Linear； Point： 4； Span 3； TimeOut： Full 72， Blank 24； SD Limit： ；Duplicate Limit： 32020； Sensitivity Limit： 0； S1ABS Limit：－ 20 10；Unit： U/L； Technical Limit： 3 1500。 11 檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍 結(jié)果的報(bào)告 結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。 如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。 12 操作性能 精密度：批內(nèi) CV 約為 %，批間 CV 約為 %。 方法的有限性及干擾因素： EDTA(200mg/dl)，檸檬酸鈉（ 116mmol/L）對本試驗(yàn)有干擾。 13 參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平 血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 參考范圍 （ 酶測定溫度 37℃ ） 男性： 2 ～ 40 U/L； 女性： 2～ 38 U/L 14 臨床意義 AST 存在于各種組織細(xì)胞內(nèi)，肝、心、腎組織中的含量較多，正常時(shí)血清中 AST 活性很低。肝細(xì)胞受損時(shí)，血清中 AST水平變化早，恢復(fù)快，但升高幅度不如 ALT。 正常人 AST/ALT 比值為 ，此比值變化對急性肝炎的預(yù)后判斷有意義。 心肌受損后 AST 大量進(jìn)入血液，因此血清 AST 活性也常作為“心肌酶譜”檢測的一項(xiàng)內(nèi)容。 15 結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系 由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。 相關(guān)項(xiàng)目：審核與肝功能組合中其他項(xiàng)目、膽汁酸的關(guān)系， ALT/AST 比值 是否與疾病一致。 如出現(xiàn)與臨床不符甚至相 悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。 處理程序 檢測人員立即報(bào)告審核者。 出現(xiàn)緊急值的標(biāo)本有無異常，該標(biāo)本其他相關(guān)項(xiàng)目有無異常，尤其是該患者其他肝功能指標(biāo)或心肌酶譜的情況。 報(bào)告技術(shù)質(zhì)量主管及科主任，立即與臨床聯(lián)系，了解臨床相關(guān)情況。 及時(shí)簽發(fā)正式檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告。 臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請?；虿捎煤蛛x膠的 黃色蓋子 SST 真空采血管 ， 如為 急診標(biāo)本，使用淺綠色蓋子 PST 試管 。 標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請單上填寫標(biāo)本采集時(shí)間，如為 急診標(biāo)本，加上急查標(biāo)識。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。 對反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。 其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。 標(biāo)本保存時(shí)間：室溫（ 15～ 25℃ ）下可穩(wěn)定 48h，普通冰箱中（ 2～ 8℃）穩(wěn)定 7