免疫分析技術(shù)基本原理-閱讀頁
2025-07-02 03:58本頁面
【正文】 要因素：標(biāo)記抗體與被捕捉抗原的交叉重疊結(jié)合而導(dǎo)致抗原變構(gòu)? 只要靶抗原的正常值與病理值之差大于3個(gè)數(shù)量級(jí)，均應(yīng)警示由于 嚴(yán)重的“HDHOOK效應(yīng)”而發(fā)生的假陰性，假低值兩步夾心法HOOK效應(yīng)僅發(fā)現(xiàn)于少數(shù)具有多重抗原決定簇的大分子蛋白質(zhì)抗原如：SF、AFP、PSA、HCG等）。u 所選用的試驗(yàn)方法是二步IRMA,靶抗原是一個(gè)已知其WM為22kDa、 僅有 二個(gè)不同抗原簇的人生長因子(hGH)。用此實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),測(cè)定單體hGH抗原時(shí),沒有發(fā)現(xiàn)“HDHOOK效應(yīng)”問 題奇怪的是,用同樣實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),測(cè)定非共價(jià)結(jié)合的二聚體(D)hGH則呈現(xiàn)了 “HDHOOK效應(yīng)”。這種“抗原分子變構(gòu)理論”的核心是抗原的“質(zhì)”的問題。其中構(gòu)象性決定簇是幾條肽鏈(非連續(xù)性)提供的氨基酸組合而成的,比線性(連續(xù)性)決定簇的穩(wěn)定性差,易發(fā)生變構(gòu)(見圖2)。從現(xiàn)有資料看,僅報(bào)道鐵蛋白、AFP、PSA及HCG等,具有多重決定蔟的大分子抗原,在二步法中產(chǎn)生“HDHOOK效應(yīng)”。表明抗原“質(zhì)”的特性是關(guān)鍵性因素。已知Igs分子在遇到相應(yīng)抗原時(shí),為了執(zhí)行其固有的(本質(zhì)性)生物學(xué)功能,其分子的Fab臂可圍繞鉸鏈區(qū),作變角折彎(100176。 當(dāng)其與被捕捉抗原分子之間,發(fā)生交差重疊結(jié)合之后,由于“立體效應(yīng)(steric effect)”,加之標(biāo)記二抗的親和力大于一抗等輔助因素,是可以迫使已被捕捉的抗原分子從一抗上解離洗滌出去的。在這段時(shí)間內(nèi)，血清中無法檢測(cè)出相應(yīng)的抗原抗體標(biāo)志物。H B V、H C V、H I V的窗口期的時(shí)間分別為570和22天，P24抗原的窗口期平均為15天，而應(yīng)用核酸技術(shù)，可分別將H B V、H C V、H I V的窗口期縮短為4111天。相信隨著檢測(cè)的病毒標(biāo)志物的不同，檢測(cè)技術(shù)的提高，可大大縮短窗口期時(shí)間。由于醫(yī)學(xué)上還沒有絕對(duì)明確的窗口期，有個(gè)別朋友甚至2年以后還在檢查，不知道他們還要在恐懼中多久才能找到回家的路！所以，每個(gè)人都應(yīng)該在深思熟慮后為自己確定一個(gè)明確的心理窗口期，也就是說，過了這個(gè)期限還是陰性就可以徹底放心，之后的任務(wù)就是如何恢復(fù)到以前的生理和心理狀態(tài)，回到自己以前的生活中去。各種疾病的潛伏期長短不一，短者數(shù)小時(shí)，長者可達(dá)數(shù)月或數(shù)年。人類患上禽流感后，潛伏期一般為7天以內(nèi)。一般認(rèn)為潛伏期長短與感染病毒的種類或者型別、病毒的致病性、病毒的數(shù)量、感染途徑、被感染機(jī)體的免疫力以及其他非生理因素等有關(guān)。HBV感染后的潛伏期一般為20天至6個(gè)月，也有報(bào)道28—160天，平均70—80天；HCV感染后臨床表現(xiàn)一般較輕，常為亞臨床型，但輸血后感染的潛伏期一般為20天至6個(gè)月，也有資料報(bào)道2—26周，平均8周；HIV感染后1到2個(gè)月內(nèi)可能出現(xiàn)急性的癥狀和體征，隨后進(jìn)入較長的無癥狀期，持續(xù)6—15年，平均8—10年，大量輸血的可縮短至1—5年。 灰區(qū)概念對(duì)血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員篩查尤為重要。CV）， CV為該試劑的批內(nèi)CV (一般在1520%間）； 2）177。酶免疫吸附實(shí)驗(yàn)（EIA）的性能指標(biāo)（定性產(chǎn)品）靈敏度靈敏度（sensitivity）：某一檢測(cè)系統(tǒng)檢出極低被檢物質(zhì)的能力。檢出被檢物質(zhì)最低量的能力：常用檢出最低量被檢物的含量（即分析靈敏度或最低檢出限）來表示。但這種區(qū)分在目前的條件下是否在臨床上有確切的意義并不能全部的肯定。也叫滴度。在標(biāo)定系列靈敏度血清的時(shí)候要非常注意一個(gè)問題：要注意基質(zhì)效應(yīng)在不同系統(tǒng)（包括不同廠家的試劑盒、工藝、不同原材料）上對(duì)靈敏度血清測(cè)量值的影響，在改變系統(tǒng)時(shí)，必須重新標(biāo)定靈敏度血清。 選擇原材料一定要選擇親和力高的原料。特異性特異性：指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力（無假陽性），取決于包被抗原（體）及標(biāo)記抗原（體）的純度及特異性，生產(chǎn)工藝對(duì)試劑的特異性也有較大影響。2. 試劑盒工藝：試劑盒在生產(chǎn)的時(shí)候被污染了。4. 標(biāo)本因素：高度溶血、脂血標(biāo)本。6. 其它存在于血清中的物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如膽紅素、膽固醇、甘油三酯等。準(zhǔn)確度不能以數(shù)字表示，往往用不準(zhǔn)確度來衡量。準(zhǔn)確度是靈敏度和特異性的綜合指標(biāo)，是試劑盒質(zhì)量最主要的指標(biāo)之一。常用變異系數(shù)來表示。變異系數(shù)分為批內(nèi)變異和批間變異。 影響檢測(cè)精密性的因素1. 操作的水平：要對(duì)操作者進(jìn)行規(guī)范化操作的培訓(xùn)。對(duì)室溫、反應(yīng)溫度、強(qiáng)氧化劑、強(qiáng)還原劑、強(qiáng)光照射、劇烈的震蕩等因素應(yīng)進(jìn)行控制，使其滿足實(shí)驗(yàn)的要求。4. 試劑本身的質(zhì)量：載體的質(zhì)量（包被板本身的吸附性和均一性）；活性材料的親和力；生產(chǎn)工藝。常用某一或某幾個(gè)性能指標(biāo)的改變來表示。2. 運(yùn)輸期：指試劑從出廠到試劑到達(dá)直接客戶手中這段時(shí)間。3. 有效期：指產(chǎn)品從出廠日期到產(chǎn)品有效期截止日期，包含運(yùn)輸期。試劑穩(wěn)定性的考核主要分4個(gè)方面：1. 實(shí)時(shí)穩(wěn)定性：指的是試劑在規(guī)定的貯存條件（2～8℃）下，在試劑有效期內(nèi)性能指標(biāo)的改變。根據(jù)阿倫尼烏斯公式，認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于2—8℃保存一個(gè)半月。運(yùn)輸?shù)哪康牡?、運(yùn)輸?shù)姆绞?、運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間等對(duì)試劑的性能指標(biāo)都有影響，必須模擬可能的極端的運(yùn)輸條件，以驗(yàn)證試劑在這些條件下其質(zhì)量指標(biāo)的下降程度。必須考慮用戶對(duì)試劑的使用習(xí)慣。
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