免疫分析技術(shù)基本原理-資料下載頁(yè)
2025-06-17 03:58本頁(yè)面
【正文】 一段區(qū)域定為陽(yáng)性可疑，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)或換試劑重測(cè)以確定其陰陽(yáng)性，如仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報(bào)告+（陽(yáng)性）。 灰區(qū)概念對(duì)血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員篩查尤為重要。 灰區(qū)的設(shè)置有二種： 1）（1177。CV）， CV為該試劑的批內(nèi)CV (一般在1520%間）； 2）177。2s，s為實(shí)驗(yàn)室做室內(nèi)質(zhì)控ROC（受試者工作特征曲線）的s。酶免疫吸附實(shí)驗(yàn)（EIA）的性能指標(biāo)（定性產(chǎn)品）靈敏度靈敏度（sensitivity）：某一檢測(cè)系統(tǒng)檢出極低被檢物質(zhì)的能力。包括兩層意思：；。檢出被檢物質(zhì)最低量的能力：常用檢出最低量被檢物的含量（即分析靈敏度或最低檢出限）來(lái)表示。, , ，意思是在某一檢測(cè)方法下，檢測(cè)系統(tǒng)能將有用信號(hào)和背景信號(hào)區(qū)分開(kāi)來(lái)時(shí)所對(duì)應(yīng)的被檢物的濃度。但這種區(qū)分在目前的條件下是否在臨床上有確切的意義并不能全部的肯定。評(píng)價(jià)方式：用標(biāo)準(zhǔn)被檢物持續(xù)稀釋，直到能區(qū)分有用信號(hào)和背景信號(hào)的最大稀釋倍數(shù)。也叫滴度。在ELISA實(shí)驗(yàn)里，常用強(qiáng)陽(yáng)性混合血清系列稀釋，同時(shí)用市場(chǎng)反應(yīng)較好的試劑盒同時(shí)進(jìn)行標(biāo)定，選擇這些試劑盒都能檢出的最大稀釋倍數(shù)的血清作為靈敏度血清，通常會(huì)有成系列的幾個(gè)血清。在標(biāo)定系列靈敏度血清的時(shí)候要非常注意一個(gè)問(wèn)題：要注意基質(zhì)效應(yīng)在不同系統(tǒng)（包括不同廠家的試劑盒、工藝、不同原材料）上對(duì)靈敏度血清測(cè)量值的影響，在改變系統(tǒng)時(shí)，必須重新標(biāo)定靈敏度血清。（假陰性越少越好），取決于包被物的全面性和親和力。 選擇原材料一定要選擇親和力高的原料。有些廠家為追求試劑對(duì)大多數(shù)陽(yáng)性標(biāo)本的靈敏度，只選擇最強(qiáng)的一種或少數(shù)幾種優(yōu)勢(shì)表位，而犧牲了在患者人群中較少出現(xiàn)的亞型或者原材料片段，這種做法是非常危險(xiǎn)的，是對(duì)目標(biāo)人群的不負(fù)責(zé)任。特異性特異性：指試劑正確檢定不存在的被檢物質(zhì)的能力（無(wú)假陽(yáng)性），取決于包被抗原（體）及標(biāo)記抗原（體）的純度及特異性，生產(chǎn)工藝對(duì)試劑的特異性也有較大影響?？赡苡绊懺噭┖刑禺愋缘囊恍┮蛩?. 操作因素：交叉污染、洗滌不徹底。2. 試劑盒工藝：試劑盒在生產(chǎn)的時(shí)候被污染了。3. 交叉：相似于被檢物的物質(zhì)交叉反應(yīng)，主要由生物原材料不純?cè)斐伞?. 標(biāo)本因素：高度溶血、脂血標(biāo)本。5. 血清標(biāo)本處理：抗凝劑、反復(fù)凍融。6. 其它存在于血清中的物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如膽紅素、膽固醇、甘油三酯等。準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度（accuracy） ：是指測(cè)定結(jié)果與真值（或靶值）接近的程度。準(zhǔn)確度不能以數(shù)字表示，往往用不準(zhǔn)確度來(lái)衡量。在ELISA實(shí)驗(yàn)中，真值往往指的是用決定性方法（即“金標(biāo)準(zhǔn)”）測(cè)量所得到的結(jié)果。準(zhǔn)確度是靈敏度和特異性的綜合指標(biāo)，是試劑盒質(zhì)量最主要的指標(biāo)之一。精密性精密性（Precision ）：是指對(duì)同一樣本重復(fù)測(cè)定時(shí)，每次測(cè)定結(jié)果與平均值的接近程度，即重復(fù)測(cè)定值之間的符合程度。常用變異系數(shù)來(lái)表示。CV=SD/X100%其中，X為檢測(cè)均值，SD為連續(xù)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)差。變異系數(shù)分為批內(nèi)變異和批間變異。ELISA試劑一般指其批內(nèi)變異系數(shù)（CV），其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍。 影響檢測(cè)精密性的因素1. 操作的水平：要對(duì)操作者進(jìn)行規(guī)范化操作的培訓(xùn)。2. 環(huán)境的影響：要控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境。對(duì)室溫、反應(yīng)溫度、強(qiáng)氧化劑、強(qiáng)還原劑、強(qiáng)光照射、劇烈的震蕩等因素應(yīng)進(jìn)行控制，使其滿足實(shí)驗(yàn)的要求。3. 試劑的儲(chǔ)運(yùn)：試劑的運(yùn)輸和保存一定要符合試劑要求的條件。4. 試劑本身的質(zhì)量：載體的質(zhì)量（包被板本身的吸附性和均一性）；活性材料的親和力；生產(chǎn)工藝。 穩(wěn)定性穩(wěn)定性（stability）：指試劑在其有效期內(nèi)滿足其使用功能的程度。常用某一或某幾個(gè)性能指標(biāo)的改變來(lái)表示。 試劑從生產(chǎn)到到達(dá)直接客戶手中應(yīng)分為3個(gè)階段：1. 貨架期：指的是從半成品生產(chǎn)出來(lái)到成品組裝前這段時(shí)間， 即半成品的在庫(kù)時(shí)間，這個(gè)時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)產(chǎn)品的性質(zhì)、銷量等因素可以從1個(gè)月到6個(gè)月甚至1年不等。2. 運(yùn)輸期：指試劑從出廠到試劑到達(dá)直接客戶手中這段時(shí)間。雖然這段時(shí)間可能只有2天到1周的時(shí)間，但由于這段時(shí)間試劑外部條件變化較為劇烈，所以需要特別的引起注意。3. 有效期：指產(chǎn)品從出廠日期到產(chǎn)品有效期截止日期，包含運(yùn)輸期。 在考核試劑穩(wěn)定性的時(shí)候一定要注意這幾個(gè)周期。試劑穩(wěn)定性的考核主要分4個(gè)方面：1. 實(shí)時(shí)穩(wěn)定性：指的是試劑在規(guī)定的貯存條件（2～8℃）下，在試劑有效期內(nèi)性能指標(biāo)的改變。2. 加速破壞實(shí)驗(yàn)：一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存，定期測(cè)定其靈敏度、特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開(kāi)始下降為止。根據(jù)阿倫尼烏斯公式，認(rèn)為37℃每穩(wěn)定一天相當(dāng)于2—8℃保存一個(gè)半月。3. 運(yùn)輸穩(wěn)定性：必須考慮試劑直接客戶所在地的信息。運(yùn)輸?shù)哪康牡?、運(yùn)輸?shù)姆绞?、運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間等對(duì)試劑的性能指標(biāo)都有影響，必須模擬可能的極端的運(yùn)輸條件，以驗(yàn)證試劑在這些條件下其質(zhì)量指標(biāo)的下降程度。4. 實(shí)際使用穩(wěn)定性： 試劑在直接客戶的使用過(guò)程中，往往不能一次使用完96人份的試劑，而是多次的使用。必須考慮用戶對(duì)試劑的使用習(xí)慣。 常用的考核方式是做模擬用戶使用習(xí)慣的拆封實(shí)驗(yàn)。
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