免疫分析技術(shù)基本原理-展示頁
2025-06-26 03:58本頁面
【正文】 患病與否，所以需要更進(jìn)一步的確證實(shí)驗(yàn)。在檢驗(yàn)學(xué)中指的是某種疾病標(biāo)志物的確證實(shí)驗(yàn)。例如某些激素項(xiàng)目的超敏試劑盒能幫助醫(yī)師判定疾病的進(jìn)程及處理對策。, MDL）：是指不同于參考值的另一些限值，通過觀察測定值是否高于或低于這些限值，可在疾病診斷中起排除或確認(rèn)的作用，或?qū)δ承┘膊∵M(jìn)行分級或分類，或?qū)︻A(yù)后作出估計(jì)，以提示醫(yī)師在臨床上應(yīng)采取何種處理方式，如進(jìn)一步進(jìn)行某一方面的檢查，或決定采取某種治療措施等等。decide例如從人體采集的抗凝血清叫臨床標(biāo)本，而經(jīng)過稀釋或濃縮的標(biāo)本只能稱為稀釋標(biāo)本或濃縮標(biāo)本而不能稱之為臨床標(biāo)本。例如在ELISA實(shí)驗(yàn)里，HCG有測血樣的也有測尿樣的，對應(yīng)的血樣或尿樣叫這個(gè)測量方法的標(biāo)本。樣本是一個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)的概念，樣本往往不只包含一個(gè)個(gè)體。在表述陰性和假陰性時(shí)，和表述陽性/假陽性一樣，測量方法、測量對象和適用范圍一定要具體。陰性/假陰性陰性（Negtive,N）：在給定的某一判定標(biāo)準(zhǔn)下，某一結(jié)果不符合存在條件的稱為陽性。例如，我們經(jīng)常說某人HCV陽性，嚴(yán)格的說這是一個(gè)不規(guī)范的說法。假陽性：真實(shí)結(jié)果不滿足存在的條件，由于某些因素的干擾，導(dǎo)致測量結(jié)果滿足存在條件的稱為假陽性。陽性/假陽性陽性（positive, P）：在給定的某一判定標(biāo)準(zhǔn)下，某一測量結(jié)果符合存在條件的稱為陽性。此法常用于病毒性感染的早期診斷。俘獲法原理IgM的檢測常用于傳染病的診斷。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，最后的顯色也愈淺。競爭法的原理小分子抗原或半抗原缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法模式。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標(biāo)記方法。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對高于間接法。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。例如，HBsAg。免疫測定中凝膠擴(kuò)散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。3 最適比例 4 敏感性化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型互補(bǔ)關(guān)系，具有高度的特異性。高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。Ab]／[Ag][Ab] ,Ag 抗原抗體反應(yīng)的特性1 可逆性 抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動(dòng)態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：Ag+Ab→Ag不同亞型針對同一抗原表位的結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)相同。 抗體：由動(dòng)物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生，可特異性結(jié)合某種物質(zhì)的免疫球蛋白。按其引起免疫應(yīng)答的能力分半抗原、抗原、超抗原。免疫分析技術(shù)基本原理利用抗原、抗體之間的特異性結(jié)合來測定、分析特定物質(zhì)的方法178。 抗原：可誘導(dǎo)動(dòng)物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。178。分IgG、 IgM、 IgE、 IgA、 IgD五個(gè)亞型。不同亞型出現(xiàn)的先后順序不同，在血清中的含量不同，在機(jī)體中出現(xiàn)的地點(diǎn)不同。Ab 抗體的親和力（affinity），可以用平衡常數(shù)K表示：K=[AgAb的解離程度與K值有關(guān)。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性2 特異性 抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié)合位點(diǎn)之間。 測定某一特定的物質(zhì)，而不需先分離待檢物。酶反應(yīng)測定法的敏感度約為510μg/ml。標(biāo)記的免疫敏感度可提高數(shù)千倍，達(dá)ng/ml水平。固相免疫測定的原理基礎(chǔ):抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。雙抗體夾心法原理此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP等。雙抗原夾心法原理用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物。乙肝標(biāo)志物中抗HBsAg的檢測常采用本法。間接法原理間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測相應(yīng)抗體的方法。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。生物素－親合素法①：固相支持物；②：固相化抗原；③：特異性IgG（待檢物）；④：生物素化抗小鼠IgG （Biotin）；⑤：辣根過氧化物酶HRP酶標(biāo)鏈親和素（Avidin）；⑥：底物及顯色劑；⑦：顯色。例如ELISA實(shí)驗(yàn)中規(guī)定，標(biāo)本的測量結(jié)果大于界值判定為陽性。在表述陽性或者假陽性時(shí)，測量方法、測量對象和適用范圍一定要具體。因?yàn)榭梢岳斫鉃檫@么多的意思：此人是丙肝患者；此人HCV抗原陽性；此人HCV抗體陽性（可能是患者也可能不是患者）；此人HCV RNA陽性；等等等等。假陰性：真實(shí)結(jié)果滿足存在的條件，由于某些因素的干擾，導(dǎo)致測量結(jié)果不滿足存在條件的稱為假陰性。樣本/標(biāo)本/臨床標(biāo)本樣本：在統(tǒng)計(jì)里, 我們把所要考察對象的全體叫做總體, 其中每一個(gè)考察對象叫做個(gè)體, 從整體中所抽取的一部分個(gè)體叫做總體的一個(gè)樣本。標(biāo)本（Sample, S）：在給定的考察或測量方法中的具體測量對象，往往和統(tǒng)計(jì)學(xué)的個(gè)體等價(jià)。臨床標(biāo)本：在檢驗(yàn)技術(shù)中，直接從機(jī)體采集的，經(jīng)過處理而適用于臨床檢驗(yàn)的標(biāo)本。
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