免疫分析技術(shù)基本原理(參考版)
2025-06-20 03:58本頁(yè)面
【正文】 常用的考核方式是做模擬用戶使用習(xí)慣的拆封實(shí)驗(yàn)。4. 實(shí)際使用穩(wěn)定性： 試劑在直接客戶的使用過(guò)程中，往往不能一次使用完96人份的試劑，而是多次的使用。3. 運(yùn)輸穩(wěn)定性：必須考慮試劑直接客戶所在地的信息。2. 加速破壞實(shí)驗(yàn)：一般采用破壞性試驗(yàn)即將試劑存放于37℃保存，定期測(cè)定其靈敏度、特異性和精密度等指標(biāo)，直到其質(zhì)量指標(biāo)開(kāi)始下降為止。 在考核試劑穩(wěn)定性的時(shí)候一定要注意這幾個(gè)周期。雖然這段時(shí)間可能只有2天到1周的時(shí)間，但由于這段時(shí)間試劑外部條件變化較為劇烈，所以需要特別的引起注意。 試劑從生產(chǎn)到到達(dá)直接客戶手中應(yīng)分為3個(gè)階段：1. 貨架期：指的是從半成品生產(chǎn)出來(lái)到成品組裝前這段時(shí)間， 即半成品的在庫(kù)時(shí)間，這個(gè)時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)產(chǎn)品的性質(zhì)、銷量等因素可以從1個(gè)月到6個(gè)月甚至1年不等。 穩(wěn)定性穩(wěn)定性（stability）：指試劑在其有效期內(nèi)滿足其使用功能的程度。3. 試劑的儲(chǔ)運(yùn)：試劑的運(yùn)輸和保存一定要符合試劑要求的條件。2. 環(huán)境的影響：要控制實(shí)驗(yàn)環(huán)境。ELISA試劑一般指其批內(nèi)變異系數(shù)（CV），其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍。CV=SD/X100%其中，X為檢測(cè)均值，SD為連續(xù)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)差。精密性精密性（Precision ）：是指對(duì)同一樣本重復(fù)測(cè)定時(shí)，每次測(cè)定結(jié)果與平均值的接近程度，即重復(fù)測(cè)定值之間的符合程度。在ELISA實(shí)驗(yàn)中，真值往往指的是用決定性方法（即“金標(biāo)準(zhǔn)”）測(cè)量所得到的結(jié)果。準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度（accuracy） ：是指測(cè)定結(jié)果與真值（或靶值）接近的程度。5. 血清標(biāo)本處理：抗凝劑、反復(fù)凍融。3. 交叉：相似于被檢物的物質(zhì)交叉反應(yīng)，主要由生物原材料不純?cè)斐?。可能影響試劑盒特異性的一些因?. 操作因素：交叉污染、洗滌不徹底。有些廠家為追求試劑對(duì)大多數(shù)陽(yáng)性標(biāo)本的靈敏度，只選擇最強(qiáng)的一種或少數(shù)幾種優(yōu)勢(shì)表位，而犧牲了在患者人群中較少出現(xiàn)的亞型或者原材料片段，這種做法是非常危險(xiǎn)的，是對(duì)目標(biāo)人群的不負(fù)責(zé)任。（假陰性越少越好），取決于包被物的全面性和親和力。在ELISA實(shí)驗(yàn)里，常用強(qiáng)陽(yáng)性混合血清系列稀釋，同時(shí)用市場(chǎng)反應(yīng)較好的試劑盒同時(shí)進(jìn)行標(biāo)定，選擇這些試劑盒都能檢出的最大稀釋倍數(shù)的血清作為靈敏度血清，通常會(huì)有成系列的幾個(gè)血清。評(píng)價(jià)方式：用標(biāo)準(zhǔn)被檢物持續(xù)稀釋，直到能區(qū)分有用信號(hào)和背景信號(hào)的最大稀釋倍數(shù)。, , ，意思是在某一檢測(cè)方法下，檢測(cè)系統(tǒng)能將有用信號(hào)和背景信號(hào)區(qū)分開(kāi)來(lái)時(shí)所對(duì)應(yīng)的被檢物的濃度。包括兩層意思：；。2s，s為實(shí)驗(yàn)室做室內(nèi)質(zhì)控ROC（受試者工作特征曲線）的s。 灰區(qū)的設(shè)置有二種： 1）（1177。梅毒的潛伏期一般為2—4周灰區(qū)灰區(qū)：把定量分析的正常值范圍引入定性分析建立灰區(qū)概念，即將CO值上下的一段區(qū)域定為陽(yáng)性可疑，需重復(fù)實(shí)驗(yàn)或換試劑重測(cè)以確定其陰陽(yáng)性，如仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報(bào)告+（陽(yáng)性）。比如艾滋病病毒，經(jīng)輸血感染的劑量一般較大，所以潛伏期相對(duì)較短，而性接觸感染艾滋病病毒的劑量較小，因此潛伏期相對(duì)較長(zhǎng)。非典型性肺炎的潛伏期一般在4—10天，臨床報(bào)告最短病例為1天，最長(zhǎng)有20天，甚至有極個(gè)別病例達(dá)到28天。如禽類禽流感的潛伏期從幾小時(shí)到數(shù)天，最長(zhǎng)可達(dá)21天。 潛伏期潛伏期（incubation period）是指病原體侵入機(jī)體到最初出現(xiàn)癥狀和體征之間的這段時(shí)期。 心理窗口期還有一個(gè)很重要的“心理窗口期”。由于檢測(cè)技術(shù)的局限，某種檢測(cè)結(jié)果為陰性并不意味著就沒(méi)有感染，因此定期復(fù)查是非常重要的。各種病毒的窗口期是不一樣的，一般所稱的窗口期指的是檢測(cè)到病毒抗體的時(shí)間，但抗原以及核酸檢測(cè)同樣存在窗口期，但時(shí)間大大縮短。很可能與下列因素有關(guān)：i. 包被抗體親和力低ii. 洗滌不合適iii. 酶標(biāo)抗體不足iv. 過(guò)度孵育v. 其他非特異性反應(yīng)窗口期窗口期（window period）：病毒感染后病毒出現(xiàn)在血液中直到可以檢出足夠多的相應(yīng)病毒標(biāo)志物（抗原或抗體）前的時(shí)期。)、錐形轉(zhuǎn)動(dòng)以及最N末端的可變區(qū),依托Fab的恒定區(qū)作微小的“球穴”擺動(dòng)(見(jiàn)3)。ii. 其次,抗體分子是介導(dǎo)抗原分子變構(gòu)的重要外因。小分子抗原則否。 其次,蛋白質(zhì)分子內(nèi)非共價(jià)結(jié)合鍵,也是發(fā)生分子變構(gòu)的內(nèi)在因素。理論依據(jù)i. 首先,大分子蛋白質(zhì)抗原的可變構(gòu)性是決定性的內(nèi)因。 據(jù)此實(shí)驗(yàn)結(jié)果,推導(dǎo)出一個(gè)新理論:即標(biāo)記二抗介導(dǎo)被捕捉抗原分子發(fā)生分子變構(gòu)‘(Confromational change)’,使之形成標(biāo)記二抗與變構(gòu)的抗原分子復(fù)合物, 從固相一抗上解離, 最終產(chǎn)生反應(yīng)信號(hào)減低的“HDHOOK”效應(yīng)。一個(gè)單抗用于包被,另一 個(gè)作125I標(biāo)記 作二抗。u 隨著雜交瘤單抗的問(wèn)世，F(xiàn)emando等設(shè)計(jì)了一個(gè)堪稱現(xiàn)代經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ? 使這一課題的研究取得了突破性進(jìn)展。HOOK效應(yīng)高值鉤鐮效應(yīng)（HDHOOK） 在二位點(diǎn)夾心ELISA中，其劑量反應(yīng)曲線的高劑（HIGH DOSE，HD）區(qū)段，線性走向不是呈平臺(tái)狀無(wú)限后延，而是向下彎曲狀，似一只鉤子或一把鐮刀（HOOK），MILES（1974
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