【正文】 ?以 耶氏 肺孢菌生活史有 包囊和滋養(yǎng)體兩種形態(tài)。成熟包囊的包囊壁較厚，包囊內(nèi)含 8個(gè)囊內(nèi)小體，滋養(yǎng)體為繁殖型，壁較薄，單個(gè)核，形態(tài)不規(guī)則， 肺孢菌包囊（肺組織， 500 ） 2022年 3月 包囊（ cysts ） ? The cystic forms are more easily recognizable than the trophozoites and may be definitively identified using a variety of stains,such as calcofluor white, methenamine silver, or immunofluorescent staining (Figure 5092). The cysts of these anisms are spherical to concave, uniform in size (4 to 7 \xm in diameter), do not bud, and contain distinctive intracystic bodies. A parison of these four most mon staining method have demonstrated that the calcofluor white and methenamine silver methods likely represent the best balance between sensitivity and ? specificity, and have the ? best overall positive and ? negative predictive alues. 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 肺孢 子 菌 (Pneumocystis) 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?（三）真菌 檢驗(yàn) ? 卡氏肺孢菌 在人工合成培養(yǎng)基上不能生長，目前均采用動物如大鼠、小鼠等進(jìn)行培養(yǎng)。 ? 顯微鏡檢查看到 典型包囊，結(jié)合臨床表現(xiàn)即可作出診斷 。 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 肺孢 子 菌 (Pneumocystis c) 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?（三）真菌 檢驗(yàn) ? 主要有 PCR法和探針雜交法。應(yīng)用克隆化的卡氏肺孢菌 DNA片段作為診斷性探針，可用于肺的各種標(biāo)本和外周血標(biāo)本檢測。 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 肺孢 子 菌 (Pneumocystis c) 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?（三）真菌 檢驗(yàn) ? 用單克隆抗體檢測患者血清中卡氏肺孢菌抗原，有較好的敏感性和特異性。 ?臨床上凡是遇到任何免疫低下或嚴(yán)重營養(yǎng)不良病人伴有不可解釋的肺炎時(shí)，均應(yīng)疑及本病。 ?此類真菌在正常人體內(nèi)不存在，一旦侵入機(jī)體即可致病。 ?為雙相型真菌 ，需在 BSL3實(shí)驗(yàn)室操作。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 深 部感染 致病性真菌 檢驗(yàn) 莢膜組織胞漿菌（ Histoplasma） ?是 Darling于 1905年在巴拿馬運(yùn)河地區(qū)患者病灶首先發(fā)現(xiàn)。在流行區(qū)此菌可從土壤中分離出，人和動物都可被感染，傳染性極大。 ?（一） 分類和命名 屬于叢梗孢科。有性型屬于 Ajellomyces capsulatus。莢膜組織胞漿菌引起的組織胞漿菌病主要有三種臨床表現(xiàn)： ① 原發(fā)急性型：感染者可無臨床癥狀，僅皮膚試驗(yàn)陽性，在一些流行區(qū)域（如北美洲）主要引起肺鈣化； ② 慢性空洞型：雖引起較大的肺損害，但患者癥狀輕微或無臨床癥狀，臨床上常被誤診為肺結(jié)核； ③ 嚴(yán)重播散型：全身任何器官均可受到損傷，尤其是網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，極少數(shù)患者可進(jìn)展到此型。 ? 標(biāo)本涂片后 PAS染色鏡檢，如有感染可見到卵圓形、芽生、 ?有莢膜的孢子，一端較尖， ?一端較圓，芽頸較細(xì)， ?位于大單核細(xì)胞或多核白細(xì)胞內(nèi)。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 The tissue phase of H. capsulatumyeast forms 2022年 3月 深 部感染 致病性真菌 檢驗(yàn) 莢膜組織胞漿菌（ Histoplasma） ?（三） 真菌 檢驗(yàn) ? 將標(biāo)本接種于沙氏培養(yǎng)基和腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基各 2份，分別置于 25℃ 和 37℃ 培養(yǎng)，觀察絲狀菌落和酵母樣菌落，直到第 4周。必要時(shí)可通過脲酶試驗(yàn)陽性和明膠液化試驗(yàn)陰性進(jìn)一步確診。 2022年 3月 2022年 3月 深 部感染 致病性真菌 檢驗(yàn) 莢膜組織胞漿菌（ Histoplasma） ? 接種于小白鼠腹腔， 2周后死亡。 ? 用熒光抗體染色直接檢測莢膜組織胞漿菌多糖抗原，因敏感、特異性且快速，而被臨床實(shí)驗(yàn)室普遍采用。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 深 部感染 致病性真菌 檢驗(yàn) 莢膜組織胞漿菌（ Histoplasma） ? 用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、固相放射免疫分析等檢測血清中抗莢膜組織胞漿菌抗體，其中固相放射免疫分析敏感性最高，用于診斷輕度感染。 ? 用組織胞漿菌素作皮膚試驗(yàn)判斷是否感染，通常感染后 2～ 3周皮膚試驗(yàn)陽性，但此方法僅適于非流行區(qū)，尤適合兒童，不能用于流行區(qū)域內(nèi)人群感染的診斷。芽生菌屬只有 1個(gè)菌種為 皮炎芽生菌（B. dermatitidis）， 該菌最適于在含有機(jī)廢物的潮濕土壤或在爛木中生長，但很少能成功的分離。從北美的中西部到東南部均有病例報(bào)道，也可見于中南美洲和部分非洲地區(qū)。菌落生長慢；初為酵母樣薄膜生長，后為乳白色菌絲覆蓋；背面呈深棕色。m～ 5181。在 BHA上， 37℃ 培養(yǎng)呈酵母相，菌落呈棕色或奶油色酵母樣，表面有皺褶，中央稍高起。 ?播散性芽生菌病患者的血尿標(biāo)本。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 深 部感染 致病性真菌 檢驗(yàn) 芽生菌 (Blastomyces) 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 鑒定 KOH制片直接鏡檢可見酵母樣細(xì)胞，呈圓形、厚壁、單芽生孢子，很少多芽，直徑在 8181。m，有時(shí)可達(dá) 30181。芽頸較粗，直徑可達(dá)4181。m，即寬基底芽生，具特征性。球孢子菌屬包括 2個(gè)菌種， 粗球孢子菌（ ）和 ，這兩個(gè)菌種形態(tài)學(xué)一致，只能通過基因分析和在高鹽濃度存在時(shí)有不同的生長率（ ）來區(qū)別。而 是在美國的西南部、墨西哥和南美洲的沙漠地區(qū)。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 深 部感染 致病性真菌 檢驗(yàn) 球孢子菌屬 （ Coccidioides） ?鑒定 KOH制片直接鏡檢可見圓形、厚壁、大小不一的球形體 （直徑 10181。m），內(nèi)有直徑 2181。m大小的內(nèi)孢子，不出芽。球形體破裂 , 內(nèi)孢子外釋。 在肺空洞病例，痰液標(biāo)本可見到菌絲及小球形體。副球孢子菌屬只有 1個(gè)菌種 巴西副球孢子菌（ P. brasiliensis） 。多發(fā)生于中美洲和南美洲，尤其以巴西常見，在南美洲和拉丁美洲流行。 鹽水涂片可見出芽現(xiàn)象，典型時(shí)呈多芽。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 The tissue phase of a large yeast with broadbased buds 2022年 3月 深 部感染 致病性真菌 檢驗(yàn) 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 副球孢子菌屬 （ Paracoccidioides） 2022年 3月 鐮刀菌屬（ Fusarium ） ?為條件致病菌 。鐮刀菌是引起角膜炎、角膜潰瘍最常見的病原菌之一，還可引起內(nèi)眼炎、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎、鼻竇感染、甲真菌病和足菌腫等。 ...本菌可產(chǎn)生鐮刀菌毒素。鐮刀菌會產(chǎn)生一種 T2毒素，進(jìn)入人體后沉積下來，抑制軟骨組織生長，隨之造成 人體骨骼 停止生長，骨關(guān)節(jié)還會慢慢發(fā)生病變最終導(dǎo)致 缺血性股骨頭壞死 。由于鐮刀菌屬形態(tài)復(fù)雜，又易受外界環(huán)境的影響而發(fā)生變異，種類繁多，致使其分類和鑒定十分困難。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 鐮刀菌屬（ Fusarium ） ?（二）真菌檢驗(yàn) ? 取皮屑、膿液、甲屑、角膜潰瘍刮取物、活體組織及尸體組織標(biāo)本等， KOH制片直接 顯微鏡下可見 透明、分枝、分隔、成銳角分支的菌絲，與曲霉屬的菌絲難以區(qū)分。鏡下可見大、小分生孢子形態(tài)多樣。 ?傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)方法是鐮刀菌分類鑒定的基礎(chǔ)，非傳統(tǒng)的方法，如血清學(xué)、免疫組化、分子生物學(xué)等，對傳統(tǒng)方法起到了補(bǔ)充完善的作用，但仍未正式應(yīng)用于臨床菌種鑒定和診斷。菌落為白色絨毛或棉絮樣或粉狀，表面可為粉紅、橙紅、黃、紫等顏色，培養(yǎng)基背面可著同樣顏色。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 鐮刀菌屬（ Fusarium ） ?大分生孢子 的形態(tài)不僅是鐮刀菌屬菌種的特征，也是鐮刀菌屬的特征，描述其形狀、長度、頂細(xì)胞及基細(xì)胞形狀。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 鐮刀菌屬（ Fusarium ） ?小分生孢子 （多生于氣生菌絲上）多數(shù)無隔，少數(shù) 1隔或 2～ 3隔，卵形、橢圓形、棒狀、球形、梨形至檸檬形，個(gè)別為紡錘形；多數(shù)在產(chǎn)孢細(xì)胞頂端聚成假頭狀或連成串珠狀，少數(shù)散生。 ?有或無小分生孢子是鐮刀菌屬分類的主要特征 ，如果有則描述其形狀、大小、著生方式，如單生、假頭或鏈狀。 有或無厚壁孢子也是鐮刀菌屬分類的主要特征 ，厚壁孢子的有無及其在菌絲上的著生方式對分類具有一定參考價(jià)值。暗色真菌屬于子囊菌門（ Asycota），真子囊菌綱（Euasycetes），分 6個(gè)目 6個(gè)科 14個(gè)屬，暗色真菌常見的致病菌集中于刺盾炱目的蔓毛殼科， 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 暗色真菌 (Dematiaceous Fungi) ?（一）分類和命名 ?包括 枝孢瓶霉屬 （ Cladophialophora） 的卡氏枝孢瓶霉（ Cladophialophora carrionii） 、 著色霉屬 （Fonsecaea） 的裴氏著色霉（ Fonsecaea pedrosoi） 和F. monophora、 瓶霉屬 （ Phialophora） 的疣狀瓶霉（Phialophora verrucosa） 、 外瓶霉屬 （ Exophiala） 的皮炎外瓶霉（ Exophiala dermatitidis） 、棘狀外瓶霉（ Exophiala spinifera） 和 離蠕孢屬 （ Bipolaris） 的穗狀離蠕孢（ Bipolaris spicifera） 。還可引起系統(tǒng)性感染。 其特征為 乳頭狀瘤樣結(jié)節(jié) 形成,并有潰瘍傾向。病變可擴(kuò)展 ,形成暗紅或紫羅蘭色的 ,邊界清楚基部堅(jiān)硬的斑塊。在斑塊中心出現(xiàn)堅(jiān)硬的 ,呈暗紅色或灰色菜花狀的結(jié)節(jié)突起 ,在 4~15年的病程中 ,逐漸延伸覆蓋肢體 .可發(fā)生淋巴管堵塞 ,可有持續(xù)性瘙癢 ,繼發(fā)細(xì)菌感染可引起潰瘍 ,偶爾可引起敗血癥 . 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 暗色真菌 (Dematiaceous Fungi) ? 暗色真菌也可以引起正常宿主的其他類型感染 (暗色絲孢霉病的 )?？砂l(fā)生侵襲性鼻竇炎 ,有時(shí)可伴有骨壞死 ,也可發(fā)生皮下結(jié)節(jié)或膿腫 ,角膜炎 ,肺腫塊 ,骨髓炎 ,真菌性關(guān)節(jié)炎 ,肌內(nèi)囊腫 ,心內(nèi)膜炎 ,腦膿腫或慢性腦膜炎。硬殼小體對診斷著色芽生菌病有重要意義。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 暗色真菌 (Dematiaceous Fungi) ?（三）真菌檢驗(yàn) ? 主要包括形態(tài)學(xué)鑒定（基于孢子發(fā)生方式）、生理生化鑒定（溫度、碳源和氮源同化）、血清學(xué)鑒定（外抗原試驗(yàn)）、分子生物學(xué)鑒定。常見的幾種致病性暗色真菌的鑒定要點(diǎn)如下。菌落直徑可達(dá) 2cm；菌落緊密，橄欖綠至黑色，有較清楚的暗色邊界，表面可見棕綠色短的氣生菌絲。本菌的最高生長溫度 37℃ ，不能液化明膠。菌落直徑可達(dá) ；表面平坦或高起有皺折，表面絨毛狀或絮狀，橄欖綠至黑色，可見灰色短而密集的氣生菌絲。分生孢子單細(xì)胞性，橢圓形或圓筒形、長橢圓形， ～ 3 μm x 3 ～ 6μm 大小。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 ?4. 疣狀瓶霉 Phialophora verrucosa） 在 SDA上，27℃ 培養(yǎng) 14d。顯微鏡下可見瓶梗呈安瓿瓶形或葫蘆形，產(chǎn)孢方式為瓶型產(chǎn)孢，頂端可見清楚的領(lǐng)口狀結(jié)構(gòu)。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 ? /棘狀外瓶霉 Exophiala dermatitidis 菌落潮濕發(fā)亮，黑色酵母樣，主要由酵母細(xì)胞組成。顯微鏡下可見菌絲分枝分隔，分生孢子梗即環(huán)痕梗從菌絲末端或側(cè)面產(chǎn)生，顏色較深，直立、與菌絲呈直角分枝，其頂端有一較長的鼻狀突起即環(huán)痕產(chǎn)孢處，該突起為外瓶霉中最長的，環(huán)痕數(shù)目在外瓶霉中最多，可達(dá) 30段以上。本菌可在 38℃ ～ 39℃ 生長，可利用硝酸鹽。 ?菌落平坦擴(kuò)展，絮狀至毛狀，灰黃至橄欖色。顯微鏡下可見分生孢子梗在菌絲末端或側(cè)面產(chǎn)生，頂部產(chǎn)孢，呈膝狀彎曲，孢子脫落后留下瘢痕。分生孢子一般為 3細(xì)胞，兩極均可發(fā)