第八章微生物遺傳-閱讀頁
2025-04-22 04:00本頁面
【正文】 ，其余絕大部分是處于轉移染色體的末端，由于轉移過程常被中斷，因此F因子不易轉入受體細胞中，故HfrF175。(3) F′F175。F′F與F+F的不同：給體的部分染色體基因隨F′一起轉入受體細胞a）與染色體發(fā)生重組；b）繼續(xù)存在于F′因子上，形成一種部分二倍體；細胞基因的這種轉移過程又常稱為性導(sexduction），F(xiàn)因子轉導（Fduction），F(xiàn)因子媒介的轉導（Fmediated transduction）。能將一個細菌宿主的部分染色體或質(zhì)粒DNA帶到另一個細菌的噬菌體稱為轉導噬菌體細菌轉導的二種類型：普遍性轉導，局限性轉導(1) 普遍性轉導（generalized transduction）噬菌體可以轉導給體染色體的任何部分到受體細胞中的轉導過程(2) 局限性轉導（specialized transduction）溫和噬菌體感染，整合到細菌染色體的特定位點上宿主細胞發(fā)生溶源化，溶源菌因誘導而發(fā)生裂解時，在前噬菌體二側的少數(shù)宿主基因因偶爾發(fā)生的不正常切割而連在噬菌體DNA上（幾率一般僅有106），部分缺陷的溫和噬菌體，把供體菌的少數(shù)特定基因轉移到受體菌中。外源游離DNA分子:轉染(transfection)：噬菌體DNA被感受態(tài)細胞攝取并產(chǎn)生有活性的病毒顆粒。4．原生質(zhì)體融合兩個親本菌株去除細胞壁后的一種體細胞雜交育種方法(1) 親本及其遺傳標記選擇營養(yǎng)缺陷、抗性標記、熒光染色標記等(2) 原生質(zhì)體制備 ? 高滲溶液：無機鹽（KCl, NaCl, MgSO4）、 有機物(蔗糖、甘露醇、山梨醇)? 水解酶： 溶菌酶\蝸牛酶、纖維素酶、葡聚糖酶）(3) 原生質(zhì)體融合化學融合法：30%50%PEG(10006000)誘導，滲透壓，低速離心10002000g電融合:細胞在電場作用下,細胞內(nèi)產(chǎn)生偶極化,促使細胞排列成串,外加瞬間高頻直流強電壓作用,原生質(zhì)膜穿孔復原(4) 原生質(zhì)體再生再生培養(yǎng)基高滲，無機鹽/有機物，防止機械損傷(5) 融合子選擇營養(yǎng)缺陷型, 抗性, 熒光染色標記, 鈍化選擇(親本一方融合前50℃23h) ；連續(xù)傳代幾次四種方法比較類型受體\供體是否接觸DNA傳遞媒介重組涉及DNA大小接合是F因子部分染色體轉導否噬菌體一個或少數(shù)幾個基因轉化否無一個或少數(shù)幾個基因原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體 +原生質(zhì)體2個細胞的基因組八．微生物與基因工程 基因工程（genetic engineering）或重組DNA技術(rebinant DNA technology)：是指對遺傳信息的分子操作和施工，即把分離到的或合成的基因經(jīng)過改造，插入載體中，導入宿主細胞內(nèi)，使其擴增和表達，從而獲得大量基因產(chǎn)物，或者令生物表現(xiàn)出新的性狀。 M與基因工程的關系 ? 基因工程所用克隆載體主要是用病毒、噬菌體和質(zhì)粒改造而成；? 基因工程所用千余種工具酶絕大多數(shù)是從微生物中分離純化得到的；? 微生物細胞是基因克隆的宿主，即使植物基因工程和動物基因工程也要先構建穿梭載體，使外源基因或重組體DNA在大腸桿菌中得到克隆并進行拼接和改造，才能再轉移到植物和動物細胞中；①能夠高效吸收外源DNA；②具有使外源DNA進行高效復制的酶系統(tǒng)；③不具有限制修飾系統(tǒng)；④不具有DNA重組系統(tǒng)，常用重組缺陷型（RecA）；⑤便于進行基因操作、篩選和大量繁殖；⑥具有安全性。? 為大規(guī)模表達各種基因產(chǎn)物，從事商品化生產(chǎn)，通常都是將外源基因表達載體導入大腸桿菌或是酵母菌中以構建成工程菌，利用工廠發(fā)酵來實現(xiàn)的；? 微生物的多樣性，尤其是抗高溫、高鹽、高堿、低溫等基因，為基因工程提供了極其豐富而獨特的基因資源；? 有關基因結構、性質(zhì)和表達調(diào)控的理論主要也是來自對微生物的研究中取得的，或者是將動、植物基因轉移到微生物中后進行研究而取得的，因此微生物學不僅為基因工程提供了操作技術，同時也提供了
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