菊花嫩莖快繁技術(shù)的研究生物技術(shù)及應(yīng)用-閱讀頁
2025-04-19 23:51本頁面
【正文】 據(jù)著重要的地位, 已成為人們研究的重點(diǎn)；其中人們更側(cè)重于成分提取與分析研究, 人們已經(jīng)意識到菊花的化學(xué)成分、色素研究對開發(fā)其有效成分有重大意義[2]。器材與用具：超凈工作臺(tái)、 解剖刀、 長柄鑷子、 架臺(tái)、無菌濾紙、 酒精燈、火柴、 標(biāo)簽、棉球、廢液缸、垃圾袋、皮筋、精密pH試紙（～）、玻璃三角瓶（150ml）、封口膜、培養(yǎng)皿。 適宜的溫度范圍為24～ 26℃，28℃培養(yǎng)時(shí)生長快但增殖倍數(shù)低, 26℃時(shí)增殖倍數(shù)最高,但溫度在27～ 29℃時(shí), 玻璃化現(xiàn)象較為嚴(yán)重。培養(yǎng)基pH值對玻璃苗發(fā)生也有影響，在 pH ～，玻璃苗百分率以pH ，pH ；培養(yǎng)過程中注意通氣以盡可能降低培養(yǎng)容器內(nèi)的空氣相對濕度和改善氧氣供應(yīng)狀況，有助于克服玻璃化光周期:以12～ 16h/ d 為宜。光照強(qiáng)度。 4000～ 5000lx 的光照使試管苗的分化增殖倍數(shù)提高, 但對生根則相反。 表1 培養(yǎng)基制作配比培養(yǎng)基配比蔗糖瓊脂pH叢生芽誘導(dǎo)MS++3%%繼代培養(yǎng)MS++3%%生根培養(yǎng)1/2MS+3%%，120min。滅菌前要檢查滅菌鍋是否缺水，滅菌時(shí)要正確操作，滅菌一定要徹底，中途期間不要打開滅菌鍋。啟動(dòng)超凈工作臺(tái),操作之前用 70 %的酒精擦臺(tái)面。 選取在脫毒實(shí)驗(yàn)中成功移栽上盆而且長勢健壯的植株作為實(shí)驗(yàn)材料,選取莖作為實(shí)驗(yàn)材料[8]。在無菌條件下將其切成2厘米左右?guī)в幸秆康男《?，用鑷子夾取切好的外殖體材料,然后按極性方向直立迅速接種到錐形瓶的培養(yǎng)基中,深約 2～3 mm,注意培養(yǎng)瓶口始終在火焰下方,盡量使切口接觸培養(yǎng)基，每個(gè)錐形瓶可接種 3～4 塊外殖體。最后在瓶壁上貼上標(biāo)簽,注明接種材料的名稱、 編號和接種日期。接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。1) ℃。 繼代培養(yǎng)將叢生芽切割下,分開接種于繼代培養(yǎng)基之上,一般15d 后可長出叢生芽,取叢生芽轉(zhuǎn)接于新的培養(yǎng)基繼代上,則可在更短的時(shí)間內(nèi)(約10d) 長出叢生芽,繼代培養(yǎng)的次數(shù)越多,從接種到長出叢生芽所需的時(shí)間越短,但不短于7d ,若不及時(shí)轉(zhuǎn)接,芽苗會(huì)迅速長高。待生根后,將生根試管苗開蓋練苗,移栽。2結(jié)果與分析2．1初代培養(yǎng)不同外植體對芽誘導(dǎo)的影響[9]，外植體誘導(dǎo)成芽時(shí)間有差異[4]。在培養(yǎng)過程中我們發(fā)現(xiàn)有很多都褐變死亡。為了證明VC能抑制褐變我們做了組對比實(shí)驗(yàn)，在1，2組中我們沒加入VC，在3，4組中我們加入了VC，其他條件不變（如表2）?？梢娫诮臃N前先用100 mg/ L Vc 浸泡外植體1 h ,在其以后的繼代過程中加入 200 mg/ L 聚乙烯吡咯吡烷酮（PVP） ,可有效地控制褐變現(xiàn)象[5]。2．2繼代培養(yǎng)表3 繼代培養(yǎng)記錄表：次數(shù)接種量真菌污染細(xì)菌污染褐變玻璃化正常成活率1992130304545%2841527004250%31171833036354%41082433304844%統(tǒng)計(jì)：408781236319849%2．3生根誘導(dǎo)及移栽對大多數(shù)菊花而言加入適量的生長素效果會(huì)更好, 從生根的天數(shù)和生根的質(zhì)量看IBA 較NAA 好[ 6]。當(dāng) 6BA 濃度為0. 5mg/L,與其他濃度相比差異極顯著(P 0. 01) [7] 。結(jié)果顯示,試驗(yàn)所采用的誘導(dǎo)培養(yǎng)基芽分化雖然較少,但分化的芽都屬有效芽。因時(shí)間和材料問題本次試驗(yàn)為能完成生根培養(yǎng)和移栽，但通過查閱資料得知：當(dāng)繼代培養(yǎng)的叢生芽長至2. 5～3. 5cm,具2～3 片葉時(shí),可將其切成單株,轉(zhuǎn)接到各種生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),一般1 周后有根出現(xiàn)[10]。在試驗(yàn)中,當(dāng)試管苗具有4～5 片葉,5～6 條根時(shí)即可移栽。細(xì)菌污染主要是我們的操作部規(guī)范，接種時(shí)沒有嚴(yán)格按照操作制，在接種時(shí)說話，或者隨處走動(dòng)，自身消毒不徹底導(dǎo)致。通過本次實(shí)驗(yàn)我們了解到不同的激素組合對不定芽的增殖也有影響。在相同激素水平、相同條件下, 不同菊花品種的生長有很大的差異。我們在繼代增殖試驗(yàn)過程中注意到,采用0. 7 %的瓊脂比采用0. 1 %的植物膠效果要好。而且在實(shí)驗(yàn)過程中可能會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)基不凝固現(xiàn)象，那么我們首先考慮的對象就是瓊脂，而這導(dǎo)致這現(xiàn)象有2種可能：一、瓊脂放置時(shí)間過長，效果削弱；二、可能要對其百分比進(jìn)行調(diào)整。菊花為試管苗快速繁殖系數(shù)較高的一種植物. 在實(shí)踐中,如何建立高效的無菌系、選擇合適的培養(yǎng)基、控制各個(gè)階段的培養(yǎng)條件是技術(shù)關(guān)鍵。感謝‥‥‥‥
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