微生物免疫學實驗報告-閱讀頁
2025-04-19 23:22本頁面
【正文】 (2) 病原性球菌標本的觀察葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌、腦膜炎球菌、淋球菌的形態(tài)觀察（操作）。(4) 膿汁標本中病原性球菌的分離鑒定的程序 直接涂片 革蘭染色 鏡檢膿汁標本 觀察菌特征及溶液血情況 接種血平板24h培養(yǎng)后觀察 取菌落涂片 革蘭染色 鏡檢 取菌落作生化反應、致病力試驗(5) 抗“O”試驗原理：乙型溶血性鏈球菌能產生溶血素“O”，能溶液解人和兔紅細胞并有很強的抗原性，能刺激機體產生抗溶血素“O”（抗體）。本法是將病人血清與已知溶血素“O”抗原先混合，作用一段時間后，再加入紅細胞懸液。 方法：取小試管6支，分別編號，分兩排置于試管架上（13為第一排，46為第二排）。 分別加鏈球菌溶血素“O”，充分混勻，置于37oC水浴箱中10min。結果：以完全不溶液血的血清最高稀釋度為抗“O”抗體的效價。用途：600單位及以上有診斷意義，用于輔助診斷活動性風濕。用接種環(huán)取葡萄球菌少許，混勻。出現(xiàn)顆粒狀凝集的為陽性、反之為陰性。了解腸道桿菌的分離鑒定的程序。教學重點腸道桿菌形態(tài)標本的觀察。肥達試驗。 了解腸道桿菌的分離鑒定的程序。實驗內容：腸道桿菌形態(tài)標本的觀察。肥達試驗。實驗方法：一、腸道桿菌的形態(tài)觀察【材料】大腸桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌革蘭染色示教片。二、腸道桿菌培養(yǎng)物與生化反應觀察【材料】大腸桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌及乙型副傷寒桿菌在SS培養(yǎng)基、雙糖鐵、尿素及蛋白胨水培養(yǎng)基上24小時培養(yǎng)物。表1 五種腸道桿菌在SS培養(yǎng)基上的菌落特征菌種培養(yǎng)基大腸桿菌變形桿菌傷寒沙門菌乙型副傷寒沙門菌痢疾桿菌瓊脂平板菌落紅色或呈紅色之中心，不透明，直徑23mm左右菌落無色半透明，有時帶黑心，直徑2mm左右，有時呈膜狀生長。同傷寒桿菌菌落，菌落可帶黑心。EMB菌落扁平，紫黑色，具有金屬光澤圓形菌落，扁平，無色或半透明，似沙門菌小至中等透明或半透明，不發(fā)酵乳糖無色或半透明，光滑不發(fā)酵乳糖，中等大小觀察大腸桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌及乙型副傷寒桿菌在雙糖鐵、尿素及蛋白胨水培養(yǎng)基上生長情況，注意生化反應與動力的鑒別。如不能立即送檢，可將標本保存于30%甘油緩沖鹽水中。【方法】 按上述檢驗程序進行第一日的檢驗步驟，即用接種環(huán)挑取新鮮糞便標本，劃線接種于EMB或SS平板上，37℃培養(yǎng)24小時。在EMB平板上非致病菌菌落較大、紫黑色、有金屬光澤，不透明，而可疑菌落略小，半透明?！窘Y果】上層下層動力H2S++非致病菌++痢疾桿菌+++傷寒桿菌++副傷寒桿菌【用途】初步鑒別腸道致病菌用，可以觀察葡萄糖、乳糖的發(fā)酵，并可觀察有無H2S產生及細菌有無動力。經菌分解葡萄糖產酸時，使培養(yǎng)基的下層由紅變黃，斜面培養(yǎng)基中雖然也含有葡萄糖但量小，且分解產生的酸為揮發(fā)性酸并且可被氧化，所以只發(fā)酵葡萄糖的細菌斜面仍為紅色；產酸并產氣時，培養(yǎng)基中有氣泡或裂隙出現(xiàn)。培養(yǎng)基中含有硫酸亞鐵，如有硫化氫產生，則生成黑色硫化亞鐵，使培養(yǎng)基中出現(xiàn)黑色。血清學鑒定【材料】沙門菌屬、志賀菌屬多價診斷血清，生理鹽水，載玻片等。用接種環(huán)自雙糖鐵培養(yǎng)基上挑取少許菌苔，分別磨勻于生理鹽水與相應診斷血清中，搖動玻片12分鐘，觀察結果生理鹽水+細菌診斷血清+細菌（2）凝集試驗陽性者，報告結果；凝集試驗陰性者應保留菌種進一步鑒定。如在抗體上標記熒光，則形成痢疾桿菌熒光菌球。，放上蓋玻片，在熒光顯微鏡下觀察。隨孵育時間增長，菌球結構致密，周圍較圓，整齊，菌球周圍有刺毛，孵育時間短時，菌球往往呈多形性。，從后向前，；；；；，振蕩試管架，混勻，置于56℃水浴箱2~4小時，放冰箱過夜，或放置37℃水浴箱18小時后觀察結果肥達氏反應操作表 單位:ml試管1 12 23 34 45 5678（對照）生理鹽水1：10 病人血清→棄去診斷菌液05血清最終稀釋度1：401：801：1601：3201：6401：12801：2560－結 果【結果與分析】先觀察對照管，正確結果應無凝集現(xiàn)象，再觀察各試驗管的凝集現(xiàn)象，凝集程度以“+”多少表示之。（+++）強，上液輕度混濁，細菌大部分凝集沉淀于管底。（）不凝，液體呈乳狀與對照管相同。一般認為O抗體效價在1：80以上，H抗體效價在1：160以上，有輔助診斷意義。（2）非腸熱癥患者，由于曾接種過傷寒，副傷寒疫苗或以往在流行區(qū)有過隱性感染或患過傷寒，副傷寒，近期又感染流感、或布魯氏菌病時，可產生高效價的H凝集素和較低效價的O凝集素，此種反應稱非特異回憶反應，也可呈現(xiàn)陽性結果，其它如結核病、敗血癥、斑疹傷寒、肝炎等也可出現(xiàn)類似反應。上述這些都有別于現(xiàn)癥感染。大約占10%，故陰性結果不能完全排除腸熱癥的診斷。一般以雙份血清（急性期和恢復期）對比，凝集價有明顯上升者作為新近感染的指標。
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