微生物免疫學(xué)實驗報告-預(yù)覽頁
【正文】 次消毒后，用接種環(huán)取菌落中的細(xì)菌或菌液或標(biāo)本少許，在生理鹽水中涂勻制成約1cm左右的薄膜，并將接種環(huán)再次消毒后，置于試管架中。㈡革蘭染色法（操作）初染：滴加結(jié)晶紫染液于標(biāo)本上，以覆蓋滿為度，染1分鐘后水洗，灑去積水。先低倍鏡觀察效果，再用高倍鏡看清物象，滴加鏡油后用油鏡觀察。教學(xué)重點培養(yǎng)基的制備教學(xué)難點細(xì)菌代謝產(chǎn)物教學(xué)方法請選擇你授課時所采用的教學(xué)方法（在括號中畫“√”）：講授法﹝﹞，討論法﹝﹞，演示法﹝﹞，案例法﹝﹞，發(fā)現(xiàn)法﹝﹞，探究法﹝﹞，談話法﹝﹞，實驗法﹝√﹞，參觀法﹝﹞，考察法﹝﹞，自學(xué)輔導(dǎo)法﹝﹞，練習(xí)法（習(xí)題或操作課）﹝﹞，讀書指導(dǎo)法﹝﹞，聽說法﹝﹞，寫生法﹝﹞，視唱法﹝﹞，工序法（技能課）﹝﹞，實習(xí)作業(yè)法﹝﹞，其他﹝﹞教學(xué)手段請選擇你授課時所采用的教學(xué)手段（在括號中畫“√”）：實物﹝﹞，多媒體﹝﹞，投影﹝﹞，影像﹝﹞，CAI課件﹝﹞，PPT﹝﹞，標(biāo)本﹝﹞，掛圖﹝﹞，模型﹝﹞，其他﹝√﹞討論、思考題、作業(yè)實驗報告參考文獻(xiàn) (1)楊致邦，【M】..(2)【M】.中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社，2013年.一、實驗內(nèi)容培養(yǎng)基的制備（操作）細(xì)菌的人工培養(yǎng)法（操作）細(xì)菌代謝產(chǎn)物觀察（示教）藥敏試驗（示教）二、實驗?zāi)康氖煜ぜ?xì)菌的培養(yǎng)方法，進(jìn)一步掌握人工培養(yǎng)細(xì)菌的臨床意義。液體培養(yǎng)基的制備1）稱量：稱取牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化鈉5g，置于1000ml三角燒瓶中，加入蒸餾水1000ml。⑶計算： ，剩余的培養(yǎng)基則需加入1 molNaOH為Xml。 ㈡細(xì)菌的人工培養(yǎng)法（操作）平板劃線接種法：1）點燃酒精燈，右手以握筆式持接種環(huán)，在火焰上滅菌后稍冷，挑取葡萄球菌、大腸桿菌混合菌液一環(huán)。再次滅菌管口，塞好棉塞。大腸桿菌和傷寒桿菌分解糖的結(jié)果如下：菌 種葡萄糖乳 糖大腸桿菌傷寒桿菌＋＋＋－硫化氫試驗：某些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸，產(chǎn)生硫化氫氣體。2）在無菌接種箱內(nèi)，用左手啟開平板蓋，用無菌鑷子夾取抗菌素紙片，間隔5cm放置平板培養(yǎng)基表面，蓋好平板，貼上標(biāo)簽，置于37OC溫箱中培養(yǎng)24h后，觀察結(jié)果。 了解常用消毒滅菌器械的使用方法，初步掌握紫外線的滅菌方法護(hù)注意事項。 四、實驗方法㈠空氣中細(xì)菌的檢查（操作）取普通瓊脂平板4個，啟開皿蓋，培養(yǎng)基面向上，分別放在實驗室、寢室、室外及無菌操作臺等處，暴露10?20min后加蓋。％碘酒消毒右手食指后，再用消毒后的手食指輕輕涂抹培養(yǎng)基表面，加蓋。于平板底部貼上標(biāo)簽，寫明班、組、菌名、日期，底向上，置于37OC溫箱中培養(yǎng)24h后，觀察結(jié)果。⑶于平板底部貼上標(biāo)簽，寫明班、組、菌名、日期，底向上，置于37OC溫箱中培養(yǎng)24h后，觀察結(jié)果。⑷用途：用于耐高溫和不怕潮濕的物品滅菌。教學(xué)重點病原性球菌標(biāo)本的觀察。3 了解抗“O”試驗的原理、方法及臨床意義。實驗方法：(2) 病原性球菌標(biāo)本的觀察葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌、腦膜炎球菌、淋球菌的形態(tài)觀察（操作）。本法是將病人血清與已知溶血素“O”抗原先混合，作用一段時間后，再加入紅細(xì)胞懸液。 分別加鏈球菌溶血素“O”，充分混勻，置于37oC水浴箱中10min。用途：600單位及以上有診斷意義，用于輔助診斷活動性風(fēng)濕。出現(xiàn)顆粒狀凝集的為陽性、反之為陰性。教學(xué)重點腸道桿菌形態(tài)標(biāo)本的觀察。 了解腸道桿菌的分離鑒定的程序。肥達(dá)試驗。二、腸道桿菌培養(yǎng)物與生化反應(yīng)觀察【材料】大腸桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌及乙型副傷寒桿菌在SS培養(yǎng)基、雙糖鐵、尿素及蛋白胨水培養(yǎng)基上24小時培養(yǎng)物。同傷寒桿菌菌落，菌落可帶黑心。如不能立即送檢，可將標(biāo)本保存于30%甘油緩沖鹽水中。在EMB平板上非致病菌菌落較大、紫黑色、有金屬光澤，不透明，而可疑菌落略小，半透明。經(jīng)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸時，使培養(yǎng)基的下層由紅變黃，斜面培養(yǎng)基中雖然也含有葡萄糖但量小，且分解產(chǎn)生的酸為揮發(fā)性酸并且可被氧化，所以只發(fā)酵葡萄糖的細(xì)菌斜面仍為紅色；產(chǎn)酸并產(chǎn)氣時，培養(yǎng)基中有氣泡或裂隙出現(xiàn)。血清學(xué)鑒定【材料】沙門菌屬、志賀菌屬多價診斷血清，生理鹽水，載玻片等。如在抗體上標(biāo)記熒光，則形成痢疾桿菌熒光菌球。隨孵育時間增長，菌球結(jié)構(gòu)致密，周圍較圓，整齊，菌球周圍有刺毛，孵育時間短時，菌球往往呈多形性。，從后向前，；；；；，振蕩試管架，混勻，置于56℃水浴箱2~4小時，放冰箱過夜，或放置37℃水浴箱18小時后觀察結(jié)果肥達(dá)氏反應(yīng)操作表 單位:ml試管1 12 23 34 45 5678（對照）生理鹽水1：10 病人血清→棄去診斷菌液05血清最終稀釋度1：401：801：1601：3201：6401：12801：2560－結(jié) 果【結(jié)果與分析】先觀察對照管，正確結(jié)果應(yīng)無凝集現(xiàn)象，再觀察各試驗管的凝集現(xiàn)象，凝集程度以“+”多少表示之。（）不凝，液體呈乳狀與對照管相同。（2）非腸熱癥患者，由于曾接種過傷寒，副傷寒疫苗或以往在流行區(qū)有過隱性感染或患過傷寒，副傷寒，近期又感染流感、或布魯氏菌病時，可產(chǎn)生高效價的H凝集素和較低效價的O凝集素，此種反應(yīng)稱非特異回憶反應(yīng)，也可呈現(xiàn)陽性結(jié)果，其它如結(jié)核病、敗血癥、斑疹傷寒、肝炎等也可出現(xiàn)類似反應(yīng)。大約占10%，故陰性結(jié)果不能完全排除腸熱癥的診斷。
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