科大高分子課件四聚合物在生物高分子分離中的應(yīng)用-閱讀頁
2025-01-31 20:26本頁面
【正文】 ，堿性蛋白質(zhì)（ pI＝ 8）與毛細管壁發(fā)生吸附 １ . 極端 pH值法 ? pH高于蛋白質(zhì)的 pI時，毛細管內(nèi)壁對蛋白質(zhì)產(chǎn)生靜電排斥抑制吸附，但是，蛋白質(zhì)存在的自然狀態(tài)為 pH4－ 10，高 pH如 ，容易使蛋白質(zhì)變性或者水解。２．聚合物在蛋白質(zhì)分離中的應(yīng)用 蛋白質(zhì)是由氨基酸通過酰胺鍵連接而成的高分子，兩性，存在等 電點，因其空間結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，有親水或疏水之分。 ?蛋白質(zhì)在低于等電點時會帶上正電荷，在高于等電點時帶負電荷． ?若緩沖溶液的 pH值低于蛋白質(zhì)等電點，蛋白質(zhì)則吸附 H＋ 而帶正電荷，由于 靜電相互作用，蛋白質(zhì)與管壁發(fā)生 吸附。 ? pH小于 （熔融硅或石英的等電點）時，蛋白質(zhì)的質(zhì)子化導(dǎo)致其質(zhì)荷比差別較小，分辨率難以提高。 ? 一般認為，使蛋白質(zhì)混合物分離的首選 pH值應(yīng)和蛋白質(zhì)混合物的 pKa值基本一致。 ? 中性鹽：如磷酸鹽，硫酸鉀等。 ? 有機溶劑：醇類、乙腈、丙酮、四氫呋喃、二甲亞砜等，其中最常用的是甲醇和乙腈。目前最常用的方法是用聚合物對毛細管內(nèi)壁進行改性處理。分離條件：毛細管，內(nèi)徑 50μm，總長 （有效長度 40cm）；注入， 3 kV, 5 s；緩沖液， 40mM磷酸鈉；分離， 309 V/cm (2)物理吸附的毛細管涂層 目前使用的聚合物： 中性的聚合物－已經(jīng)廣泛用于 DNA和其它一些生物大分子的分析，但是由于蛋白質(zhì)的吸附作用，使得對蛋白質(zhì)的分析仍有一定難度。 帶疏水基團的聚合物－聚乙烯基吡咯烷酮，聚 N,N二甲基丙烯酰胺可以形成穩(wěn)定的涂層，但是由于疏水基團與蛋白質(zhì)之間的相互作用使得分離效率下降。 2 = Cytochrome C。 2 = Cytochrome C。 2 = Cytochrome C。 2, cytochrome c。 (B) Schematic illustration of copolymers of different morphologies capillary coating procedure (a) PEO113bP4VP45, (b) PEO113bP4VP90, (c) PEO113bP4VP113, and (d) PEO113bP4VP294 Analysis of saliva samples by PEO113bP4VP294 coated capillary. Saliva samples were diluted to 2fold using deionized water. Samples (A) without and (B) with spiking of / mL lysozyme were injected. Separation conditions: 40mM phosphatecitrate buffer, pH 。 40cm capillary (30 cm to the detector)。 α1AT, α1antitrypsin。 βlp, βlipoprotein。 IgA, immunoglobulin A。 (b) % w/v。 2, cytochrome c。 (b) 3% w/v。 (d) 4% w/v. Conditions: Separation electric field strength of (a), (b), and (c) is –6 kV, separation electric field strength of (d) is –8 kV. Separation of basic proteins using quasiIPN3 coated capillary at different pH values. 1=cytochrome c。 3= Ribonuclease A. J. Sep. Sci., 2022, 32, 671680. ? 目前仍未找到一種普適性的涂層對所有種類的蛋白質(zhì)分離都是有效的，因為不同種類的蛋白質(zhì)等電點不同，這就需要用于管壁涂覆的聚合物涂層有較寬的 pH適用范圍，并且期望可以通過改變緩沖溶液的 pH值實現(xiàn)對電滲流大小的控制，這應(yīng)該是未來用于分離蛋白質(zhì)的聚合物涂層的一個發(fā)展方向
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