體碩士課程ppt課件-閱讀頁
2025-01-29 08:48本頁面
【正文】 胞中總有 一 定 的 拷 貝 數(shù) 同源性 ──不同質(zhì)粒之間可能存在一定的 同源區(qū) 。 消除性 ──存在于宿主細胞中的質(zhì)粒 ， 可用 某 些 辦 法 將 它 除 掉 。 表現(xiàn)型 ──不同的質(zhì)粒有不同的表型特性 。 質(zhì)粒的分離和純化 細菌的培養(yǎng)和質(zhì)粒擴增 細菌的收集和裂解 質(zhì)粒 DNA的純化 理想質(zhì)粒載體所必需具備的條件 1 . 質(zhì)粒較小 低分子量的質(zhì)粒通常 拷貝數(shù)較多 克隆時所預(yù)期的基因表物的數(shù)量較大有可能找到合適的單一限制酶切點 ， 便于制作酶譜外源 DNA容量較大 ,質(zhì)粒小 容易轉(zhuǎn)化 （ 大于 15kb時 ， 成為轉(zhuǎn)化效率制約因素 )操作容易 掌握 ， 容易分離 ， 不易斷裂 2 . 帶有可供選擇的標(biāo)記 對抗菌素的抗性 ， Amp, Tet, Cm, Kana, Neo ,? 互補 單一的限制性酶切位點可供外源 DNA定點插入；較多不同的單一限制酶酶切位點 ， 可有選擇地供帶有不同末端的外源基因插入 4 . 具有復(fù)制起始點 質(zhì)粒 DNA 增 殖 所 必 不 可 少 的 結(jié) 構(gòu) 。 DNA長度不超過野生型 DNA長度 （ ） 的75~ 105% 范圍進行包裝 ? 噬菌體運載體 改造野生型 ? DNA： 突變 /缺失等手段消除過多的酶切位點及非必需區(qū)在非必要區(qū)插入外源 基 因 （ 如 lacZ 基因 ） 改變噬菌斑的顏色 、 濁度等 ，以利篩選 插入型載體： 改造后使 ? DNA分子的中心僅有幾個單一酶位點插入外源 DNA片段，如 ? gt10 可克隆 10kb外源片段 置換型載體： 基因組中間部分約三分之一的基因組可以用外源基因進行替換，從而擴大載體的裝載容量，如 EMBL系列可克?。?0kb外源片段 ． 粘粒 （ Cosmid） 粘粒是用基因工程技術(shù)組建的大腸桿菌質(zhì)粒 具有： a． ? 噬菌體的 Cos 位點 b. 整個 pBR322 的 DNA 順序 c. 可 容 納 35── 45kb 外源 DNA d. 有 抗 性 標(biāo) 記 及 多 種 限 制 性 酶 單 切 點 ， 像質(zhì)粒那樣在細胞中復(fù)制 ， 以感染方式進入 宿 主 細 避 開 了 大 質(zhì) 粒 轉(zhuǎn) 化 因 難 的 缺 點 M13 噬菌體運載體 M13是一種細線狀的單鏈 DNA噬菌體 ， 在分子生物學(xué)研究中主要用于 DNA的堿基順序分析 。 生活史
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