質粒dna的分離、純化-閱讀頁
2025-05-30 23:02本頁面
【正文】 orf管 中 ,加入 2倍體積的無水乙醇 ,振蕩混勻后臵于 20℃ 冰箱中 20分鐘，然后 4℃ 下 12021g離心 10分鐘。 吸除上清液 ,將管倒臵于衛(wèi)生紙上使液體流盡 ,真空干燥 10分鐘或室溫干燥。 三、操作步驟 實驗結果 ： 獲得質粒 DNA（ pUC118及 pEGFP） 四、注意事項 —— 材料準備 ? 使用處于對數(shù)期的新鮮菌體（老化菌體導致開環(huán)質粒增加） ? 培養(yǎng)時應加入篩選壓力，否則菌體易污染，質粒易丟失 ? 盡量選擇高拷貝的質粒，如為低拷貝或大質粒，則應加大菌體用量 ? 菌株不要頻繁轉接（質粒丟失） 四、注意事項 —— 細胞裂解 ? 菌體量適當。 ? 變性的時間不要過長（ 5分鐘），否則質粒易被打斷。 ? G＋ 菌、酵母質粒的提取，應先用酶法或機械法處理，以破壁。檢查抗生素使用濃度是否正確。 五、質粒 DNA提取常見問題 ?問題一：未提出質粒或質粒得率較低，如何解決？ 原因 對 策 1. 混有蛋白 2. 混有 RNA 3. 混有基因組 DNA 1. 不要使用過多菌體。細菌培養(yǎng)時間過長會導致細胞和 DNA的降解，培養(yǎng)時間不要超過 16小時。 2. 染色體 DNA與質粒 DNA分離的主要依據(jù)是什么？ 六、問題與討論
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