發(fā)光法測定菌體atp含量-閱讀頁
2025-05-29 20:51本頁面
【正文】 包括真空泵、濾瓶、緩沖瓶 濾膜采用 高溫加熱的作用主要是破碎細胞同時使細胞內(nèi) ATP水解酶失活 具體操作 迅速將濾膜轉(zhuǎn)移到沸水浴的緩沖液中，提取5min 將裝有 8ml緩沖液的試管置于沸水浴中量取一定體積的樣品進行抽濾 將提取液轉(zhuǎn)移到10ml容量瓶，定容，試管中殘留的提取液用少量TrisAectate緩沖液沖洗兩次倒入容量瓶中 混合均勻后置于 4186。測量得到樣品的相對發(fā)光值 . 2)測定樣品發(fā)光值 ,與標準曲線對比，得到樣品中的 ATP含量 , ATP含量可以轉(zhuǎn)化為微生物的濃度 . 測量熒光所用的儀器是 TD20/20熒光光度計，一般將儀器的設置延遲時間設為 60s 標準曲線制作 ?在測定管中加入 50 μl一定濃度的標準溶液和 50 μl緩沖液，測定管置于樣品室中，加入 100μl熒光素 熒光酶反應劑后迅速蓋上樣品室的蓋子，開始檢測。 ?以 ATP濃度的對數(shù)值 為 橫坐標 ，熒光反應值RLUS的對數(shù)值 為 縱坐標 ，繪制標準曲線。 樣品測定及結(jié)果 ?用 50 μl樣品提取液代代替標準 ATP試劑， 具體操作與制作標準曲線一樣 。 注意 :熒光素酶的活性衰減很快，在室溫下熒光素酶試劑只能保存 8h，如果測定過程 8h則應將熒光素酶反應劑健壯在多支小管中，于 4186。每次使用時都要提前將酶試劑取出，并室溫下放置一段時間，使其恢復到室瘟。C冷凍保存，保存過程中要避免反復解凍。
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